Complexidade do proteoma de Schistosoma mansoni na miniatura da fase larval mirac?dio.

Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Biol?gicas. N?cleo de Pesquisas em Ci?ncias Biol?gicas, Pr?-Reitoria de Pesquisa de P?s Gradua??o, Universidade Federal de Ouro Preto.A esquistossomose ? um problema de sa?de p?blica muito comum nas regi?es tropicais ou subtropicais do globo. No Brasil, o agente etiol?gico da esquistossomose ? o Schistosoma mansoni, uma das principais esp?cies do g?nero respons?veis pelo alto ?ndice de morbidade e impacto socioecon?mico provocados pela doen?a. Esse parasito possui um ciclo biol?gico complexo envolvendo dois hospedeiros: um definitivo mam?fero, que inclui os seres humanos, e um hospedeiro intermedi?rio, representados, no Brasil, por moluscos do g?nero Biomphalaria. Existem muitos estudos publicados abordando a an?lise prote?mica de alguns est?gios de vida desse platelminto, por?m a caracteriza??o prote?mica em larga escala da fase larval de vida livre, a qual infecta o hospedeiro invertebrado, ainda ? muito restrita. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o proteoma sol?vel e de membrana do mirac?dio de S. mansoni. Os ovos foram recuperados a partir da digest?o tr?ptica dos f?gados de camundongos BALB/c infectados. As prote?nas sol?veis foram obtidas por interm?dio da homogeneiza??o da larva em tamp?o Tris-HCl pH 7,5 contendo inibidores de proteases e a fra??o de membrana recuperada por centrifuga??o. Em ambos os extratos foi adicionado surfactante para garantir uma melhor solubiliza??o das prote?nas hidrof?bicas. Os pept?deos oriundos da digest?o tr?ptica das prote?nas foram analisados por nanocromatografia l?quida acoplada ? espectrometria de massas. Ao todo, 2.555 sequ?ncias de prote?nas foram identificadas. As an?lises individuais dos proteomas sol?vel e de membrana forneceram 1.604 e 1.947 identidades, respectivamente. A categoriza??o funcional das prote?nas ocorreu via Gene Ontology, sendo poss?vel detectar uma variedade de vias metab?licas e de sinaliza??o celular nesse est?gio larval. Um conjunto seleto de pept?deos, tais como NPP-1 prepropeptide\x3b Putative neuropeptide e neuropeptide Y prohormone 1, bem como prote?nas relacionadas ao sistema nervoso do parasito foram identificados, pioneiramente, nesse trabalho. A quantifica??o label free das prote?nas totais, por sua vez, determinou a abund?ncia relativa de 642 biomol?culas, as quais incluem prote?nas de membranas, prote?nas secretadas, prote?nas Venom Allergen-Like e proteases. A an?lise prote?mica shotgun dessa fase larval de S. mansoni contribuiu para o melhor entendimento da composi??o molecular do parasito e apontou vias que podem ser de particular interesse no contexto da rela??o parasito-hospedeiro.Schistosomiasis is a very common public health problem in tropical or subtropical regions worldwide. In Brazil, the etiologic agent of schistosomiasis is Schistosoma mansoni, one of the major species of the genus responsible for the high morbidity index and socioeconomic impact caused by the disease. This parasite has a complex biological cycle involving two hosts: a mammalian definitive host, including human beings, and an intermediate host, represented in Brazil by mollusks of the genus Biomphalaria. There are many published studies approaching the proteomic analysis of some stages of life of this flatworm, but the shotgun proteomic characterization of the free-living larval phase, which infects the invertebrate host, is still very restricted. In this context, the aim of this work was to characterize the soluble and membrane proteome of the miracidium of S. mansoni. The eggs were recovered from tryptic digestion of the livers of infected BALB/c mice. Soluble proteins were obtained through homogenization of the larvae in pH 7.5 Tris-HCl buffer containing protease inhibitors and the membrane fraction recovered by centrifugation. In both extracts surfactant was added to ensure a better solubilization of the hydrophobic proteins. The peptides from tryptic digestion of proteins were analyzed by nano-liquid chromatography coupled to mass spectrometry. In all, 2,555 protein sequences were identified. Individual analysis of the soluble and membrane proteomes provided 1,604 and 1,947 identities, respectively. The functional categorization of proteins occurred via Gene Ontology, being possible to detect a range of metabolic and cell signaling pathways at this larval stage. A select set of peptides, such as NPP-1 prepropeptide\3 Putative neuropeptide and neuropeptide Y prohormone 1, as well as proteins related to the parasite?s nervous system were first identified in this work. The label free quantification of total proteins, in turn, determined the relative abundance of 642 biomolecules, which include membrane proteins, secreted proteins, Venom Allergen-Like proteins and proteases. The shotgun proteomic analysis of this larval stage of S. mansoni added to the better understanding of the molecular composition of the parasite and pointed to pathways that may be of particular interest in the context of the host-parasite relationship