Antibióticos: ¿balas mágicas que ya no dan en el blanco?

Lejano parece el día, a inicios del siglo XX, en que Paul Ehrlich propuso el término de "balas mágicas" como compuestos con toxicidad selectiva capaces de actuar contra microorganismos responsables de infecciones, pero no contra las células eucarióticas del hospedero. Sin lugar a dudas, el hallazgo de la penicilina, la bala mágica por excelencia, es un hito que dio un giro en esencia, los microorganismos tienen mecanismos para hacerse "invisibles" a las balas mágicas o a la terapia utilizada para combatir las enfermedades infecciosas. Para muchos era evidente que el fin de las infecciones bacterianas estaba próximo, sin considerar otros elementos que también tienen un papel importante en la evolución y el desarrollo de la resistencia: la plasticidad de los microorganismos causantes de la infección, y la selección de cepas resistentes por el uso irracional de antibióticos

Ambiente genético del gen blactx-m-12 en aislamientos hospitalarios de klebsiella pneumoniae

The blaCTX-M-12 gene’s genetic environmnt in Klebsiella pneumoniae hospital isolates Resumen: En Colombia se han detectado genes del grupo CTX-M-1 con alta frecuencia en aislamientos de Klebsiella pneumoniae causantes de infección intrahospitalaria. El conocimiento de los factores genéticos que pueden favorecer la diseminación de estos genes entre especies bacterianas es un aspecto importante para el control de la resistencia. En este estudio se identificaron los plásmidos portadores del gen blaCTX-M-12 en 21 aislamientos clínicos de K. pneumoniae. Se evaluó por conjugación la transferencia de resistencia a antibióticos. Integrones, secuencias de inserción y otros elementos genéticos fueron detectados por amplificación del ADN plasmídico con la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Mediante análisis por PCR se determinó la relación entre el gen blaCTX-M-12 y los elementos genéticos detectados. En todos los aislamientos, el gen blaCTX-M-12 se encontró en plásmidos conjugativos de tamaños entre 65 y 106 kpb. La transferencia por conjugación de estos elementos móviles puede explicar la amplia diseminación de este gen entre enterobacterias causantes de infección nosocomial en hospitales de Bogotá, Colombia. El gen blaCTX-M-12 se encontró corriente abajo de ISEcp1, secuencia de inserción que se ha asociado con la movilización de determinantes genéticos de resistencia. Los promotores de ISEcp1, detectados por análisis de secuencia, pueden facilitar la expresión de la cefotaximasa codificada por este gen.Palabras clave: resistencia a antibióticos; elementos genéticos móviles; gen blaCTX-M-12; plásmidos conjugativos;  Klebsiella pneumoniae. Abstract: Genes from CTX-M-1 group have been detected with great frequency in Colombia in intrahospital infection-causing Klebsiella pneumoniae isolates. Knowledge regarding the genetic factors favouring such genes’ dissemination amongst bacterial species is an important issue for resistance control blaCTX-M-12 gene-carrying plasmids were identified in this study in 21 clinical K. pneumoniae isolates. Antibiotic resistance transfer was evaluated by mating. Integrons, insertion sequences and other genetic elements were detected by plasmid DNA amplification using polymerase chain reaction (PCR). The relationship between the blaCTX-M-12 gene and other genetic elements was determined by PCR analysis. The blaCTX-M-12 gene was disemifound on 52 to 106 Kpb conjugative plasmids in all isolates. These mobile elements’ transfer by mating may explain their wide dissemination amongst nosocomial infection-causing enterobacteria in hospitals in Bogota, Colombia. The blaCTX-M-12 gene was found downstream from ISEcp1, this being an insertion sequence which has been associated with resistance genetic determinants’ mobilisation. ISEcp1 promoters (detected by sequence analysis) may increase the expression of cefotaximase encoded by this gene.Key words: antibiotic resistance; mobile genetic element; the blaCTX-M-12 gene;  conjugal plasmid; Klebsiella Pneumoniae

Presence of salmonella enteritidis in poultry products and its impact on public health Presencia de Salmonella serovariedad Enteritidis en productos de origen avícola y su repercusión en salud pública

