Thrombopoietin Secretion by Human Ovarian Cancer Cells

The thrombopoietin (TPO) gene expression in human ovary and cancer cells from patients with ovarian carcinomatosis, as well as several cancer cell lines including MDA-MB231 (breast cancer), K562 and HL60 (Leukemic cells), OVCAR-3NIH and SKOV-3 (ovarian cancer), was performed using RT PCR, real-time PCR, and gene sequencing. Human liver tissues are used as controls. The presence of TPO in the cells and its regulation by activated protein C were explored by flow cytometry. TPO content of cell extract as well as plasma of a patient with ovarian cancer was evaluated by ELISA. The functionality of TPO was performed in coculture on the basis of the viability of a TPO-dependent cell line (Ba/F3), MTT assay, and Annexin-V labeling. As in liver, ovarian tissues and all cancer cells lines except the MDA-MB231 express the three TPO-1 (full length TPO), TPO-2 (12 bp deletion), and TPO-3 (116 pb deletion) variants. Primary ovarian cancer cells as well as cancer cell lines produce TPO. The thrombopoietin production by OVCAR-3 increased when cells are stimulated by aPC. OVCAR-3 cell’s supernatant can replace exogenous TPO and inhibited TPO-dependent cell line (Ba/F3) apoptosis. The thrombopoietin produced by tumor may have a direct effect on thrombocytosis/thrombosis occurrence in patients with ovarian cancer

Radio-Frequency Plasma Polymerized Biodegradable Carrier for in vivo Release of Cis-Platinum

A low pressure plasma process based on plasma deposition has been used to develop a drug delivery strategy. In this study, a drug delivery system based on different layers of plasma co-polymerized Poly ε-caprolactone-Polyethylene glycol (PCL-PEG) co-polymers was deposited on biocompatible substrates. Cis-platinum (118 μgm/cm2) was used as an anti-cancer drug and incorporated for local delivery of the chemotherapeutic agent. The co-polymer layers and their interaction with cancer cells were analyzed by scanning electron microscopy. Our study showed that the plasma-PCL-PEG coated cellophane membranes, in which the drug, was included did not modify the flexibility and appearance of the membranes. This system was actively investigated as an alternative method of controlling localized delivery of drug in vivo. The loading of the anti-cancer drug was investigated by UV-VIS spectroscopy and its release from plasma deposited implants against BALB/c mice liver tissues were analyzed through histological examination and apoptosis by TUNEL assay. The histological examination of liver tissues revealed that when the plasma-modified membranes encapsulated the cis-platinum, the Glisson\u27s capsule and liver parenchyma were damaged. In all cases, inflammatory tissues and fibrosis cells were observed in contact zones between the implant and the liver parenchyma. In conclusion, low pressure plasma deposited uniform nano-layers of the co-polymers can be used for controlled release of the drug in vivo

Characteristics of platelet aggregation induced by the monoclonal antibody ALB6 (acute lymphoblastic leukemia antigen p 24) Inhibition of aggregation by ALB6Fab

AbstractThe leukemia-associated cell surface antigen p 24 is found on normal platelets as well as on Bernard Soulier syndrome and thrombasthenia type I platelets. ALB6 IgG (a monoclonal antibody against p 24) induces the aggregation of platelets from normal donors but not from thrombasthenia. In contrast, ALB6 Fab inhibits platelet aggregation induced by collagen, ADP, thrombin, ionophore A 23187 and ALB6 IgG. The results suggest that ALB6 interferes with a mechanism common to all aggregation pathways; the possible mechanisms are discussed

Implication du microenvironnement sur la survenue de la maladie métastatique et l'apparition d'une maladie résiduelle dans les adénocarcinomes ovariens séreux.

