Alternative specimens in forensic toxicology: analysis of drugs of abuse

The main reason for this study’s development lies essentially in the fact that it gathers two areas of great interest and increasing progress in the forensic toxicology field: the postmortem alternative matrices and the new psychoactive substances. Firstly, it is possible to verify that alternative matrices have been playing an important role in the forensic toxicology field throughout the last decade. This relates with the fact they can be used as either a blood/urine complementary or in substitution when their collection is unavailable by several factors. In addition, Portugal and the rest of the world experienced a new emergent trend regarding the consumption of “new psychoactive substances”. This phenomenon brought about major public health injuries. The objective of the presented work was a contribution to the development of new analytical methods for the quantitative determinations of several new psychoactive substances in various biological matrices such as whole blood, plasma, vitreous humor and pericardial fluid. The substances on which we conducted our study were: salvinorin a (main active component of the plant salvia divinorum); some cathinones such as cathine, ephedrine, methcathinone, PMA, mephedrone, methedrone and some phenethylamines belonging to the D series, like the DOM and DOB and those that belong to the 2C-X series like 2C-H, 2C-B, 2C-I, 2C-T-2, 2C-T-4 and 2C-T-7. The mixed-mode was used (cathinones and phenethylamines) and reversed-phase (salvinorin a) adsorbents in the solid phase extraction for preparing samples of 250 μL of blood, plasma and pericardial fluid and 100 μL for vitreous humor. The obtained extracts were further analysed by gas chromatography coupled to mass spectrometry in the SIM mode. To enable the detectability and the separation of the studied cathinones and phenethylamines a fast microwave derivatization procedure was previously applied, using the MBTFA reagent. Thus, in order to minimize the time required for classical techniques of derivatization in the analysis of drugs of abuse (over 30 minutes) a microwave procedure was optimized which lasts only 90 seconds. The method was applied to all substances with the exception of salvinorin a. Stable trifluoroacetyl derivatives were obtained with this optimized methodology. Once confidence in the interpretation of the analytical results was attained (as a prerequisite in forensic and clinical toxicology), it was necessary to ensure that the methods developed were suitable for its intended purposes. Thus, the proposed methodologies were fully validated, in all biological matrices studied according to internationally accepted recommendations. The methods were found to be selective for all tested compounds in all matrices studied. Linearity was achieved from 5-100 ng/mL for salvinorin a and from 5-600 ng/mL for cathinones and phenethylamines. The extraction efficiencies were between 80-100% for salvinorin a and 77-113% for cathinones and phenethylamines, in all the biological matrices studied. All results obtained for the parameters repeatability and intermediate precision presented CV<20% and accuracy were within the acceptance interval of ±20% of the nominal values at all concentration levels. The methods presented limits of quantitation of 5 ng/mL for each compound, in the all biological matrices analysed. The developed methodologies have been applied to authentic samples from autopsies performed in the Clinical and Forensic Pathology Service and in the medico-legal Offices belonging to the delegation of the centre for the National Institute of Legal Medicine and Forensic sciences, I.P. These procedures can be a useful tool in forensic toxicology laboratories. The major contributions are the complementation of the information possibly provided by each one of those fluids regarding drugs’ consumption and the prevention of situations where the blood is not available due to several factors of each individual case. In addition, it was also intended to implement the developed methodologies in routine analysis on the Laboratory of Chemistry and Forensic Toxicology of the centre branch of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences.A principal razão para o desenvolvimento do presente estudo residiu essencialmente no facto de que nele se reuniram duas áreas de crescente interesse