Uropathogenic Proteus mirabilis and Klebsiella pneumoniae in companion animals : molecular epidemiology, antimicrobial resistance and zoonotic potential

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias na Especialidade de ClínicaUrinary tract infections (UTI) are frequently diagnosed in companion animals and the increase in antimicrobial resistance leads to therapeutic limitations and public health concerns. The study of the geographic distribution of antimicrobial resistance in bacteria (n= 22 256) causing UTI in companion animals from 14 European countries showed that, in 2012-2013, the frequency of Escherichia coli and Proteus mirabilis antimicrobial resistance in Southern countries (Portugal, Spain, Italy, Greece) was significantly higher than in Northern countries (Denmark, Sweden). In a retrospective study conducted in Portugal (Lisbon), the antimicrobial resistance of clinical Enterobacteriaceae from companion animals with UTI increased significantly over 16 years (1999-2014; P < 0.001). Bacteria from companion animals with UTI harboured important antimicrobial resistance mechanisms and belonged to high-risk clonal lineages, namely third-generation cephalosporin (3GC)-resistant E. coli O25b:H4-B2-ST131, CC23 and ST648, methicilin-resistant Staphylococcus aureus CC5, methicilin-resistant Staphylococcus epidermidis CC5, high-level gentamicin-resistant Enterococcus faecalis CC6 and ampicillin-resistant Enterococcus faecium CC17. The blaCTX-M-15 gene was disseminated among 3GC-resistant K. pneumoniae from companion animals and humans with UTI. Most K. pneumoniae from companion animals where 3GC, multidrug-resistant (MDR) and belonged to the high-risk clonal lineage ST15. K. pneumoniae high-risk clonal lineages ST11, ST37 and ST147 were also detected in companion animals. 3GC-resistance in P. mirabilis from companion animals with UTI was associated with the presence of blaCMY-2, which increased significantly over time. A high number of PFGE clusters (43.6%, n = 17/39) included P. mirabilis strains from companion animals and humans. Gut colonisation by K. pneumoniae and P. mirabilis was detected in healthy dogs and humans; however, none of the strains was MDR. K. pneumoniae faecal strains from dogs belonged to ST17, ST188, ST252, ST281, ST423, ST1093, ST1241, ST3398 and ST3399. Remarkably, two colonised dogs were found to shared PFGE undistinguishable K. pneumoniae strains with one co-living human. P. mirabilis gut colonisation was significantly higher in dogs (P = 0.0329). One human/dog and one dog/dog pair shared PFGE undistinguishable P. mirabilis strains. The antimicrobial resistance frequencies reported in these studies support the need to implement antimicrobial stewardship programmes in veterinary medicine. The detection of MDR high-risk clonal lineages causing UTI in companion animals and the similarities detected in K. pneumoniae and P. mirabilis from companion animals and humans raises public health concerns and highlights the need for a One Health approach.RESUMO - Proteus mirabilis e Klebsiella pneumoniae uropatogénicos em animais de companhia : epidemiologia molecular, resistência aos antimicrobianos e potencial zoonótico - As infeções bacterianas do trato urinário (ITU) são frequentemente diagnosticadas em animais de companhia e no homem. O aumento da resistência e multirresistência aos antimicrobianos é um reconhecido problema na sociedade moderna que resulta na diminuição de opções terapêuticas. Com o crescente contacto entre os animais de companhia e o homem, a disseminação de bactérias resistentes a antimicrobianos criticamente importantes levanta também grandes preocupações de saúde pública. Seguindo o modelo utilizado pelo European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC) nos relatórios de resistência aos antimicrobianos de bactérias invasivas de origem humana, o primeiro estudo apresentado nesta tese pretendeu avaliar a etiologia e a distribuição geográfica da resistência aos antimicrobianos em bactérias (n= 22 256) isoladas de animais de companhia com ITU em 14 países Europeus. Este estudo mostrou que, em 2012-2013, a frequência de resistência aos antimicrobianos em Escherichia coli e Proteus mirabilis era significativamente superior nos países estudados do Sul da Europa (Portugal, Espanha, Itália e Grécia) quando comparada com os países estudados do Norte da Europa (Dinamarca e Suécia). O mesmo aconteceu quanto a E. coli e P. mirabilis multirresistente (MDR). A elevada resistência aos antimicrobianos detetada em cães e gatos com ITU em Portugal (Lisboa) motivou a realização de um segundo estudo, retrospetivo, com o objetivo de avaliar a evolução temporal da resistência aos antimicrobianos, nesta região, ao longo de um período de 16 anos (1999-2014). Este estudo confirmou a ocorrência de um aumento significativo de resistência ao longo do tempo quanto à amoxicilina/clavulanato, cefalosporinas de terceira geração (C3G), trimetoprim/sulfametoxazol, fluoroquinolonas, gentamicina e tetraciclina (P < 0,001) em Enterobacteriaceae de animais de companhia com ITU. Adicionalmente, foi detetado um aumento significativo no isolamento de Enterobacteriaceae MDR (P < 0,0001). ...info:eu-repo/semantics/publishedVersio