Trop souvent diagnostiqués à des stades tardifs du fait de leur quasi asymptomatie, les adénocarcinomes séreux ovariens posent un véritable problème de santé publique. Malgré les progrès récents de prise en charge chirurgicale, l émergence d une maladie résiduelle microscopique chimiorésistante impacte grandement le pronostic des patientes.Le microenvironnement tumoral est un acteur clé de la progression tumorale et de l émergence de résistances aux traitements anticancéreux. Durant ces travaux de thèse, nous nous sommes intéressés à deux composants majeurs du stroma tumoral, d une part les cellules souches mésenchymateuses, d autre part les cellules endothéliales.Nous avons pu démontrer que les cellules souches mésenchymateuses participent à la progression tumorale et l émergence de résistances. Enfin nous avons démontré que les cellules endothéliales, via la production de facteurs angiocrines, participent à la chimiorésistance des cellules tumorales ovariennes.Dans ce travail, nous avons pu définir de nouvelles cibles thérapeutiques mettant en jeu la relation entre les cellules tumorales ovariennes et l hôte.Ovarian cancers constitute a poor prognosis disease. Due to their absence of symptoms, ovarian cancers are generally diagnosed at late stages. Despite major breakthrough regarding ovarian cancer surgery, minimal residual disease-induced relapse is still a hurdle for clinicians.Tumor microenvironment is a key actor on disease progression and resistance to therapy. In this study, we have focused on two major components of the tumor stroma, on one hand, the mesenchymal stem cells, and the endothelial cells on the other hand.We were able to demonstrate that mesenchymal stem cells are critically involved in ovarian cancer progression and resistance to therapy, while the endothelium, through production of angiocrine factors, is deeply involved in resistance of ovarian cancer cells to platinum and taxane based therapy.Here, we set forth the idea that disrupting the relationship between ovarian cancer cells and their host stroma constitute a new therapeutic window.PARIS11-SCD-Bib. électronique (914719901) / SudocSudocFranceF

Cancer de l'ovaire et immunité anti-tumorale (Rôle du Human Leukocyte Antigen-G (HLA-G) .)

Le cancer de l ovaire, avec plus de 15.000 décès prévus en 2012, est le cancer gynécologique le plus meurtrier. Alors qu'environ 80% des patientes qui répondent à une chimiothérapie de première ligne, plus de 60% des patientes vont récidiver et seulement 44% seront encore en vie après 5 ans. Le rôle majeur du micro-environnement dans les processus de la carcinogénèse et la progression tumorale a été démontré par de nombreux travaux. Ce concept original de l initiation et de la progression tumorale fait appel à des approches conceptuelles et expérimentales très diverses. Dans cette étude, nous avons pu démontrer le rôle important de la molécule de tolérance HLA-G (Human Leukocyte Antigene-G), ainsi que son expression et sa régulation par les cellules cancéreuses et les cellules du micro-environnement tumoral. Nous avons étudié les différents facteurs impliqués dans les mécanismes d échappement tumoral et vérifié in vivo certains protocoles de chimiothérapie à base de médicaments immunomodulateurs.With more than 15,000 deaths anticipated in 2012, ovarian cancer is the most deadly gynecologic malignancy. While approximately 80% of patients will respond to frontline chemotherapy, more than 60% of patients will experience disease recurrence and only 44% will be alive at 5 years. The role of the microenvironment in the process of carcinogenesis and tumor progression has been demonstrated in various studies. This original concept of initiation and tumor progression solicits a very varied conceptual and experimental approach. In this study, we demonstrate the important role of the immunosuppressive molecule HLA-G (Human Leukocyte Antigen-G), and its expression and regulation by cancer cells and tumor microenvironment cells. We studied the various factors involved in the mechanisms immune of tumor escape from the immune system and finally we analyse in vivo some chemotherapy protocols based on the immunomodulatory drugs.PARIS11-SCD-Bib. électronique (914719901) / SudocSudocFranceF

Implication de l'Insulin-like Growth Factor (IGF-I), secrété par le microenvironnement tumoral, dans la survie et la chimiorésistance des cellules cancéreuses