no campo da toxicologia forense: as amostras alternativas postmortem e as novas substâncias psicoativas. Em primeiro lugar, é possível verificar que as matrizes alternativas têm tido um papel importante no campo de toxicologia forense ao longo da última década, principalmente devido às vantagens que apresentam quando usadas em complementaridade com o sangue e/ou urina ou em sua substituição, quando as suas colheitas são inviabilizadas por diversos fatores (carbonização, hemorragia extensa, politraumatizados, avançado estado putrefativo etc.). O recurso a diferentes matrizes biológicas postmortem, na condução de uma análise toxicológica, constitui um verdadeiro desafio para a toxicologia forense pois são necessárias metodologias suficientemente sensíveis para proceder ao isolamento dos diferentes analitos que eventualmente estejam presentes em baixas concentrações nas amostras a analisar. No entanto, entende-se que uma análise toxicológica conduzida em distintas matrizes biológicas permite uma interpretação mais completa do caso, já que cada uma delas poderá fornecer uma perspetiva particular sobre a anterior exposição a determinadas substâncias. Mais problemático, e não menos raros, são os casos em que a quantidade de sangue é insuficiente ou mesmo inexistente, para realizar a investigação pericial. Nestes casos, o humor vítreo (VH) e o líquido pericárdico (PF) poderão ser usados como alternativa viabilizando, deste modo, a realização da análise. Apesar de escassos, os estudos realizados em VH na determinação de anfetaminas e metanfetaminas e de novas substâncias psicoativas, demonstram que existe uma boa correlação entre a concentração das substâncias encontradas e as correspondentes no sangue. Esta situação poderá ser justificada pelo facto de o VH ser maioritariamente composto por água (99%), possuir um pH de 7.5 (semelhante ao do sangue) e não ter atividade metabólica significativa. A maior desvantagem desta matriz é o limitado volume de amostra (1 a 3 mL) que não permite uma análise extensiva a várias substâncias. No caso do líquido pericárdico, o volume de amostra acessível para análise é de 5 a 10 mL, no entanto esta matriz tem sido pouco estudada. Os poucos trabalhos existentes demonstram que esta matriz poderá ser uma útil alternativa ao sangue uma vez que apresenta uma boa correlação das concentrações das substâncias encontradas nestas amostras. A maior desvantagem que esta matriz apresenta é a possibilidade de ser contaminada por fenómenos de difusão postmortem, resultantes de uma elevada concentração das drogas eventualmente presentes no estômago. Uma vez que, em Portugal e por todo o mundo se tem assistido a uma nova tendência emergente em relação ao consumo das "novas substâncias psicoativas" (NSP) que se encontra associada a diversos perigos na saúde pública, afigurou-se relevante realizar este estudo. O presente trabalho foi direcionado para substâncias pertencentes aos grupos mais representativos em termos de consumo e grau de toxicidade: catinonas, fenetilaminas e salvia divinorum. Em Portugal, esta realidade alastrou-se de forma discreta, sem receber a atenção devida por parte de todas as entidades competentes, estando estreitamente associada à abertura das lojas designadas por “smartshops”. Consequentemente, entre a abertura da primeira loja (que ocorreu em 2007) e 2013, foram registadas cerca de 40 lojas especializadas e dedicadas exclusivamente ao comércio destas NSP. Com a entrada em vigor do Decreto-lei nº 54/2013 de 17 Abril de 2013, estes locais foram encerrados por motivo da proibição da venda destas substâncias. No entanto, a comercialização e consumo destas substâncias não cessou o que é confirmado por estudos de monitorização da venda destas substâncias no espaço europeu, promovidos pelo Observatório Europeu da Droga e da Toxicodependência (OEDT) e Europol. Novas substâncias continuam em ascendente proliferação o que é indicador da existência de redes de larga escala de produção e distribuição. Deste modo, este trabalho pretendeu contribuir para o desenvolvimento de metodologias analíticas para determinações quantitativas de várias destas novas substâncias psicoativas em distintas matrizes biológicas tais como: sangue total, plasma, humor vítreo e líquido pericárdico. As substâncias sobre as quais realizámos o nosso estudo foram: salvinorina a (principal componente ativo da planta Salvia divinorum); algumas