Salmonella serovar Enteritidis (Salmonella enterica, sub-species enterica serovar Enteritidis or Salmonella enteritidis, when it is artificially named as being a species) (1), is one of the most common causes of human gastroenteritis in cases of food poisoning; some authors consider it to be the most important agent on a world-wide basis. Outbreaks are associated with the intake of different kinds of food, but poultry products are most commonly involved. This agent‘s transmission occurs as a consequence of inadequately cooked chicken and eggs or during cross-contamination with other food. Salmonella Enteritidis and other serovars which produce food poisoning in humans, occasionally cause clinical disease in poultry (avian parathyphosis) or loss of weight-gain, and can generate asymptomatic carriers, which can contribute to the transmission (transovarial), during laying or storage. Globalisation, the open market and the poultry industry‘s growth have increased the intake and distribution of chicken, eggs and their subproducts and, therefore, the possibility of Salmonella spp transmission. Considering the public health importance of this agent, epidemiological studies contributing to the control and prevention of this zoonosis must be carried out. La salmonella serovariedad enteriditis (salmonella enterica subespecie enterica serovariedad Enteritidis, o Salmonella enteritidis cuando se la nombra artificialmente como especie) (1) es una de las causas más comunes de gastroenteritis por intoxicación de origen alimentario en humanos, considera da por algunos autores como la más importante en todo el mundo. La presentación de brotes puede involucrar el consumo de diversos alimentos, pero los productos de origen avícola son los más frecuentemente implicados. La transmisión del microorganismo es consecuencia de la cocción inadecuada del pollo y los huevos o de la contaminación cruzada con otros alimentos. La Salmonella Enteritidis y otras serovariedades que causan intoxicación alimentaria en humanos ocasionalmente producen enfermedad clínica en aves (paratifosis aviar) o merma de la ganancia de peso y puede generar el estado de portador asintomático que contribuye a la transmisión y presentación de casos en humanos. El microorganismo permanece por largos períodos en el ambiente y en las heces; los huevos pueden contaminarse por transmisión vertical (transovárica), durante la postura o el almacenamiento

Plasmidotipia y evaluación in vitro de la virulencia de cepas de Salmonella enteritidis de origen aviar

Con el fin de caracterizar a nivel biológico y molecular cepas de Salmonella entérica, subespecie entérica serotipo Enteritidis (Salmonella enteritidis) se obtuvieron y confirmaron bioquímica y serológicamente treinta cepas aisladas de aves clínicamente sanas. Las cepas fueron evaluadas mediante plasmidotipia y determinación de virulencia in vitro evaluando susceptibilidad antimicrobiana, actividad hemaglutinante manosa resistente y manosa sensible como indicativo de la presencia de adhesinas fimbriales y capacidad de sobrevivencia en el interior de macrófagos. La extracción de plásmidos se realizó por la técnica de lisis alcalina. Se obtuvieron perfiles de restricción con las enzimas PstI y SmaI. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó por la prueba de difusión de disco en agar. La actividad hemaglutinante en presencia y en ausencia de manosa fue evaluada frente a glóbulos rojos de ave, bovino, equino, humano (A+) y ovino. La capacidad de sobrevivencia en el interior de macrófagos se determinó valorando la viabilidad de las cepas 24 horas después de la ingestión por macrófagos de línea de origen murino. Veintinueve cepas (96.6%) mostraron un plasmido cuyo tamaño corresponde al plasmido de virulencia asociado a serotipo. Veintisiete cepas (90%) mostraron dos o más plasmidos. Perfiles de restricción realizados con las enzimas Pst I y Sma I permitieron establecer una alta asociación entre las cepas. Se determinó resistencia a uno o más antimicrobianos en catorce cepas de S. enteritidis (46.6%), se observó resistencia a oxitetraciclina, sulfatrimetroprim, estreptomicina y cloranfenicol. Ninguna cepa mostró resistencia a gentamicina y kanamicina. Se detectó actividad hemaglutinante manosa sensible como indicativo de adhesinas fimbriales tipo I en once cepas (36.6%) de las treinta evaluadas. La totalidad de las cepas sobrevivieron en el interior de macrófagos de línea J774A.1 y fueron viables 24 horas después de la ingestión. Con base en los resultados de este estudio se verificó la virulencia de cepas de Salmonella enteritidis de origen aviar, confirmando esta especie como fuente potencial de infección para humanos. La plasmidotipia, la susceptibilidad antimicrobiana, la detección de hemaglutininas y la sobrevivencia de las cepas en el interior de macrófagos permitieron caracterizar las cepas de campo y pueden constituirse en herramientas útiles para estudios biológicas y en combinación con otras técnicas moleculares y fenotípicas pueden contribuir a estudios epidemiológicos, dada la importancia en salud humana y animal de este patógeno

Clones y características genómicas de aislamientos de staphylococcus epidermidis multirresistentes