La resolución de conflictos familiares por mediación : la realidad en España y Portugal

As especificidades dos conflitos familiares caracterizados pela sua inerente carga emocional e psicológica reclamam formas de solucionamento capazes de responder de forma adequada a esta conflitualidade. A mediação apresenta-se muitas vezes como uma via com maiores vantagens aplicativas que o próprio sistema judicial. O presente trabalho pretende analisar as valências deste mecanismo, estudando-se a sua implementação legal nos ordenamentos jurídicos espanhol e português

La mediación ambiental : un nuevo método de resolución de conflictos urbanísticos y ambientales

Comunicação apresentada na VIII Conferencia Internacional - Foro Mundial de Medicación, Valência, Espanha, outubro 2012.Los conflictos ambientales evidencian características específicas. Regla general, son conflictos multipartes, con relaciones de poder en desequilibrio (power imbalance), que respectan a cuestiones técnicas e científicas complejas y en que coliden intereses públicos y privados. Estas especificidades justifican la aplicación de medios de resolución extrajudicial de conflictos como la mediación. En este trabajo pretendemos analizar algunas experiencias y proyectos europeos que aplicaron la mediación en la resolución de conflictos ambientales. Nuestro objetivo es percibir las ventajas que este mecanismo presenta en este nuevo campo de aplicación y analizar de qué forma se puede implementar la mediación ambiental en cada Estado

Concentration of beverages by osmotic evaporation: effect on organoleptic properties and antioxidant activity

The concentration of beverages has a great interest because it enables lowering the transportation, storage and packaging costs, as well as theincrease of product’s shelf lifeoriginated by its higher resistance to microbial activity. Membrane processes have been proposed for beverages’ concentration as promising alternatives to the traditional concentration processesdue to the mild operating conditions. In this work, the osmotic evaporation membrane process was used in order to concentrate three different teas and fresh orange juice, as well as evaluating the effect of this process on the organoleptic properties and antioxidant activity.The concentration process was carried out in a hollow fibre membrane contactor. The beverage was circulated through the shell side of the contactorand a concentrated osmotic solution (CaCl25M) was circulated inside the fibres. The flux, the driving force and the mass transfer coefficient were evaluated during the process time. All beverages were concentrated at least threetimes.The concentrated beverages were analysed in terms of their antioxidant activity (DPPH and FRAP methods), total phenolic content (Folin-Ciocalteu method) and colour. Ascorbic acid concentration was measured for the orange juice by 2,6 -dichlorophenolindophenol -xylene extraction method.The results indicate thatthe antioxidant activity and total phenolic content remains constant during the first sixhours of the concentration process, after which a decrease was noticed. Alterations in the beverages colour after the concentration process (7.11<ΔE*I,F<24.32)were observed. Thecontent ofascorbic acid decreases 32.7% during the concentration process.However, these results are not a limitation since the process can be operated in a shorter time, using membrane contactors with highercontact areas

