Avaliação dos efeitos de baixa e alta tensão de oxigenio em modelo in vitro da leishmaniose

Orientador: Selma GiorgioDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: o fluxo sangüíneo alterado, isquemia, proliferação celular e a presença de microrganismos resultam em queda acentuada de pressão parcial de oxigênio (hipóxia) no tecido lesado. Macrófagos se adaptam a hipóxia, alterando seu metabolismo, produção de linfocinas pro-inflamatórias e atividade fagocítica. No presente trabalho comparamos os efeitos da hipóxia (5% de O2) e da normóxia (21 % de 02) na infecção de macrófagos com o protozoário parasita Leishmania amazonensis. Macrófagos de duas diferentes origens (linhagem celular murina 774 e macrófagos peritoneais murinos) expostos a hipóxia mostraram redução na porcentagem de células infectadas e no número de parasitas intracelulares por célula. A cinética da infecção indicou que a hipóxia não deprime a fagocitose de L. amazonensis, mas induz macrófagos a reduzirem o parasitismo intracelular. Além disso, a. hipóxia não age sinergicamente com interferon gama (lFN-y) elipopolissacarídeo (LPS) em macrófagos para induzir morte do parasita. Experimentos também demonstram ausência de correlação entre a produção de óxido nítrico e o controle da infecção em macrófagos sob condições hipóxicas. Proteínas do choque térmico de 70kDa (HSP70) é induzida por hipóxia em muitos tipos de células e contribui para sua sobrevivência durante exposição a condições hipóxicas. Análises da expressão de HSP70 em linhagem celular murina J774, expostas à hipóxia, mostram uma notável redução na expressão de HSP70. Macrófagos infectados com L. amazonensis também reduziram a expressão de HSP70. Macrófagos infectados com amastigotas de L. amazonensis sob condições hiperbáricas (HBO) (2 horas, 2,5 ATA, 100% 02) apresentaram significativa redução na porcentagem de células infectadas e no número de parasitas intracelulares por células. Todos os resultados fornecem evidências de que a hipóxia, que ocorre em várias condições patológicas, e a HBO, podem alterar a susceptibilidade de macrófagos a infecção com LeishmaniaAbstract: The altered blood flow, isquemia, cell proliferation and the presence of microorganisms cause hypoxia (low pO2) in injured tissues. Macrophages adapt to hypoxia and alter their metabolism, pro-inflammatory Iymphokines production and phagocytosis activity. In the present study we compared the effect of 5% oxygen tension (hypoxia) and a normal tension of 21 % oxygen (normoxia) on macrophage infection by the protozoan parasite Leishmania amazonensis. Macrophages from two different sources (murine cell line J774 and murine peritoneal macrophages) exposed to hypoxia showed a reduction of the percentage of infected cells and of the number of intracellular parasites per cell. The kinetic of infection indicated that hypoxia did not depress L. amazonensis phagocytosis but induced macrophages to reduce intracellular parasitism. Furthermore, hypoxia did not act synergistically with gamma interferon (IFN-y) and bacterial lipopolisaccharides (LPS) in macrophages to induce parasite killing. Experiments also indicated no correlation between nitric oxide production and control of infection in macrophages under hypoxic condition. Heat shock protein 70 (HSP70) is induced by hypoxia in the most of mammalian cell types and contributes to their ability to survive during hypoxic episodes. Analyses of the Hsp70 in murine cell line J774 exposed to hypoxia indicated a notable reduction in HSP70 expression. Macrophages infected with L. amazonensis also showed a reduction in HSP70expression. Macrophages infected with L. amazonensis amastigotes under hyperbaric condition (HBO) (2 hours, 2,5 ATA, 100% 02) showed a significant decrease of the percentage of infected cells and number of intracellular parasites per cell. Taken together our results provided the first evidence that hypoxia, which occurs in various pathological conditions, and HBO treatment, can alter macrophage susceptibility to a parasite infectionMestradoMestre em Parasitologi

Effect Of Hypoxia On Macrophage Infection By Leishmania Amazonensis.

In the present study, we compared the effect of 5% oxygen tension (hypoxia) with a normal tension of 21% oxygen (normoxia) on macrophage infection by the protozoan parasite Leishmania amazonensis. Macrophages from different sources (human cell line U937, murine cell line J774, and murine peritoneal macrophages) exposed to hypoxia showed a reduction of the percentage of infected cells and the number of intracellular parasites per cell. Observations on the kinetics of infection indicated that hypoxia did not depress L. amazonensis phagocytosis but induced macrophages to reduce intracellular parasitism. Furthermore, hypoxia did not act synergistically with gamma-interferon and bacterial lipopolysaccharides in macrophages to induce killing of parasites. Experiments also indicated no correlation between nitric oxide production and control of infection in macrophages under hypoxic condition. Thus, we have provided the first evidence that hypoxia, which occurs in various pathological conditions, can alter macrophage susceptibility to a parasitic infection.90510-