Le microenvironnement, composé de différents éléments cellulaires et de la matrice extracellulaire, joue un rôle primordial dans le développement tumoral et la dissémination métastatique. Ainsi, l étude de ces interactions cellulaires est importante pour que des thérapies ciblées luttent contre la chimiorésistance des cellules tumorales. Ce travail de thèse a pour but d étudier le rôle du facteur de croissance IGF-I dans la chimiorésistance des cellules du cancer de l ovaire et des leucémies myéloïdes présente au sein du microenvironnement.Dans un premier temps, nous avons mis en évidence que la chimiorésistance des cellules du cancer de l ovaire, acquise grâce aux cellules hôtes (hospicells), est liée à la sécrétion de IGF-I par ces cellules. Nous avons également montré que IGF-I est impliqué dans la régulation de certains gènes ABC (MDR-1, MRP1, MRP2, et BCRP) via les voies de STAT3, Jak2, PI3K et ERK.Dans les leucémies myéloïdes, nous avons montré que IGF-I a un effet sur la prolifération des cellules tumorales. Il induit l expression de la protéine P-gp ainsi que la chimiorésistance des cellules sensibles à la chimiothérapie. Nous avons également déterminé le rôle de IGF-I dans la résistance des cellules leucémiques en présence des hospicells. Ces dernières ont une activité hyperangiogénique in vivo, lié à l HIF-1 et au VEGF, et inhibent les réponses immunes des lymphocytes T par production de NO.Nous avons déterminé le rôle crucial de MMP-9 dans la migration des cellules résistantes du cancer du sein exprimant la protéine P-gp et dans la formation d un réseau tubulaire, suggérant un lien existant entre l expression de P-gp et de MMP-9.The microenvironment, composed of several cellular elements and extracellular matrix, plays an important role in tumor development and metastasis. Thus, the study of these interactions is important for cell targeted therapies fighting against chemoresistant tumor cells. This thesis aims to investigate the role of growth factor IGF-I in the chemoresistance of ovarian cancer cells and myeloid leukemia, present in the microenvironment.As a first step, we demonstrated that drug resistance of ovarian cancer cells gained by host cells (hospicells) is related to the secretion of IGF-I by these cells. We have also demonstrated that IGF-I is involved in the regulation of genes ABC (MDR-1, MRP1, MRP2, and BCRP) via STAT3, Jak2, PI3K et ERK signaling pathways.In myeloid leukemia, we have shown that IGF-I has an effect on cell proliferation. It induces the expression of P-gp protein and chemoresistance of cells sensitive to chemotherapy. We also determined the role of IGF-I in the resistance of leukemic cells in the presence of hospicells. These cells have an in vivo hyperangiogenic activity, related to HIF-1 and VEGF, and inhibit immune responses of T cells by NO production.We determined the crucial role of MMP-9 in resistant cells migration of breast cancer expressing P-gp protein and in the formation of a tubular network, suggesting a link between the expression of P-gp and MMP-9.PARIS11-SCD-Bib. électronique (914719901) / SudocSudocFranceF

LES RECEPTEURS MINERALOCORTICOIDES ET LES CANAUX A NA + DES TISSUS EPITHELIAUX (ENAC) (EXPRESSION ET IMMUNOLOCALISATION DANS LES TISSUS OCULAIRES ET LES CELLULES NON EPITHELIALES)

LES RECEPTEURS MINERALOCORTICOIDES (RM) FONT PARTIES DE SUPERFAMILLE DES RECEPTEURS NUCLEAIRES ET INTERVIENNENT DANS LA REGULATION DE LA BALANCE HYDROSODIQUE VIA DES CANAUX A NA + DES TISSUS EPITHELIAUX (ENAC). CES DEUX PROTEINES SONT LARGEMENT REPARTIES DANS LE REGNE ANIMAL. NOTRE ENGAGEMENT DANS LA RECHERCHE DES RM ET DES CANAUX ENAC DANS LES TISSUS OCULAIRES ET DEUX LIGNEES CELLULAIRES RESULTENT DE L'IMPORTANCE DE CES DEUX PROTEINES QUI SE CARACTERISE PAR LEUR CONSERVATION AU COURS DE L'EVOLUTION. NOUS AVONS FABRIQUE AU SEIN DU LABORATOIRE DES ANTICORPS POLYCLONAUX DIRIGES CONTRE LE RM ET LE ENAC. ILS ONT PERMIS DE DETECTER CES PROTEINES PAR DES TECHNIQUES IMMUNOCHIMIQUES OU IMMUNOCYTOCHIMIQUES. LA BIOLOGIE MOLECULAIRE, ET L'UTILISATION DES AMORCES SPECIFIQUES, NOUS A PERMIS D'ETUDIER EXPRESSION DE CES PROTEINES DANS DIVERS TISSUS ET CELLULES ET DE LES IDENTIFIER PAR LE SEQUENSAGE. L'UTILISATION DE DIGOXIGENIN 11-DUTP NOUS A PERMIS D'EFFECTUER LA PCR SEMI-QUANTITATIVE ET D'ETUDIER LA REGULATION DE LEUR EXPRESSION. NOUS AVONS DEMONTRE POUR, LA PREMIERE FOIS, L'EXPRESSION D'ARNM CODANT POUR LE RM ET LE CANAL ENAC DANS LES TISSUS OCULAIRES COMME LA RETINE ENTIERE, LA COUCHE DES PHOTORECEPTEURS SEPAREE PAR LE VIBRATOME, LES CELLULES EPR, LES CELLULES DE MULLER GLIALES DE RAT (RMG), LES FIBROBLASTES CORNEENS HUMAINS ET DANS LES CELLULES NON EPITHELIALES : UNE LIGNEE CELLULAIRE HEL (HUMAN ERYTHROLEUKEMIA CELLS) ET UNE LIGNEE CELLULAIRE ENDOTHELIALE DES MICROVAISSEAUX DU DERME HUMAIN (HMEC-1). PAR AILLEURS, NOUS AVONS DEMONTRE LA REGULATION DE L'EXPRESSION DES CANAUX ENAC PAR LES HORMONES MINERALOCORTICOIDES DANS LES CELLULES EPR ET LES CELLULES RMG. NOUS AVONS EGALEMENT MONTRE L'EFFET DE CES HORMONES SUR LA PROLIFERATION CELLULAIRE DANS LES CELLULES FIBROBALSTES CORNEENS, LES CELLULES HEL ET LES CELLULES ENDOTHELIALES HMEC-1. DE PLUS NOUS AVONS DEMONTRE LA DISPOSITION DES RM ET DES CANAUX ENAC PAR RAPPORT AUX CYTOSQUELETTES DANS LES CELLULES RMG ET HMEC-1. L'ENSEMBLE DE NOS RESULTATS NOUS AMENE A NOUS INTERROGER SUR LES DIFFERENTS ROLES PHYSIOLOGIQUES POSSIBLES DE CES PROTEINES AINSI QUE LEUR IMPLICATION DANS DIVERSES PATHOLOGIES.PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocCentre Technique Livre Ens. Sup. (774682301) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Cancer et thrombose (Le rôle du récepteur de la protéine C)