catinonas como: metcatinona, PMA, mefedrona e metedrona; e algumas fenetilaminas tais como: catina, efedrina, DOM, DOB e as pertencentes à série 2C-X: 2C-H, 2C-B, 2C-I, 2C-T-2, 2C-T-4 e 2C-T- 7. Para a preparação de volumes de 250 μL de amostras de sangue, plasma e líquido pericárdico e de 100 μL de humor vítreo foi usada a extração em fase sólida (SPE). Atualmente, a SPE é uma das técnicas mais usadas na extração e/ou concentração de amostras complexas, que viabiliza a deteção de compostos em concentrações reduzidas por técnicas cromatográficas especializadas, como a cromatografia de gases e a líquida acopladas à espectrometria de massa (GC-MS e LC-MS). Neste estudo, os extratos foram obtidos por GC-MS em modo SIM. Para habilitar a deteção e a separação das substâncias, por esta técnica cromatográfica, foi previamente aplicado um procedimento de derivatização através do uso de micro-ondas. Este procedimento, com duração de apenas 90 segundos, foi otimizado de forma a minimizar o consumo de tempo (superior a 30 minutos) que é geralmente despendido nas técnicas clássicas de derivatização para a análise de drogas de abuso. Tratando-se de uma técnica analítica pouco estudada na área da toxicologia forense, oferece-nos significativas vantagens em termos de rapidez na derivatização completa dos compostos. O método foi aplicado a todas as substâncias, com exceção da salvinorina a, tendo sido obtidos derivados trifluoroacetilados estáveis. Dado que a confiança na interpretação dos resultados analíticos é um pré-requisito em toxicologia forense e clínica, foi necessário garantir que os métodos desenvolvidos eram adequados para os fins pretendidos. Assim, as duas metodologias desenvolvidas foram validadas, em todas as matrizes biológicas estudadas de acordo com normas preconizadas internacionalmente para a validação de métodos bioanalíticos. No decurso da validação foram estudados os seguintes parâmetros analíticos: seletividade, intervalos de linearidade, fenómenos de arrastamento entre amostras de maior concentração para outras de concentração mais baixa, limites de deteção e de quantificação (LOD e LLOQ), precisão (intra-dia e intermédia) e exatidão, eficiência do processo extrativo e estabilidade (permanência dos extratos no amostrador em condições ambientais por 48 h, permanência das amostras na bancada de trabalho por períodos de 3h, ciclos de congelação e descongelação ao longo de 7 dias). Os métodos foram considerados seletivos para todos os compostos estudados e em todas as matrizes analisadas. Foi obtida linearidade dentro das gamas de trabalho estudadas (5-100 ng/mL para a salvinorina a e 5-600 ng/mL para as catinonas e fenetilaminas) com coeficientes de correlação superiores a 0.99. Os valores obtidos de recuperação variaram entre 77% (2C-T- 4 a 20 ng/mL) e 113% (2C-H a 500 ng/mL) para cada composto analisado nas diferentes matrizes biológicas estudadas. Verificou-se que todos os resultados obtidos para os parâmetros de repetibilidade e precisão intermédia apresentaram valores de CV<20% e que a exatidão se situou dentro do intervalo de ±20% dos valores nominais, em todos os níveis de concentrações estudados. Os métodos apresentaram valores de LOD e LLOQ de 5 ng/mL para cada um dos compostos, em todas as matrizes biológicas. As amostras não processadas que permaneceram no laboratório à temperatura ambiente durante 3h (para todas as substâncias analisadas) e os extratos deixados no amostrador (nas condições a que se encontra o sistema de GC-MS) por períodos até 24 h (salvinorina a) e 48 h (catinonas e feniletilaminas) revelaram-se estáveis. Por último, não foi verificada degradação dos compostos após três ciclos de congelação e descongelação completa ao longo de sete dias. As metodologias desenvolvidas foram aplicadas a amostras resultantes de autópsias realizadas no serviço de Clínica e de Patologia Forenses e nos Gabinetes médico-legais pertencentes à delegação do centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. Estes procedimentos poderão ser uma ferramenta bastante útil em laboratórios de toxicologia forense. Até ao momento, estas substâncias não tinham sido simultaneamente estudadas em amostras postmortem de humor vítreo e líquido pericárdico. As metodologias validadas foram implementadas nas análises de rotina do serviço de Química e Toxicologia Forenses da delegação do centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P