Evolution, gene regulation and functional analysis of BMP2 in fish

Bone morphogenetic proteins (BMPs) are multifunctional growth factors belonging to the transforming growth factor β (TGFβ) superfamily with a central role in bone formation and mineralization. BMP2, a founding member of this family, has demonstrated remarkable osteogenic properties and is clinically used to promote bone repair and fracture healing. Lack of basic data on factors regulating BMP2 expression and activity have hampered a better understanding of its role in bone formation and bone-related diseases. The objective of this work was to collect new functional data and determine spatiotemporal expression patterns in a fish system aiming towards a better understanding of BMP2 function and regulation. Transcriptional and post-transcriptional regulation of gilthead seabream BMP2 gene was inferred from luciferase reporter systems. Several bone- and cartilage-related transcription factors (e.g. RUNX3, MEF2c, SOX9 and ETS1) were found to regulate BMP2 transcription, while microRNA 20a was shown to affect stability of the BMP2 transcript and thus the mineralogenic capacity of fish bone-derived host cells. The regulation of BMP2 activity through an interaction with the matrix Gla protein (MGP) was investigated in vitro using BMP responsive elements (BRE) coupled to luciferase reporter gene. Although we demonstrated the functionality of the experimental system in a fish cell line and the activation of BMP signaling pathway by seabream BMP2, no conclusive evidence could be collected on a possible interaction beween MGP and BMP2. The evolutionary relationship among the members of BMP2/4/16 subfamily was inferred from taxonomic and phylogenetic analyses. BMP16 diverged prior to BMP2 and BMP4 and should be the result of an ancient genome duplication that occurred early in vertebrate evolution. Structural and functional data suggested that all three proteins are effectors of the BMP signaling pathway, but expression data revealed different spatiotemporal patterns in teleost fish suggesting distinct mechanisms of regulation. In this work, through the collection of novel data, we provide additional insight into the regulation, the structure and the phylogenetic relationship of BMP2 and its closely related family members.O sistema esquelético confere suporte e proteção ao organismo, permite o armazenamento de minerais e desempenha funções hematopoiéticas. Um dos seus principais componentes é o osso, um tecido conectivo especializado e constituído por uma matriz extracelular extensamente mineralizada. O processo de mineralização envolve mecanismos extremamente complexos que estão sujeitos a um rigoroso controlo a nível molecular, no qual estão envolvidas várias proteínas responsáveis pela diferenciação celular e pela síntese de matriz extracelular. Dentro deste conjunto de proteínas, destacam-se alguns fatores de crescimento essenciais ao mecanismo de mineralização tecidular, como é o caso das proteínas morfogenéticas do osso (BMPs). As BMPs pertencem à superfamília de fatores de crescimento de transformação β (TGFβ) e estão envolvidas em vários processos durante a embriogénese, organogénese, proliferação e diferenciação celular e mecanismos de formação óssea. Atualmente estão descritos e caracterizados mais de vinte membros pertencentes a esta família, que foram divididos em várias subfamílias, de acordo com a semelhança da estrutura primária das suas proteínas. A subfamília BMP2/4/16 à qual pertence a BMP2 foi uma das primeiras a ser identificada e caracterizada. A BMP2 é uma das proteínas que possui uma maior capacidade osteogénica e é, desde há muito tempo, considerada um potencial agente terapêutico para o tratamento de doenças relacionadas com o osso, sendo mesmo utilizada em alguns casos clínicos de fraturas ósseas. O conhecimento dos processos de formação óssea, bem como os mecanismos de regulação da BMP2, são por isso de extrema importância para uma melhor compreensão dos processos subjacentes ao desenvolvimento e progressão de algumas doenças ósseas. Assim, a BMP2 tem sido alvo de vários estudos, quer a nível de conhecimento da sua função, quer