T cell sensitivity to TGF-β is required for the effector function but not the generation of splenic CD8+ regulatory T cells induced via the injection of antigen into the anterior chamber

The introduction of antigen into the anterior chamber (AC) of the eye induces the production of antigen-specific splenic CD8+ regulatory T cells (AC-SPL cells) that suppress a delayed-type hypersensitivity (DTH) reaction in immunized mice. Because the generation of these regulatory T cells is also induced by exposure to transforming growth factor (TGF)-β and antigen or F4/80+ cells exposed to TGF-β and antigen in vitro, we investigated (i) whether these cells are produced in dominant negative receptor for transforming growth factor β receptor type II (dnTGFβRII) or Cbl-b−/− mice whose T cells are resistant to TGF-β, (ii) whether DTH is suppressed by wild type (WT) CD8+ AC-SPL cells in Cbl-b−/− and dnTGFβRII mice and (iii) the effect of antibodies to TGF-β on the suppression of DTH by CD8+ AC-SPL cells. DnTGFβRII immunized and Cbl-b−/− mice produced splenic CD8+ regulatory cells after the intracameral injection of antigen and immunization. The suppression of a DTH reaction by CD8+ AC-SPL cells in WT mice was blocked by the local inclusion of antibodies to TGF-β when WT splenic CD8+ AC-SPL cells were injected into the DTH reaction site. Moreover, the DTH reaction in immunized dnTGFβRII and Cbl-b−/− mice was not suppressed by the transfer of WT CD8+ AC-SPL cells to the site challenged with antigen. In aggregate, these observations suggest that T cell sensitivity to TGF-β is not an obligate requirement for the in vivo induction of CD8+ AC-SPL T cells but the suppression of an in vivo DTH reaction by CD8+ AC-SPL cells is dependent on TGF-β

Honokiol Induces Calpain-Mediated Glucose-Regulated Protein-94 Cleavage and Apoptosis in Human Gastric Cancer Cells and Reduces Tumor Growth

Background. Honokiol, a small molecular weight natural product, has been shown to possess potent anti-neoplastic and anti-angiogenic properties. Its molecular mechanisms and the ability of anti-gastric cancer remain unknown. It has been shown that the anti-apoptotic function of the glucose-regulated proteins (GRPs) predicts that their induction in neoplastic cells can lead to cancer progression and drug resistance. We explored the effects of honokiol on the regulation of GRPs and apoptosis in human gastric cancer cells and tumor growth. Methodology and Principal Findings. Treatment of various human gastric cancer cells with honokiol led to the induction of GRP94 cleavage, but did not affect GRP78. Silencing of GRP94 by small interfering RNA (siRNA) could induce cell apoptosis. Treatment of cells with honokiol or chemotherapeutics agent etoposide enhanced the increase in apoptosis and GRP94 degradation. The calpain activity and calpain-II (m-calpain) protein (but not calpain-I (mu-calpain)) level could also be increased by honokiol. Honokiol-induced GRP94 down-regulation and apoptosis in gastric cancer cells could be reversed by siRNA targeting calpain-II and calpain inhibitors. Furthermore, the results of immunofluorescence staining and immunoprecipitation revealed a specific interaction of GRP94 with calpain-II in cells following honokiol treatment. We next observed that tumor GRP94 over-expression and tumor growth in BALB/c nude mice, which were inoculated with human gastric cancer cells MKN45, are markedly decreased by honokiol treatment. Conclusions and Significance. These results provide the first evidence that honokiol-induced calpain-II-mediated GRP94 cleavage causes human gastric cancer cell apoptosis. We further suggest that honokiol may be a possible therapeutic agent to improve clinical outcome of gastric cancer

µ-Calpain Conversion of Antiapoptotic Bfl-1 (BCL2A1) into a Prodeath Factor Reveals Two Distinct alpha-Helices Inducing Mitochondria-Mediated Apoptosis

Anti-apoptotic Bfl-1 and pro-apoptotic Bax, two members of the Bcl-2 family sharing a similar structural fold, are classically viewed as antagonist regulators of apoptosis. However, both proteins were reported to be death inducers following cleavage by the cysteine protease µ-calpain. Here we demonstrate that calpain-mediated cleavage of full-length Bfl-1 induces the release of C-terminal membrane active α-helices that are responsible for its conversion into a pro-apoptotic factor. A careful comparison of the different membrane-active regions present in the Bfl-1 truncated fragments with homologous domains of Bax show that helix α5, but not α6, of Bfl-1 induces cell death and cytochrome c release from purified mitochondria through a Bax/Bak-dependent mechanism. In contrast, both helices α5 and α6 of Bax permeabilize mitochondria regardless of the presence of Bax or Bak. Moreover, we provide evidence that the α9 helix of Bfl-1 promotes cytochrome c release and apoptosis through a unique membrane-destabilizing action whereas Bax-α9 does not display such activities. Hence, despite a common 3D-structure, C-terminal toxic domains present on Bfl-1 and Bax function in a dissimilar manner to permeabilize mitochondria and induce apoptosis. These findings provide insights for designing therapeutic approaches that could exploit the cleavage of endogenous Bcl-2 family proteins or the use of Bfl-1/Bax-derived peptides to promote tumor cell clearance