Madeira and Azores regions, cluster of a-PHP a-PiHP related deaths

Comunicação oral realizada no evento Expert meeting on Drug-Related Deaths (DRD) - EMCDDA, Lisboa, 10-11 outubro 2023.N/

When hair is the only biological specimen available: Analysis of a mummified scalp fragment

Comunicação Oral realizada, 27th Meeting of the Society of Hair Testing (SOHT), Lisboa (Portugal) 7-9 June 2023Hair testing provides useful and important information in forensic scenarios, as it complements data obtained from other biological specimens. Hair has been used for years to document exposure to drugs in a number of settings, for instance workplace drug testing, drug facilitated crimes and post-mortem toxicology. The authors present a case of decomposed human remains (unidentified) which appeared in a vacant house. A handmade pipe, a mouthpiece, cigarettes and syringes, indicating the consumption of drugs of abuse were found near the body. There was information that the deceased was addicted to drugs, but the specific substances were unknown. No pathological history and/or usual medication, were known, and the cause of death was ignored. The only biological sample available for toxicological analysis was mummified scalp with some hairs. The non-biological samples were analysed by GC-MS, and the following substances were detected: syringe A – cocaine, heroin, phenacetin, paracetamol; syringe B - cocaine, phenacetine, caffeine, nicotine, noscapine; mouthpiece – cocaine; handmade pipe - cocaine and metabolites, phenacetin and metabolites, paracetamol; cigarette A – nicotine and cotinine; cigarette B – nicotine, cotinine, phenacetin, caffeine. These results oriented hair testing to opiates and cocaine, which were analysed by GC-MS after appropriate extraction and clean- up. Hair was positive for cocaine (57 ng/mg), benzoylecgonine (17 ng/mg), norcocaine (2.20 ng/mg), cocaethylene (not quantitated), 6-acethylmorphine (4.65 ng/mg), morphine (4.52 ng/mg), codeine (0.83 ng/mg) and tramadol (0.87 ng/mg). The findings in hair are compatible with those in the paraphernalia; as such, it could be concluded that those objects belonged to the deceased. Hair analysis suggested that this death could be related to the consumption of heroin and cocaine.N/

Análise toxicológica forense a amostras não biológicas e cabelo: investigando a possível relação com um cadáver mumificado

Comunicação Oral apresentada no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Lamego 2023A análise toxicológica forense é uma ferramenta fundamental no auxilio da investigação de casos complexos através da identificação de substâncias tóxicas presentes nas amostras relacionadas com essas investigações. Um cenário peculiar que pode requerer essa abordagem especializada é a investigação de um cadáver mumificado. A mumificação é um processo natural ou artificial que preserva o corpo de um cadáver, por um longo período de tempo, muitas vezes ocorrendo em condições que dificultam a decomposição. Neste contexto, este estudo propõe explorar a aplicação da análise toxicológica forense a amostras não biológicas e cabelo, com o objetivo específico de investigar a possível relação entre essas amostras e um cadáver mumificado. Tal investigação é desafiadora, considerando a natureza das amostras e o seu estado de conservação, bem como a necessidade de aplicar metodologias analíticas sensíveis e adaptadas que conduzam à obtenção de resultados fiáveis. Com a crescente necessidade de utilizar métodos interdisciplinares para esclarecer casos desconhecidos, a aplicação da análise toxicológica forense a amostras não biológicas e cabelo apresenta-se como uma abordagem promissora. Ao ampliar o nosso conhecimento sobre a história e circunstâncias que envolvem o cadáver mumificado, podemos contribuir para uma melhor compreensão sobre o passado dessa pessoa assim como para a causa que levou à sua morte. Os autores apresentam um caso de restos humanos decompostos (não identificados) encontrados numa casa devoluta, situados junto a um conjunto de objetos: cachimbo artesanal, bocal, cigarros e seringas. Houve informações de que a vítima seria toxicodependente mas a causa da sua morte foi desconhecida. As amostras não biológicas e o cabelo foram analisadas por GC-MS após extração e limpeza apropriadas. Foram detetadas as seguintes substâncias: seringa A – cocaína, heroína, fenacetina, paracetamol; seringa B - cocaína, fenacetina, cafeína, nicotina, noscapina; bocal – cocaína; cachimbo artesanal – cocaína; fenacetina e paracetamol; cigarro A – nicotina e cotinina; cigarro B – nicotina, cotinina, fenacetina, cafeína. Estes resultados orientaram as análises de Congresso Nacional cabelo para a pesquisa de opiáceos e cocaína. O cabelo foi positivo para cocaína (57 ng/mg), benzoilecgonina (17 ng/mg), norcocaína (2,20 ng/mg), cocaetileno (não quantificado), 6-acetilmorfina (4,65 ng/mg), morfina (4,52 ng/mg), codeína (0,83 ng/mg) e tramadol (0,87 ng/mg). Os achados no cabelo são compatíveis com os da parafernália, o que é muito sugestivo de que, os objetos pertenciam ao cadáver mumificado.N/

