The role of N-terminal phosphorylation on Huntingtin oligomerization, aggregation and toxicity

Tese de mestrado, Neurociências, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2012Huntington’s disease (HD) is a hereditary disorder caused by a mutation in the exon-1 of the IT-15 gene, which encodes for a protein called huntingtin. The N-terminal region of mutant huntingtin is prone to aggregate and is toxic for specific types of neurons in the striatum and cortex, leading to the involuntary movements and psychiatric disturbances that characterize HD. Growing evidence indicates that the smaller, more soluble aggregates (dimers and oligomers) are the most toxic species, but little is still known about the process of huntingtin oligomerization. The aim of this thesis was to elucidate the role of the N-terminal region of huntingtin on its oligomerization, aggregation and toxicity. We put special emphasis on its phosphorylatable residues (T3, S13 and S16), because phosphorylation pathways are involved in key aspects of HD. We used a huntingtin-Venus bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assay recently developed in our laboratory. In this model, huntingtin exon-1 is fused to two non-fluorescent halves of the Venus protein (V1 and V2). When huntingtin dimerizes, the two halves get together and reconstitute the functional fluorophore. We used these BiFC constructs to create a series of phosphoresistant (T3A, S13A, S16A) and phosphomimic (T3D, S13D, S16D) huntingtin mutants and test their behavior in living cells. The presence of phosphomimic mutations in both 103QHtt-V1 and 103QHtt-V2 BiFC constructs completely abolished the generation of huntingtin aggregates. Combinations of a non-mutated construct with a phosphomimic construct produced intermediate phenotypes in terms of oligomerization and aggregation. Phosphoresistant BiFC pairs did not produce overt phenotypes. Mutations in N-terminal residues had varied effects on Htt toxicity, which apparently were not associated with the levels of oligomeric species or inclusion bodies. Our results contribute to a better understanding of HD and highlight the therapeutic potential of targeting the phosphorylatable residues of N-terminal huntingtin.A doença de Huntington (HD) é uma doença hereditária causada por uma mutação no exão-1 do gene IT-15, que codifica para a proteína huntingtina. A região N-terminal da proteína mutada tem tendência para agregar e é tóxica para tipos específicos de neurónios no estriado e no córtex, levando ao aparecimento de movimentos involuntários e perturbações psiquiátricas, que caracterizam a doença. Evidências crescentes indicam que os agregados mais pequenos e solúveis (dímeros e oligomeros) representam as espécies mais tóxicas, no entanto, pouco se sabe acerca do processo de oligomerização da huntingtina. O principal objectivo deste trabalho foi elucidar o papel da região N-terminal da huntingtina na sua oligomerização, agregação e toxicidade. Focámo-nos especialmente nos resíduos fosforiláveis (T3, S13 e S16), uma vez que as vias de fosforilação estão envolvidas em aspectos-chave da HD. Foi utilizado um sistema de complementação bimolecular de fluorescência(BiFC), recentemente desenvolvido no nosso laboratório. Neste modelo, o exão-1 da huntingtina é fundido com duas metades não fluorescentes da proteína Venus(V1 e V2). Quando a huntingina dimeriza, as duas metades unem-se, reconstituindo o fluoróforo funcional. Estas ferramentas BiFC foram utilizadas para criar vários mutantes resistentes à fosforilação (T3A, S13A, S16A) e constitutivamente fosforilados (T3D, S13D, S16D), sendo o seu comportamento testado em células vivas. Quando presentes em ambas as metades 103QHtt-V1 e 103QHtt-V2 BiFC, as mutações que imitam a fosforilação, resultaram na abolição de agregados nas células. Combinações de metades BiFC mutadas e não-mutadas produziram fenótipos mistos em termos de oligomerização e agregação. Mutantes BiFC resistentes à fosforilação não produziram fenótipos evidentes. As mutações nos resíduos da região N-terminal evidenciaram efeitos diversos na toxicidade da huntingtina, aparentemente não associados com os níveis de oligomeros ou agregados. Os nossos resultados contribuem para uma melhor compreensão da HD, destacando o potencial alvo terapêutico dos resíduos fosforiláveis da região N-terminal da huntingtina