Framework à composants logiciels pour radio logicielle

International audienceLes équipements Radio Logicielle militaires utilisant les concepts définis par le Software Defined Radio Forum font désormais face à de nouvelles et nombreuses exigences de la même façon que leurs équivalents civils, parmi lesquelles :-la nécessité de prendre en compte un accroissement continu et important de la complexité et du volume du logiciel embarqué ; la flexibilité introduite par le logiciel permet par exemple une élaboration plus rapide de nouvelles fonctions ou de nouveaux équipements via une intégration accrue de logiciels tiers . -la nécessité d’interopérer avec de nombreux équipements différents et d’implanter de ce fait des formes d’ondes impliquant des contraintes très diverses, notamment d’un point de vue Qualité de Service (optimisation du partage des ressources matérielles en fonction des exigences particulières de délai, débit, etc.), reconfigurabilité (redéploiement du logiciel à l’intérieur de l’équipement). -la nécessité d’exécuter le logiciel sur des plates-formes de fournisseurs différents ou de changer certains composants matériels d’une plate-forme avec le moins de modifications possible du logiciel tout en garantissant la stabilité du fonctionnement de l’équipement ; donc assurer une portabilité optimum.En réponse à ces exigences, le Joint Tactical Radio System (JTRS) du DoD US définit un framework d’architecture logicielle baptisé Software Communication Architecture (SCA) basé entre autres sur les spécifications CORBA de l’Object Management Group (OMG) et les standards POSIX. Ce framework ouvert et orienté composants couvre aussi bien les aspects logiciels que matériels ; il s’inspire du modèle OSI de l’ITU pour l’organisation des formes d’ondes.Actuellement en cours d’évolution, SCA présente des qualités indéniables dont la définition assez complète des principales interfaces logicielles que doivent supporter les applications (« resources ») et les éléments matériels (« devices ») d’une plate-forme de référence dédiée spécifiquement à la Radio Logicielle ; de même la reconfiguration est prise en charge.A contrario il possède aussi des lacunes : la définition des « resources » agrège aussi bien la partie fonctionnelle métier que la partie non fonctionnelle (utilisation de CORBA, de POSIX, implantation des ports) et la notion de port interconnectant l’ensemble des « resources » et des « devices » est insuffisamment formalisée ce qui ne permet pas de garantir la réutilisabilité du logiciel dans des équipements de fournisseurs différents. Enfin la gestion des aspects temps réel et plus globalement de la Qualité de Service est laissée totalement à la charge des fournisseurs de formes d’ondes.Parallèlement au SCA, l’OMG propose la spécification Lightweight CORBA Component Model (Lightweight CCM), une version simplifiée du modèle de Composants Logiciels CORBA (CCM) mieux adaptée aux équipements embarqués. Ses principales qualités sont la simplification des applications et leur portabilité introduites par une séparation explicite et formalisée de la partie fonctionnelle (composants) et de la partie non fonctionnelle (conteneur et services) ainsi qu’une définition précise de types d’interactions entre composants (connecteurs) et de la structure (modèles) des composants. Le déploiement des composants est également spécifié de manière très proche de celui du SCA puisque l’ayant largement inspiré.Cependant malgré ces qualités, Lightweight CCM se positionne plus en tant que socle générique d’élaboration de composants que comme une solution globale à un domaine quel qu’il soit; en effet aucune exigence non fonctionnelle courante d’équipements embarqués n’est prise en compte, rien n’est précisé par exemple quant à la gestion de contraintes temps réel.La démarche présentée est inscrite dans le cadre d’une expérimentation en cours. Elle consiste à tirer partie des qualités respectives des deux initiatives Lightweight CCM et SCA pour proposer plusieurs contributions applicables au domaine de la Radio Logicielle :-la structuration de l’architecture logicielle globale en termes d’une part de séparation des parties fonctionnelles et non fonctionnelles et d’autre part de framework à Composants Logiciels générique intégrant dans un conteneur un ensemble de services (non fonctionnels) tels que la gestion de la Qualité de Service et la gestion de la connexion entre composants (fonctionnels).-l’expérimentation de correspondances permettant d’exprimer à partir d’une architecture fonctionnelle, des composants, des assemblages de composants et des services. -l’enrichissement du framework par la réutilisation ad-hoc de logiciels tiers