LE KREMLIN-B.- PARIS 11-BU Méd (940432101) / SudocSudocFranceF

Influence du stroma et des cellules souches mésenchymateuses sur la dissémination et la résistance au traitement des carcinomes ovariens épithéliaux

Le cancer épithélial de l ovaire (EOC) a la particularité d être diagnostiqué à un stade avancé chez 75% des patientes et de récidiver dans un grand nombre de cas malgré une bonne réponse initiale à la chimiothérapie, expliquant ainsi son pronostic sombre. Le rôle du microenvironnement tumoral semble être de premier plan dans le développement et la survie des cellules cancéreuses mais il existe encore peu de données concernant les cellules mésenchymateuses souches (MSC). Dans ce travail nous avons donc cherché à déterminer les mécanismes moléculaires entre les MSC et les cellules tumorales ovariennes. Dans la première partie de ce travail, nous avons mis en évidence l émergence d un profile pro-métastatique des cellules tumorales ovariennes après contact avec les MSC. Nous avons ensuite développé un modèle d infiltration tumorale 3D révélant que les MSC augmentaient la dissémination tumorale ovarienne par la sécrétion d IL6. Enfin nous avons démontré que les MSC étaient capables d induire chez les cellules tumorales ovariennes un phénotype thermotolérant lié à la sécrétion CXCL12. Ces données vont donc toutes dans le même sens en démontrant les propriétés pro-tumorales des MSC et ouvrent de nouvelles perspectives de thérapies ciblant les interactions entre le stroma et la tumeur.Patients with epithelial ovarian cancer (EOC) are diagnosed with advanced stage in 75% of cases and most of them will relapse despite a good primary response to chemotherapy, thus explaining the bad prognosis of EOC. While tumor microenvironment seems to play an important role for the development and survival of cancer cells, there is only few data regarding the mesenchymal stem cells (MSC) in EOC. In this work we therefore aimed at identifying the molecular determinant between MSC and ovarian cancer cells. In the first part of this work, we demonstrated that ovarian cancer cells acquired pro-metastatic profile upon contact with MSC. We then showed that MSC could enhance ovarian cancer cells infiltration through IL6 secretion in an amniochorionic membrane based 3D model. Finally we showed that MSC could protect ovarian cancer cells from hyperthermia through CXCL12 secretion. Taken together, our data are concordant to reveal the pro-tumoral properties of MSC. Cytokine inhibitors interrupting the cross-talk between OCC and MSC should now be tested as new therapies for EOC.PARIS11-SCD-Bib. électronique (914719901) / SudocSudocFranceF