Avaliação das Aprendizagens: Perceções e Práticas de professores do 3ºciclo do Ensino Básico

Este estudo de natureza qualitativa teve como objetivos a caracterização das perceções dos professores acerca de avaliação, a identificação das estratégias e instrumentos de avaliação que os professores dizem utilizar e indagar a existência de relação entre essas perceções e as suas práticas avaliativas. Baseou-se em dados empíricos obtidos a partir da aplicação de três técnicas de recolha de dados: entrevistas, observação direta e análise documental. Constatou-se alguma influência da tradição clássica de avaliação nas suas perceções, que se enquadram nas primeiras gerações da avaliação, onde prevalece a orientação para a classificação/ certificação em detrimento da orientação para a regulação/ melhoria das aprendizagens, sugerindo práticas avaliativas características da avaliação da aprendizagem e não da avaliação para a aprendizagem, destacando-se a tentativa das participantes em diversificar e modificar as suas estratégias e instrumentos avaliativos o que parece uma aproximação à quarta geração de avaliação

Formação de professores em ensino da geometria

A geometria ocupa um lugar de grande relevância na educação em geral, sendo, por isso, fundamental proporcionar uma formação de qualidade aos professores neste domínio. De acordo com Goldenberg, Cuoco e Mark (1998), essa relevância justifica-se pelo facto de a geometria ajudar os alunos a estabelecer conexões com a matemática e por permitir o desenvolvimento de raciocínios visuais bem como a procura de invariantes. Numa perspetiva convergente, Johnston-Wilder e Mason (2005) destacam como aspetos centrais do pensamento geométrico (i) a invariância, (ii) a linguagem e pontos de vista, (iii) o raciocínio, e (iv) a visualização e representação.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Moda, Contradição e Estereótipo

A moda, sendo um reflexo do tempo, tem acompanhado o vestuário e a sua evolução ao longo dos anos. Nesta dissertação observam-se e analisam-se as principais mudanças que foram acontecendo na história da humanidade e o impacto que tiveram na sociedade, tanto a nível social como cultural e económico. Numa época particularmente caracterizada pela necessidade de mudança, chamar a atenção das grandes indústrias para as repercussões negativas do seu impacto torna-se particularmente premente. As constantes restrições à liberdade individual de que o nosso tempo ainda é testemunha, bem como a limitada representatividade e inclusividade que a indústria da moda denota, sublinham a urgência de uma melhor compreensão e reflexão sobre os estereótipos e contradições existentes e alimentados até aos nossos dias. É esse o principal propósito desta dissertação.As a reflection of its time, Fashion has accompanied apparel’s evolution throughout the years. This dissertation observes and analyses the main changes that affected human history, as well as the impact they have had as much socially, as culturally, and economically. In a time as characterized by the need of change as ours, calling the main industries’ attention to the negative repercussions of their impact becomes particularly urgent. The constant restrictions imposed to individual freedoms testified by our century, as well as the limited representativity and inclusivity demonstrated by the Fashion industry underline the need to better understand and think about the stereotypes and contradictions which are still being fed and developed. That is the main purpose of this dissertation