IP 1101-04-1007-98v.1 Informe final. - v.2 Identificacion de aislamientos destaphylococcusepidermidis por ribotip

Caracterización molecular de Staphylococcus aureus de origen nosocomial por Electroforesis de Enzimas Multilocus (MLEE)

Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE) was used to characterise 41 Staphylococcus aureus isolates taken from Hospital San Juan de Dios (Bogotá) patients and personnel at the Intensive Care Unit (ICU), from September 1998 to September 1999. The genetic relationships between isolates, as well as resistance profile influence, biotype and compilation time/date, were established. The experimental evidence suggests that the population structure corre-sponds to the clonal model described for Staphylococcus aureus populations, reflecting the prevalence of a small number of clones during the collection period. Se caracterizaron 41 aislamientos se Staphylococcus aureus tomados a pacientes y personal de la unidad de cuidados intensivos (UCI) del Hospital San Juan de Dios, en el periodo comprendido entre septiembre de 1998 y septiembre de 1999 por medio del método de caracterización de Electroforesis de Enzimas Multilocus(MLEE). Se establecieron las relaciones genéticas entre los individuos, así como influencia del perfil de resistencia, el biotipo y el periodo de recolección. La evidencia experimental sugirió que la estructura de la población analizada encaja en el modelo clonal descrito previamente para las poblaciones de Staphylococcus aureus, coincidiendo con la prevalencia de un pequeño número de clones durante el periodo de recolección.

Caracterización molecular de Staphylococcus aureus de origen nosocomial por Electroforesis de Enzimas Multilocus (MLEE)

Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE) was used to characterise 41 Staphylococcus aureus isolates taken from Hospital San Juan de Dios (Bogotá) patients and personnel at the Intensive Care Unit (ICU), from September 1998 to September 1999. The genetic relationships between isolates, as well as resistance profile influence, biotype and compilation time/date, were established. The experimental evidence suggests that the population structure corre-sponds to the clonal model described for Staphylococcus aureus populations, reflecting the prevalence of a small number of clones during the collection period. Se caracterizaron 41 aislamientos se Staphylococcus aureus tomados a pacientes y personal de la unidad de cuidados intensivos (UCI) del Hospital San Juan de Dios, en el periodo comprendido entre septiembre de 1998 y septiembre de 1999 por medio del método de caracterización de Electroforesis de Enzimas Multilocus(MLEE). Se establecieron las relaciones genéticas entre los individuos, así como influencia del perfil de resistencia, el biotipo y el periodo de recolección. La evidencia experimental sugirió que la estructura de la población analizada encaja en el modelo clonal descrito previamente para las poblaciones de Staphylococcus aureus, coincidiendo con la prevalencia de un pequeño número de clones durante el periodo de recolección.

Identificación por PCR-SSCP de genes de cefotaximasas en aislamientos hospitalarios de Enterobacteriaceae

CTX-M cefotaximases are the most widely distributed extended-spectrum beta-lactamases among Enterobacteriaceae and they are an important cause of microbial resistance in nosocomial infection-causing isolates. The object of this work was to identify group 1 CTX-M cefotaximase variants from PCR amplified blaCTX-M genes by single-stranded conformational polymorphism of restriction fragments (RF-SSCP). We analysed 49 Enterobacteria isolates using the RF-SSCP procedure standardised in this work; isolates were collected from eight hospitals attached to the Bogota Health Secretariat (Secretaría Distrital de Salud). CTX-M-12, CTX-M-15, CTX-M-12a and CTX-M-1 variants were detected as well as a new one, designated CTX-M-60. All variants were detected in hospital and community isolates thereby indicating these genes� possible high mobility from and towards hospital centres. This study represents the first report in Colombia of CTXM-12a and of the new evolutionary variant: CTX-M-60.Las cefotaximasas (CTX-M) son las beta-lactamasas de espectro extendido más ampliamente diseminadas entre especies de la familia Enterobacteriaceae, y son la causa principal de resistencia en aislamientos causantes de infección intrahospitalaria. El objetivo del presente trabajo fue identificar variantes de cefotaximasas del grupo CTX-M-1 mediante el análisis del polimorfismo conformacional de cadena sencilla (SSCP) de frag-mentos de restricción provenientes de los productos de la amplificación por PCR de los genes blaCTX-M. Con el procedimiento PCR-SSCP estandarizado, en este trabajo se analizaron 49 aislamientos de enterobacterias recolectados en 8 hospitales de Bogotá, D.C., adscritos a la Secretaría Distrital de Salud. Se detectaron las variantes CTX-M-12, CTX-M-15, CTX-M-12a, y CTX-M-1 y una nueva variante denominada CTX-M-60. Todas las variantes fueron detectadas tanto en aislamientos intrahospitalarios como de la comunidad, lo que indica posible movilidad de estos genes desde y hacia los centros hospitalarios. Esta publicación constituye el primer reporte en Colombia de la variante CTXM-12a y la nueva variante evolutiva CTX-M-60

Antibióticos: ¿Balas mágicas que ya no dan en el blanco?

