Роль нарушений идиотип-антиидиотипических взаимодействий в формировании замедления негативации серологических реакций у пациентов с ранними формами сифилиса, получавших специфическую терапию

Goal. To study the humoral immunity state in patients with the slowed down achievement of negative serologic reactions after the treatment of early onset forms of syphilis by means of examining the blood serum level of idiotypic and anti-idiotypic antibodies to cardiolipin and p17 Treponema Pallidum antigenic protein. Materials and methods. The study involved 324 patients (39.5% male and 60.5% female) with the slowed down achievement of negative serologic reactions. Primary (idiotypic) antibodies to cardiolipin and p17 protein were obtained using immunochromatographic assays with the help of the Bio Logik LP system. Purified antibodies were concentrated using the ultrafiltration technique with the aid of the XM-100А membrane. To obtain the rabbit antiserum to p17 Treponema Pallidum protein, chinchilla rabbits were immunized using the commercial recombinant p17 protein. To determine anti-cardiolipin idiotypic antibodies in the blood serum, the ELISa method optimized for detecting anti-cardiolipin antibodies was applied. To determine anti-cardiolipin anti-idiotypic antibodies as well as idiotypic and anti-idiotypic antibodies to p17 Treponema Pallidum protein, the standard ELISA method was applied. The following antigens were used to process the pads: F(ab)2 fragments of anti-cardiolipin antibodies (5 μg/mL), recombinant р17 T. pallidum protein (5 μg/mL) and F(ab)2 fragments of antibodies to р17 T. pallidum protein (10 μg/mL). The level of antibodies was assessed based on the absorbancy and expressed in conventional activity units using the K coefficient being the absorbancy of the serum under examination to the mean absorbancy of control serums ratio. The K value exceeding 1.5 conventional units indicated the increased level of antibodies. Results. Patients with the slowed down achievement of negative serologic reactions demonstrated a selective increase in the level of anti-idiotypic antibodies (AIAB) relative to T. pallidum antigens, cardiolipin and p17 protein, vs. first-order antibodies, which points at abnormal mutual regulation between idiotypic antibodies (IAB) and AIAB; the discovered phenomenon lays the immunochemical basis for the formation of a self-sustaining “vicious circle” contributing to the induction of high levels of antibodies to treponema antigens even when the pathogen was destroyed.Цель. Исследование состояния гуморального иммунитета у пациентов с замедлением негативации серологических реакций после лечения ранних форм сифилиса путем изучения содержания в сыворотке крови идиотипических (ИАТ) и антиидиотипических антител (АИАТ) к кардиолипину и р17 антигенному белку Treponema pallidum. Материал и методы. Обследованы 324 пациента (39,5% мужчин, 60,5% женщин) с замедлением негативации серологических реакций. Первичные (идиотипические) антитела к кардиолипину и белку р17 получали с помощью иммуноаффинной хроматографии с использованием системы Bio Logik LP. Очищение антитела концентрировали методом ультрафильтрации на мембране ХМ-100А. Для получения кроличьей антисыворотки к белку р17 T. pallidum проводили иммунизацию кроликов породы шиншилла коммерческим рекомбинантным белком р17. Для определения ИАТ к кардиолипину в сыворотке крови использовали методику иммуноферментного анализа (ИФА), оптимизированную для определения кардиолипиновых антител. Для определения АИАТ к кардиолипину, ИАТ и АИАТ к антигенному белку р17 T. pallidum применяли стандартную методику постановки ИФА. Для обработки планшет использовали следующие антигены: F(ab)2-фрагменты антител к кардиолипину (5 мкг/мл), рекомбинантный белок р17 T. pallidum (5 мкг/мл) и F(ab)2-фрагменты антител к белку р17 T. pallidum (10 мкг/мл). Уровень антител оценивали по оптической плотности (ОП) и выражали в условных единицах активности (усл. ед.) коэффициентом К, представляющим собой отношение значения ОП исследуемой сыворотки к среднему значению ОП контрольных сывороток. О наличии повышенного уровня антител свидетельствовало значение К, превышающее 1,5 усл. ед. Результаты. У пациентов с замедлением негативации серологических реакций показано избирательное повышение уровня АИАТ к антигенам T. pallidum - кардиолипину и белку р17 - по сравнению с антителами первого порядка, что является показателем нарушения взаимной регуляции между ИАТ и АИАТ; выявленный феномен является иммунохимической основой формирования самоподдерживающегося «порочного круга», способствующего индукции высокого уровня антител к антигенам трепонемы даже после устранения возбудителя