Casos fatais associados ao consumo da catinona sintética α-PHP

Poster apresentado em 20º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses/5ª Reunião da Rede de Serviços Médico-Legais e Forenses de Países de Língua Portuguesa, 24-26 novembro 2022, Coimbra.Introdução: As Novas Substâncias Psicoativas (NSP) são alvo de grande preocupação a nível global, apesar dos contínuos esforços empregues pelos sistemas de controlo nacionais e internacionais para limitar a sua disseminação. A alfa-pirrolidinohexanofenona (α-PHP) é uma NSP recente, pertencente ao grupo das catinonas, com um reduzido número de estudos pulicados. Embora exista uma baixa incidência de consumo de NSP em Portugal, houve um notório aumento recente de doses apreendidas de α-PHP e um consequente aumento de casos detetados da substância em matrizes biológicas durante a realização das análises toxicológicas forenses de rotina de drogas de abuso realizadas no Serviço de Química e Toxicologia Forenses da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. Justificou-se, assim, desenvolver e validar uma metodologia analítica para a determinação e quantificação de α-PHP em sangue. Métodos: O procedimento analítico foi devidamente validado segundo a norma publicada pela American Academy of Forensic Sciences (AAFS) Standard Practices for Method Validation in Forensic Toxicology (ANSI/ASB Standard 036, 2019). Foram usados volumes de 500 μL de amostra de sangue às quais se adicionou o padrão interno, cocaína-d3. Seguidamente foi empregue a extração em fase sólida (SPE) com colunas de troca catiónica de modo misto (Oasis MCX®). Após secagem, os extratos foram reconstituídos em 60 µL de metanol e posteriormente analisados por GC-MS-EI com monitorização dos iões (77, 105 e 140) previamente selecionados em modo full-scan. Resultados: O método apresentou linearidade entre 10 e 1000 ng/mL, com coeficientes de determinação (r2) superiores a 0.999, exatidão de cada calibrador dentro do intervalo de aceitação de ± 20% e uma distribuição aleatória dos valores dos residuais em torno da linha zero. Foi alcançado um limite de deteção de 5 ng/mL e um limite de quantificação de 10 ng/mL, tendo a eficiência da extração variado entre 98.5% e 103.3%. Foram cumpridos os critérios de aceitação para a precisão intra-dia e intermédia (< 20%) e para o bias (± 20): CV < 17.7% e bias < 11.6%. O α-PHP apresentou estabilidade no sangue por um período de 6h, quando as amostras foram mantidas na bancada à temperatura do laboratório; até 48h, quando os extratos resultantes das amostras processadas foram mantidos no amostrador automático à temperatura da sala dos equipamentos de GC-MS; e por 21 dias após 5 ciclos de congelamento/descongelamento. Não foi observado o fenómeno de carryover. Discussão: A metodologia validada demonstrou ser suficientemente sensível para a determinação de α-PHP em amostras de sangue. Conclusão: A técnica analítica GC-MS-EI revelou-se suficientemente sensível para a determinação do analito estudado em sangue, apresentando uma grande utilidade para ser usada em qualquer laboratório de toxicologia forense, com ou sem tecnologia mais sofisticada. Este é o primeiro procedimento analítico que combina SPE e GC-MS-EI para a determinação de α-PHP em sangue.N/

Exposição prolongada a cocaína documentada através da análise por segmento de amostras de cabelo de uma criança

Comunicação apresentada no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, 12-14 de outubro de 2023, Lamego, Portugal.N/

Desenvolvimento e validação de uma metodologia analítica para a determinação de α-PHP em sangue por GC-MS-EI

