Characterization and immunolocalization of RNA polymerase I transcription factor UBF with anti-NOR serum in protozoa, higher plant and vertebrate cells

We have used anti-NOR serum from a patient with rheumatoid arthritis, to study its reactivity on different phylogenetically separated species such as protozoa, higher plants, birds and mammals. The biochemical characteristics of the antigens detected after applying mono- and two-dimensional electrophoresis and electrophoretic transfers confirm that they correspond to the rRNA polymerase I transcription factor UBF. We have demonstrated the different molecular sizes, depending on the cell complexity, but the same neutral isoelectric points in whole cell extracts of the different species. We have also demonstrated an immunolocalization of this transcription factor to the fibrillar component in all the species studied. These results suggest a high conservation of UBF throughout evolution and the possibility of using this anti-NOR serum as a tool for the study of the structure, nucleolar organization and functional roles of the different nucleolar components

Variaciones de las actividades fosfodiesterasa y ATPasa tras la administración de somatostatina en cerebro e hipófisis de rata

En el presente trabajo se ha abordado el estudio del efecto de la Somatostatina (SRIF) hormona hipotalámica sobre actividades enzimáticas (PDE y ATPasas) que están involucradas en el mecanismo de acción de otras hormonas y que pudieran formar parte del de esta hormona en tejidos diana de su acción (sistema nervioso central y adenohipofisis). Para ello hemos realizado el siguiente planteamiento: 1) estudio en ratas hembras (raza Sprague-Dawley): hemos valorado distintas actividades ATPasicas caracterizando su acción sensibilidad a inhibidores etc. en tres fracciones subcelulares de cerebro y adenohipofisis. Además en la fracción soluble de ambos órganos se ha estudiado la PDE (GMPc de baja km) sensible a calcio y calmodulina y su modulación por estos agentes. 2) para comprobar si alguno de los efectos observados (activación de PDE por SRIF) son directos o pudieran estar mediados por la liberación o inhibición de otras hormonas o factores hemos estudiado la acción de esta sobre la PDE en células GH4C1 (células tumorales clonales de hipofisis). De los resultados obtenidos podemos decir en términos generales que la SRIF administrada in vivo (20 ug/100g peso corporal) produce una inhibición en las actividades ATPasa (Ca2+-Mg2+) y total (mezcla de diferentes actividades hidrolíticas de ATP) estudiadas a diferentes tiempos de la administración de SRIF (5 10 y 15 min) en cerebro y adenohipofisis y no afecta a la actividad dependiente de Na+ y K+ en cerebro. En este último órgano también se ha detectado una actividad ATP difosfohidrolasa (APIRASA) sensible a calmodulina einhibida por la SRIF. La actividad PDE dependiente de calcio y calmodulina se ha localizado en la fracción soluble de cerebro y adenohipofisis observándose que es aumentada por SRIF a todos los tiempos en cerebro y a los 5 y 10 min en adenohipofisis. Encontrándose la misma actividad aumentada en células GH4C1. En el presente trabajo hemos pretendido abordar el estudio del efecto de las somatostatina sobre actividades enzimáticas (PDE y ATPasas) que están involucradas en el mecanismo de acción de otras hormonas, en tejidos diana de esta hormona (Sistema Nervioso Central e Hipófisis). Para ello hemos realizado el siguiente planteamiento: a. Estudios en rata: Hemos valorado distintas actividades ATPasicas, caracterizando su acción, sensibilidad a inhibidores, etc., en tres fracciones subcelulares del cerebro y de la adenohipófisis. Además, en la fracción soluble de ambos órganos, se ha estudiado la PDE (GMPc Km baja) sensible a calcio y calmoduline, y su modulación por estos agentes. b. Para comprobar si alguno de los efectos vistos (activación de PDE por somatostatina) son directos o pudieran estar mediados por la liberación o inhibición de otras hormonas o factores, hemos estudiado la acción de esta hormona sobre la PDE de células GH4C1. Conclusiones: 1. En el cerebro de la rata existe además de las ATPasas descritas clásicamente, ATPasa (Ca2+ - Mg2+) y ATPasa (Na+ - K+), una actividad ATP difosfohidrolasa (aspirasa) que supone un porcentaje alto en la hidrólisis del nucleótido (ATP). 2. La administración de somatostatina a ratas produce una disminución de la actividad ATPasa (Ca2+ - Mg2+) en cerebro e hipófisis, y de otras actividades ATP hidrolíticas (aspirasa de cerebro). La actividad ATPasa (Na+ - K+) de cerebro no se ve afectada por la somatostatina. 3. Este efecto observado sobre la ATPasa (Ca2+ - Mg2+) puede formar parte del mecanismo de acción de la somatostatina o ser una consecuencia de dicha acción. 4. En cerebro e hipófisis de rata (fracción soluble) existe fosfodiesterasa dependiente de calcio y calmodulina. La actividad de esta enzima aumenta en los tejidos tras la administración de somatostatina. 5. Este efecto sobre la fosfodiesterasa es directo, puesto que se demuestra también en células GH4C1, y puede formar parte del mecanismo de acción de la somatostatina, potenciando el efecto inhibidor de la síntesis de AMPc