a nível de mecanismos de ação e processamento. Sabe-se que a BMP2 é uma proteína secretada para a matriz extracelular onde, através de um mecanismo de sinalização molecular, é responsável pela regulação de vários processos. O mecanismo de sinalização inicia-se quando dímeros de BMP2 se ligam aos respetivos recetores, presentes na superfície da célula, ativando assim uma cascata de sinalização molecular. Através de diferentes intermediários intracelulares, envolvidos na cascata de sinalização, a BMP2 é responsável pela regulação transcricional de vários genes-alvo. No entanto, e apesar dos vários estudos que foram feitos nesta área, o conhecimento existente acerca deste assunto é ainda bastante escasso. Neste sentido, o objetivo principal deste trabalho foi a recolha de novos dados funcionais e estruturais, que permitam uma melhor compreensão da função da BMP2. Para tal, e de modo a complementar o conhecimento existente, utilizámos o peixe como modelo alternativo aos sistemas de mamíferos. O peixe é atualmente reconhecido como um modelo válido para estudos do esqueleto de vertebrados para o qual existem já várias ferramentas que permitem análises in silico, in vitro e in vivo. Este trabalho envolveu o estudo da regulação do gene da BMP2 de dourada, tanto a nível transcricional como a nível pós-transcricional. Numa primeira fase, foram identificados potenciais reguladores transcricionais da BMP2 de dourada, através da análise in silico da região reguladora do gene. Dentro dos potenciais reguladores transcricionais, foram identificados vários fatores de transcrição com funções descritas ao nível do osso e da cartilagem, nomeadamente o RUNX3, SOX9, MEF2C e ETS1, que foram posteriormente testados a nível funcional através de ensaios repórter de luciferase. Em paralelo, no decorrer da caracterização de reguladores pós-transcricionais da BMP2, através da análise da região 3’ não traduzida (3’UTR) do seu mRNA, foi possível identificar um local de ligação para o miR-20a, conservado ao longo da evolução. A fim de melhor compreender os mecanismos de ação da BMP2, neste trabalho investigámos também possíveis parceiros desta proteína. A caraterização da interação entre a BMP2 e a proteína Gla da matriz (MGP), um conhecido inibidor da calcificação, foi avaliada através do uso de um sistema de elementos de resposta às BMPs, acoplado a um gene repórter, a luciferase. Embora tenhamos demonstrado a funcionalidade do sistema através da ativação do mecanismo de sinalização celular pela BMP2 de dourada, não foram obtidos dados conclusivos no que diz respeito à interação entre a BMP2 e a MGP. Finalmente, abordamos o aspecto evolutivo dos membros da subfamília BMP2/4/16 através da análise da sua distribuição taxonómica entre vários organismos vertebrados, bem como as relações filogenéticas existentes entre os vários membros desta subfamília. Foi demonstrado que a BMP16 divergiu antes da BMP2 e BMP4 na linhagem dos vertebrados e foi, provavelmente, o resultado de uma duplicação genómica que terá ocorrido ancestralmente. Dados estruturais sugerem uma conservação funcional das três proteínas, facto que foi confirmado pela capacidade de ativação dos mecanismos de sinalização das BMPs. No entanto, e apesar da conservação ao nível da região codante dos genes das BMP2, BMP4 e BMP16, as regiões não traduzidas são substancialmente diferentes, apontando para uma regulação diferencial dos três genes, como é aliás sugerido pelos distintos padrões de expressão observados para a BMP2, BMP4 e BMP16, tanto em linguado como em peixe zebra. Ao longo deste trabalho foram recolhidos novos dados que permitem uma melhor compreensão da função e regulação da BMP2. Foram igualmente obtidas informações relevantes acerca da filogenia molecular dos membros da subfamília das BMP2/4/16 que contribuíram para uma melhor compreensão e interpretação da complexa história evolutiva desta subfamília. No seu conjunto, os resultados deste trabalho contribuem para uma validação do uso dos peixes como um modelo alternativo na investigação de mecanismos moleculares envolvidos no processo de mineralização tecidular.Universidade do Algarve, Departamento de Ciências Biomédica