Lejano parece el día, a inicios del siglo XX, en que Paul Ehrlich propuso el término de "balas mágicas" como compuestos con toxicidad selectiva capaces de actuar contra microorganismos responsables de infecciones, pero no contra las células eucarióticas del hospedero. Sin lugar a dudas, el hallazgo de la penicilina, la bala mágica por excelencia, es un hito que dio un giro en esencia, los microorganismos tienen mecanismos para hacerse "invisibles" a las balas mágicas o a la terapia utilizada para combatir las enfermedades infecciosas. Para muchos era evidente que el fin de las infecciones bacterianas estaba próximo, sin considerar otros elementos que también tienen un papel importante en la evolución y el desarrollo de la resistencia: la plasticidad de los microorganismos causantes de la infección, y la selección de cepas resistentes por el uso irracional de antibióticos

Ambiente genético del Gen blaCTX-M-12 en aislamientos hospitalarios de Klebsiella pneumoniae

The blaCTX-M-12 gene’s genetic environmnt in Klebsiella pneumoniae hospital isolates   Resumen: En Colombia se han detectado genes del grupo CTX-M-1 con alta frecuencia en aislamientos de Klebsiella pneumoniae causantes de infección intrahospitalaria. El conocimiento de los factores genéticos que pueden favorecer la diseminación de estos genes entre especies bacterianas es un aspecto importante para el control de la resistencia. En este estudio se identificaron los plásmidos portadores del gen blaCTX-M-12 en 21 aislamientos clínicos de K. pneumoniae. Se evaluó por conjugación la transferencia de resistencia a antibióticos. Integrones, secuencias de inserción y otros elementos genéticos fueron detectados por amplificación del ADN plasmídico con la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Mediante análisis por PCR se determinó la relación entre el gen blaCTX-M-12 y los elementos genéticos detectados. En todos los aislamientos, el gen blaCTX-M-12 se encontró en plásmidos conjugativos de tamaños entre 65 y 106 kpb. La transferencia por conjugación de estos elementos móviles puede explicar la amplia diseminación de este gen entre enterobacterias causantes de infección nosocomial en hospitales de Bogotá, Colombia. El gen blaCTX-M-12 se encontró corriente abajo de ISEcp1, secuencia de inserción que se ha asociado con la movilización de determinantes genéticos de resistencia. Los promotores de ISEcp1, detectados por análisis de secuencia, pueden facilitar la expresión de la cefotaximasa codificada por este gen. Palabras clave: resistencia a antibióticos; elementos genéticos móviles; gen blaCTX-M-12; plásmidos conjugativos;  Klebsiella pneumoniae.   Abstract: Genes from CTX-M-1 group have been detected with great frequency in Colombia in intrahospital infection-causing Klebsiella pneumoniae isolates. Knowledge regarding the genetic factors favouring such genes’ dissemination amongst bacterial species is an important issue for resistance control blaCTX-M-12 gene-carrying plasmids were identified in this study in 21 clinical K. pneumoniae isolates. Antibiotic resistance transfer was evaluated by mating. Integrons, insertion sequences and other genetic elements were detected by plasmid DNA amplification using polymerase chain reaction (PCR). The relationship between the blaCTX-M-12 gene and other genetic elements was determined by PCR analysis. The blaCTX-M-12 gene was disemifound on 52 to 106 Kpb conjugative plasmids in all isolates. These mobile elements’ transfer by mating may explain their wide dissemination amongst nosocomial infection-causing enterobacteria in hospitals in Bogota, Colombia. The blaCTX-M-12 gene was found downstream from ISEcp1, this being an insertion sequence which has been associated with resistance genetic determinants’ mobilisation. ISEcp1 promoters (detected by sequence analysis) may increase the expression of cefotaximase encoded by this gene. Key words: antibiotic resistance; mobile genetic element; the blaCTX-M-12 gene;  conjugal plasmid; Klebsiella Pneumoniae