os valores da cidadania nas crianças

A presente pesquisa pretende refletir sobre a temática da construção de valores de justiça social em crianças a frequentar o 3º ano do 1º ciclo do ensino básico. Procurou-se apurar e entender os valores através dos olhares das crianças, bem como identificar a existência de possíveis dificuldades no entendimento dos valores, assim como se é atribuída importância ao papel dos valores na vida das crianças. A pesquisa integra autores que abordam os valores inserindo os mesmos numa perspetiva educativa, uma vez que é a construção de valores a responsável pela adoção de atitudes que levam à cidadania. É abordada a importância da participação ativa nas crianças e de que modo esta traz vantagens ao nível do desenvolvimento. Aliado ao estudo teórico, foi realizado um estudo de campo, numa escola pública do concelho de Leiria, sob a perspetiva de uma pesquisa qualitativa. Neste estudo de campo, foram abordados três valores, o valor da tolerância, da solidariedade e da igualdade, durante uma hora por semana numa sessão de atividade extracurricular de arte e cidadania. Para o desenvolvimento da investigação, elaborou-se a seguinte pergunta de partida: Como é que os valores de justiça social são interpretados e postos em prática pelas crianças enquanto cidadãos ativos? De forma a compreender como são vistos e interpretados os valores pelas crianças, foi realizada uma investigação-ação, assente no paradigma qualitativo com recurso à observação direta e ao questionário sob a forma de escala como técnica de recolha de dados, tratados pela análise de conteúdo. A pesquisa procurou verificar, segundo as manifestações dos sujeitos, conteúdos relevantes para a pesquisa. Foram feitas questões de modo a obter opiniões e reflexões relativamente às situações apresentadas abordando implícita ou explicitamente cada valor. Diante dos resultados obtidos, foi possível verificar que os sujeitos revelam conhecimentos ao nível dos valores e que estão familiarizados com os conceitos

Prevalência de excesso de peso e obesidade nas escolas do primeiro ciclo da Nazaré

Tese de mestrado, Cuidados Farmacêuticos, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2014Introdução: Nas últimas décadas, a obesidade tem adquirido proporções epidémicas em todos os grupos etários. Definida pela OMS como uma doença crónica, a sua distribuição e prevalência parece estar associada ao nível sócio-económico, estilos de vida sedentários e hábitos de vida incorrectos. Segundo a DGS, 15% das crianças portuguesas sofrem de obesidade infantil. 1 Objectivos: Este estudo pretendeu determinar a prevalência do excesso de peso e da obesidade, nas crianças dos 6 aos 11 anos, nas escolas do primeiro ciclo do concelho da Nazaré e determinar factores de risco para a ocorrência do excesso de peso. Metodologia: Tratou-se de um estudo descritivo transversal em que os dados foram recolhidos através do preenchimento de um questionário por parte dos encarregados de educação e da avaliação física das crianças. Neste estudo foram convidadas a participar 225 crianças do centro escolar da Nazaré e de Valado dos Frades. Os dados foram tratados em SPSS versão 21, com recurso a estatística descritiva univariada e bivariada, considerando um IC 95%. O estudo foi aprovado pela comissão de ética da FFUL. Resultados e Discussão: O estudo inclui 171 crianças e respectivos encarregados de educação e a prevalência de excesso de peso encontrada foi de 41,5% e de obesidade infantil foi de 24,5%. Verificou-se que o excesso de peso era dependente do género das crianças, sendo mais comum nos rapazes (p=0,026), e dependente de um elevado peso à nascença (p=0,022). Constatou-se que os encarregados de educação tinham percepção distorcida da imagem corporal dos seus educandos. Conclusão: A prevalência de obesidade encontrada neste estudo sugere que existe uma urgente necessidade do desenvolvimento de um plano de combate à obesidade, de modo a prevenir e reverter este problema neste concelho.Introduction: Over the past decades, obesity has been acquiring epidemic proportions across all age groups. Defined by the WHO, as a chronic condition, its prevalence and distribution seems to be associated with sócio-economic strata, sedentary lifestyles and incorrect habits of living. Acording to the DGS, 15% of portuguese children currently suffer from child obesity.1 Objectives: This study aimed to determine the prevalence of overweight and of obesity in children aged 6 to 11, in the first cycle schools of Nazaré and to determine risk factors for the development of overweight. Methodology: A cross-sectional study was developed, where data were collected throught questionnaires headed at the children’s legal responsible and through physical evaluation fo the children. Two hundred and twenty five children from the Nazaré and Valado dos Frades School Centre were invited to participate. Data were analyzed using SPSS version 21, by means of univariate and bivariate descriptive statistics, considering a 95% CI. The study was approved by the Ethics Committee of the FFUL. Results and Discussion: The study included data from 171 children and respective legal responsible. The estimated prevalence of overweight was 41,5% and the prevalence of obesity was 24,5%. Overweight was associated with gender, where it was more commonly found among male (p=0,026), and dependent of a high weight at birth (p=0,022). Children’s legal responsible had a distorced perception of their child’s body image. Conclusion: The prevalence of obesity found in this study suggests there is an urgent need for the development of a plan to fight obesity, so that the problem in this council can still be reverted and future cases prevented

A importância da ludicidade no processo de ensino-aprendizagem das crianças em idade pré-escolar

Mestrado em Educação Pré-EscolarA realização deste estudo foi baseada em observações e experiências vividas nos estágios de Creche e Jardim-de-Infância, desenvolvidos a partir da unidade curricular de Estágio em Educação de Infância, que integra o Mestrado em Educação Pré-Escolar. O presente relatório tem como objetivo a reflexão sobre a importância da ludicidade no processo ensino-aprendizagem. As atividades lúdicas são uma forma de aprendizagem, pois além de promover a relação entre as crianças, também são essenciais para o seu desenvolvimento social, emocional e cognitivo. A metodologia deste projeto enquadra-se no paradigma interpretativo, constituindo-se como uma investigação qualitativa inspirada na abordagem de investigação-ação. Foi essencial a seleção das ferramentas, no que diz respeito à recolha de informação. Destaca-se a observação participante, as notas de campo, o registo fotográfico e a análise bibliográfica que serviu de base à reflexão sobre o enquadramento teórico e os seus contributos para a praxis. Irei descrever a importância e as potencialidades que as atividades lúdicas têm no processo de ensino e aprendizagem na educação infantil. Terei por base e fundamentação diversos autores que fundamentam teoricamente as informações descritas.This report is the result of the culmination of a year and a half of work carried out from experience gained during my academic career, focusing on the internships carried out within the scope of a Masters’ degree in Pre-School Education. This report aims to reflect on the importance of playfulness in teaching-learning. Playful activities are a form of learning; in addition to promoting the relationship between children, they are essential for their social, emotional and cognitive developmental needs. The methodology of this project fits into the interpretative paradigm, guided by a qualitative investigation and inspired by the action-research approach. The selection of tools was essential in the data collection. The participant observation, field notes, photographic record and bibliographical analysis, will be highlighted, which served as a basis for consideration on the theoretical framework and its contributions to praxis. I will describe the importance and potential that ludic activities have in the teaching and learning process in early childhood education. It will be based on and substantiated by several authors who theoretically validate the information described.N/

Enantioselective HPLC-UV method for determination of eslicarbazepine acetate (BIA 2-093) and its metabolites in human plasma

Eslicarbazepine acetate (BIA 2-093) is a novel central nervous system drug undergoing clinical phase III trials for epilepsy and phase II trials for bipolar disorder. A simple and reliable chiral reversed-phase HPLC-UV method was developed and validated for the simultaneous determination of eslicarbazepine acetate, oxcarbazepine, S-licarbazepine and R-licarbazepine in human plasma. The analytes and internal standard were extracted from plasma by a solid-phase extraction using Waters Oasis® HLB cartridges. Chromatographic separation was achieved by isocratic elution with water–methanol (88:12, v/v), at a flow rate of 0.7 mL/min, on a LichroCART 250-4 ChiraDex (β-cyclodextrin, 5 μm) column at 30°C. All compounds were detected at 225 nm. Calibration curves were linear over the range 0.4–8 μg/mL for eslicarbazepine acetate and oxcarbazepine, and 0.4 – 80 μg/ mL for each licarbazepine enantiomer. The overall intra- and interday precision and accuracy did not exceed 15%. Mean relative recoveries varied from 94.00 to 102.23% and the limit of quantification of the assay was 0.4 μg/mL for all compounds. This method seems to be a useful tool for clinical research and therapeutic drug monitoring of eslicarbazepine acetate and its metabolites S-licarbazepine, R-licarbazepine and oxcarbazepine