Poster apresentado em: 20º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses/5ª Reunião da Rede de Serviços Médico-Legais e Forenses de Países de Língua PortuguesaIntrodução: As Novas Substâncias Psicoativas (NSP) são alvo de grande preocupação a nível global, apesar dos contínuos esforços empregues pelos sistemas de controlo nacionais e internacionais para limitar a sua disseminação. A alfa-pirrolidinohexanofenona (α-PHP) é uma NSP recente, pertencente ao grupo das catinonas, com um reduzido número de estudos pulicados. Embora exista uma baixa incidência de consumo de NSP em Portugal, houve um notório aumento recente de doses apreendidas de α-PHP e um consequente aumento de casos detetados da substância em matrizes biológicas durante a realização das análises toxicológicas forenses de rotina de drogas de abuso realizadas no Serviço de Química e Toxicologia Forenses da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. Justificou-se, assim, desenvolver e validar uma metodologia analítica para a determinação e quantificação de α-PHP em sangue. Métodos: O procedimento analítico foi devidamente validado segundo a norma publicada pela American Academy of Forensic Sciences (AAFS) Standard Practices for Method Validation in Forensic Toxicology (ANSI/ASB Standard 036, 2019). Foram usados volumes de 500 μL de amostra de sangue às quais se adicionou o padrão interno, cocaína-d3. Seguidamente foi empregue a extração em fase sólida (SPE) com colunas de troca catiónica de modo misto (Oasis MCX®). Após secagem, os extratos foram reconstituídos em 60 µL de metanol e posteriormente analisados por GC-MS-EI com monitorização dos iões (77, 105 e 140) previamente selecionados em modo full-scan. Resultados: O método apresentou linearidade entre 10 e 1000 ng/mL, com coeficientes de determinação (r2) superiores a 0.999, exatidão de cada calibrador dentro do intervalo de aceitação de ± 20% e uma distribuição aleatória dos valores dos residuais em torno da linha zero. Foi alcançado um limite de deteção de 5 ng/mL e um limite de quantificação de 10 ng/mL, tendo a eficiência da extração variado entre 98.5% e 103.3%. Foram cumpridos os critérios de aceitação para a precisão intra-dia e intermédia (< 20%) e para o bias (± 20): CV < 17.7% e bias < 11.6%. O α-PHP apresentou estabilidade no sangue por um período de 6h, quando as amostras foram mantidas na bancada à temperatura do laboratório; até 48h, quando os extratos resultantes das amostras processadas foram mantidos no amostrador automático à temperatura da sala dos equipamentos de GC-MS; e por 21 dias após 5 ciclos de congelamento/descongelamento. Não foi observado o fenómeno de carryover. Discussão: A metodologia validada demonstrou ser suficientemente sensível para a determinação de α-PHP em amostras de sangue. Conclusão: A técnica analítica GC-MS-EI revelou-se suficientemente sensível para a determinação do analito estudado em sangue, apresentando uma grande utilidade para ser usada em qualquer laboratório de toxicologia forense, com ou sem tecnologia mais sofisticada. Este é o primeiro procedimento analítico que combina SPE e GC-MS-EI para a determinação de α-PHP em sangue.N/

Desenvolvimento de um método por GC-MS para a confirmação de opiáceos em bílis

Comunicação oral apresentada no 13º Encontro Nacional de Cromatografia, Lisboa, 17-19 dezembro, 2023.De acordo com o metabolismo hepático, os xenobióticos e respetivos metabolitos sofrem excreção biliar ou uma possível circulação entero-hepática. Assim, a bílis pode constituir um reservatório de substâncias metabolizadas e excretadas pelo fígado, sendo considerada uma matriz alternativa viável na análise de drogas de abuso. No entanto, são escassos os estudos que se encontram publicados na literatura sobre a sua utilização recorrendo às metodologias analíticas de triagem por imunoensaios seguida de confirmação por cromatografia de gases – espectrometria de massas (GC-MS). O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de confirmação de opiáceos em amostras de bílis por GC-MS após triagem por imunoensaios. A preparação das amostras foi realizada de acordo com as metodologias analíticas validadas e usadas na rotina do Serviço de Química e Toxicologia Forenses da Delegação do Centro do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, I.P. para a análise de opiáceos em sangue: triagem por imunoensaios, seguida de precipitação proteica, extração dos analitos com colunas Oasis® MCX (3 mL, 60 mg), derivatização por microondas dos extratos secos obtidos (MSTFA/5% TMCS, 90 segundos) e, posterior confirmação dos analitos presentes por GC-MS. Em todos os casos de triagem positiva para opiáceos, foi possível detetar e confirmar por GC-MS os analitos morfina, codeína e 6-acetilmorfina, com limites de deteção de 10 ng/mL. O método desenvolvido demonstrou ser útil para a confirmação de opiáceos em bílis por GC-MS, após triagem positiva pela técnica de imunoensaios enzimáticos, sobretudo quando a disponibilidade da matriz postmortem é determinada pelo caso sob investigação.N/

