Estudio de la agregación amiloide de alfa-sinucleína por transformación líquido-sólido de gotas de proteína generadas por separación de fases

La enfermedad de Parkinson está ligada a la agregación amiloide de alfa-sinucleína (αS) en las neuronas. Cómo se origina este proceso aún no está claro. Actualmente la hipótesis de que la formación de condensados biomoleculares de αS generados por separación de fases líquido-líquido (LLPS) puede ser un paso previo para la agregación amiloide de la proteína in vivo, a través de un proceso de transición de líquido a sólido (LSPT) de los condensados, cobra cada vez más fuerza. Así, recientes investigaciones tratan de reproducir este proceso in vitro. En este trabajo estudiamos los factores que afectan a los procesos LLPS y LSPT empleando condiciones de formación de condensados biomoleculares de αS in vitro ya descritas, con el fin de aumentar la compresión de este proceso y elucidar la implicación de las distintas regiones de αS en ambos procesos. Nuestros resultados muestran la relevancia del tipo y concentración de agente macromolecular usado para inducir LLPS, de manera que concentraciones mayores de agente macromolecular favorecen LLPS de αS a concentraciones menores de proteína. Utilizando Alexa Fluor como sonda en una batería de variantes de αS con diferentes regiones de la proteína eliminadas, nuestros resultados sugieren un papel esencial del dominio C-terminal en la LLPS, probablemente por interacciones con el dominio N-terminal, en contra de lo sugerido en publicaciones anteriores. Por el contrario, el dominio central NAC, dispensable para la LLPS, posee una gran implicación en la LSPT de condensados de αS formados en las condiciones de estudio. Los resultados presentados no pueden establecer una relación directa entre la LSPT de los condensados de αS y la agregación amiloide, aunque varias evidencias experimentales, entre ellas el papel del dominio NAC en esta transición, sugieren que es posible que se produzcan procesos de agregación amiloide en el interior de los condensados de αS.<br /