O cuidar do enfermeiro obstetra à puérpera e recém-nascido após a alta precoce

A elaboração deste Relatório de Estágio pretende demonstrar todo o percurso de aprendizagem desenvolvido durante a Unidade Curricular de Estágio com Relatório, integrado no Curso de Mestrado em Enfermagem de Saúde Materna e Obstetrícia. No processo de aprendizagem para o desenvolvimento de competências; científica, técnica e humana para o cuidar de enfermagem especializado, priviligiei a prática baseada na evidência e a reflexão crítica da prática clínica baseada na Teoria dos Cuidados de Kristen Swanson. O conceito de alta precoce após o parto não é consensual, mas é considerada benéfica para a tríade. Perante a tendência em reduzir o tempo de internamento após o nascimento, acentuado pelo contexto pandémico, surge uma maior necessidade de cuidados especializados nos primeiros dias após a alta hospitalar, atendendo que nesta fase é importante avaliar o estado de saúde da mulher, do recém-nascido, bem como a adaptação da díade/tríade ao seu novo papel, de modo a facilitar o desenvolvimento de competências parentais. Como metodologia de eleição foi desenvolvida uma Scoping Review, segundo as orientações do Joanna Briggs Institute, com a finalidade de análisar a evidência científica disponível sobre “O Cuidar do Enfermeiro Obstetra à Puérpera e Recém nascido após a Alta Precoce”. A pesquisa foi realizada na plataforma EBSCO, nas bases de dados MEDLINE Complete, CINAHL Complete e Cochrane Database of Systematic Reviews. Realizaram-se entrevistas telefónicas, após 24 horas da alta hospitalar, a 26 puérperas com alta precoce no sentido de compreender as dificuldades e a satisfação da mulher e família após a alta. Conclui-se que a alta precoce é motivo de satisfação para as mulheres/famílias, tendo se considerado ser benéfico regressar ao ambiente familiar, mais tranquilo, confortável, com maior interação do pai e outros apoios familiares. O hospital teve um ganho médio de 20 horas por puérpera, com implicações na gestão de camas e nos custos relacionados com o internamento. Importa investir na alta precoce e na articulação e continuidade de cuidados.The elaboration of this Internship Report intends to demonstrate the entire learning path developed during the Internship with Report Curricular Unit, which is part of the Master's Degree Course in Maternal Health and Midwifery. The learning process for the development of scientific, technical, and human competences for specialized nursing care, I privileged evidence-based practice and critical reflection of clinical practice based on Kristen Swanson's Theory of Care. Although early discharge after delivery is not consensual, but it is considered beneficial for the triad. In view of the tendency to reduce the length of hospital stay after birth, accentuated by the pandemic context, there is a greater need for specialized care in the first days after hospital discharge, with special focus to women’s and newborn’s health assessment, as well as the adaptation of the dyad/triad to its new role, in order to facilitate parenting skills development. As a methodology of choice, a Scoping Review was developed, according to the guidelines of the Joanna Briggs Institute, with the purpose of analyzing the available scientific evidence on “"The care provided by Midwives to post-partum women and newborns after early discharge”. The research was carried out on the EBSCO platform, in the MEDLINE Complete, CINAHL Complete and Cochrane Database of Systematic Reviews databases. Telephone interviews were carried out 24 hours after hospital discharge with 26 postpartum women with early discharge in order to understand the difficulties and satisfaction of the woman and family after discharge. We can concluded that early discharge promotes women/families’ satisfaction, and it was considered beneficial to return to the family environment, more peaceful, comfortable, with greater interaction from the father and other family support. Hospital wise, early discharge was also beneficial, with an average gain of 20 hours per post-partum woman. The release of hospital resources has direct implications in bed management and hospitalization-related costs. Therefore, this should be taken in account to invest more attention in early discharge, continuity of care and link with community services