Analysis of opiates in urine using microextraction by packed sorbent and gas Chromatography- Tandem mass spectrometry

Opiates recreational consumption has always been a concern in society, public health, and in clinical toxicology analysis. The aim of this study was to develop and fully validate an analytical method, which was simple and rapid for the determination of tramadol, codeine, morphine, 6- acetylcodeine, 6-monoacetylmorphine and fentanyl using gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry. The procedure includes the use of microextraction by packed sorbent for sample clean-up. A mixed mode sorbent was used, allowing the minimal use of solvents. The method was validated in urine samples, with the ability to detect and quantify all analytes with satisfactory linearity (in the range of 1 – 1000 ng/mL for all analytes, except for fentanyl (10–1000 ng/mL)). Extraction efficiency varied from 17 to 107%, which did not impair sensitivity, taking into account the low LLOQs obtained (1 ng/ mL for all analytes; and 10 ng/mL for fentanyl). The developed procedure proved to be fast, selective, and accurate for use in routine analysis, with a low volume of sample (250 µL).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Determinação de drogas de abuso em fluido oral por precipitação proteica e GC-MS-EI

Póster apresentado no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Lamego, 12-14 outubro de 2023.O consumo de drogas de abuso pertencentes aos grupos das anfetaminas e metanfetaminas, opiáceos e cocaína e derivados, constitui uma ameaça à saúde pública e estabilidade social. Segundo o Relatório Europeu sobre Drogas de 2022, o consumo de drogas atingiu números elevados em toda a União Europeia. O objetivo deste estudo foi a deteção e confirmação de anfetamina, metanfetamina, benzoilecgonina e morfina em amostras de fluído oral e verificar se houve alguma degradação destas substâncias durante o período de armazenamento das amostras estudadas. Para o efeito foram usadas 53 amostras, previamente fortificadas com concentrações conhecidas das substâncias em estudo (pertencentes aos kits da OraSure Technologies, Inc. e destinados à análise de triagem de drogas de abuso pela técnica imunoenzimática ELISA do sistema Evolis Twin Plus, Bio Rad). As amostras apresentavam prazos de validade situados entre os anos 2021 e 2024. Foram usados volumes de 200 μL de fluido oral, para a extração das substâncias estudadas, usando o procedimento de precipitação proteica com acetonitrilo gelado. Seguidamente os extratos foram analisados por cromatografia de gases associada à espectrometria de massas. A identificação das substâncias foi realizada com um cromatógrafo de gases 7890B equipado com uma coluna cromatográfica HP-5MS (5% de fenilmetilpolisiloxano, 30m x 0,32mm; 0,25μm d.i.) e acoplado a um espetrómetro de massa de quadrupolo simples com uma fonte de impacto eletrónico de alta eficiência 5977A (GC-MS-EI, Agilent Technologies). Os dados foram inicialmente adquiridos em full SCAN e posteriormente em modo selected ion monitoring (SIM) usando o software de aquisição MassHunter WorkStation. As substâncias foram quimicamente derivatizadas por aquecimento induzido por microondas durante 90s (soluções de MBTFA para a anfetamina e metanfetamina e de MSTFA com 5% de TMCS para a morfina e benzoilecgonina) e estudados os seus padrões de fragmentação. Os iões foram escolhidos com base na melhor seletividade e abundância, de modo a maximizar as relações sinal-ruído. O método apresenta um limite de deteção de 20 ng/mL para todas as substâncias,tendo sido possível confirmar a presença de anfetamina, metanfetamina,benzoilecgonina e morfina, de acordo com os critérios de aceitação da World Anti-Doping Agency (WADA). Não se verificaram alterações significativas associadas ao tempo de armazenamento das amostras de fluido oral.N/