Poluentes orgânicos persistentes com actividade desreguladora endócrina

Monografia realizada no âmbito da unidade de Estágio Curricular do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de CoimbraAs doenças endócrino-mediadas estão a aumentar cada vez mais a nível mundial e pensa-se que poderá estar relacionado com os desreguladores endócrinos (DEs). Estes são substâncias exógenas ao corpo humano e que interferem na síntese, secreção, transporte, metabolismo ou eliminação das diferentes hormonas. Os seres humanos podem ser expostos a estes compostos através dos alimentos e do ambiente (água, solo e ar). Estes compostos alteram o funcionamento normal do sistema endócrino tanto dos seres humanos como dos animais. É particularmente preocupante a exposição de crianças aos DEs, uma vez que são um grupo especialmente vulnerável. Deste modo, os DEs são cada vez mais um assunto importante e preocupante para a comunidade científica, sendo de extrema importância apostar na prevenção e informação da população para o risco que estes compostos transmitem (sobretudo para o feto e a criança). Esta monografia tem como objetivo abordar a atividade desreguladora endócrina de alguns poluentes orgânicos persistentes, nomeadamente as dioxinas, os bifenilos policlorados e os pesticidas (em especial o diclorodifeniltricloroetano e o hexaclorobenzeno). Irá dar-se ênfase às suas características e propriedades químicas, assim como ao seu potencial impacto e repercussão na saúde humana.The endocrine-mediated diseases are increasing worldwide and it’s thought that it may be related to endocrine disruptors (ED). These substances are exogenous to human body and interfere with the synthesis, secretion, transport, metabolism or elimination of various hormones. Humans can be exposed to these compounds through the food and environment (water, soil and air). Endocrine disruptors alter the normal functioning of the endocrine system of both humans and wildlife. Of particular concern is the exposure of children to ED, since they are a particularly vulnerable group. Thus, ED are increasingly an important matter of concern to the scientific community, it’s extremely important to invest in population education for the risk that these compounds transmit (especially for the fetus and the children). The main focus of the present monography is to analyze the endocrine disrupting activity of some persistent organic pollutants, such as dioxins, polychlorinated biphenyls and pesticides (especially dichlorodiphenyltrichloroethane and hexachlorobenzene). It will be emphasized their characteristics and chemical properties as well as their potential impact on human health

The role of career adaptability and academic engagement in college student’s life satisfaction

Career adaptability and academic engagement are important processes in higher education. However, the relationship between these processes and their potential role in students’ life satisfaction still needs to be addressed. The present study aims to explore the role of career adaptability and academic engagement on higher education students’ life satisfaction. This study included 201 participants, 156 women (77.6%) and 45 men (22.4%), aged between 18 and 55 years (M = 21.13, SD = 4.51). Students answered a sociodemographic questionnaire, the Career Adapt-Abilities Scale, the University Student Engagement Inventory, and the Satisfaction with Life Scale. Positive and statistically significant correlations between career adaptability and academic engagement, as well as between these variables and life satisfaction, were found. The results of a hierarchical linear regression analysis suggested that career adaptability and academic engagement statistically significantly contribute to explaining variations in life satisfaction. This study may lead to a better understanding of the relationship between academic, emotional, and career processes. It may also stimulate integrative psychological practices in higher education settings.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Continuous Assurance for the Digital Transformation of Internal Auditing

As a result of the increasing demand on the credibility of the financial information disclosure, internal auditing has been playing an increasingly important role in organizations. Currently, there is a need to ensure the compliance of organizational transactions in real time in order to increase the reliability of the information and to reduce risks. In this context, the concept of Continuous Assurance has emerged, allowing to reduce potential errors and risks and obtain useful information in real time, supporting more effectively the decision making and internal auditing. This paper aims to understand the importance and the use of Continuous Assurance services from the perspective of the internal auditor. So, the methodology used is qualitative and the questionnaire survey was used to collect data from interna auditors in Portugal. The main results demonstrate, among other findings, that the Continuous Assurance services are considered by the internal auditors as very important. Despite this, its implementation in the organizations does not follow the importance assigned to it, and is still far from being fully deployed. The dimension of the audit department is an influential factor in the use of some Continuous Assurance services.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Relatório de estágio em farmácia comunitária

Relatório de estágio realizado no âmbito do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas, apresentado à Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbr