Repercussão da imunoterapia específica na população T1 e T2 de linfócitos periféricos em doentes atópicos

Resumo: A coordenação das características humorais e celulares da resposta alérgica, sabe-se hoje, está dependente da regulação por linfócitos T. As vacinas de alergénios são uma terapêutica que consegue modular a resposta das células T, e cujos mecanismos imunológicos permanecem incompletamente esclarecidos.Objectivo: Avaliar o efeito da imunoterapia, após um ano de tratamento, na expressão de citocinas de perfil T1 e T2 em linfócitos de sangue periférico de doentes atópicos.Material e métodos: Estudaram-se dez doentes atópicos sensibilizados a aeroalergénios comuns a fazerem vacinas de alergénios num período médio de um ano. Dentre estes, seis foram estudados antes e após a vacina. Como controlo estudou-se um grupo atópico sem imunoterapia constituído por 14 doentes também sensibilizados a aeroalergénios comuns e um grupo de indivíduos não atópicos, saudáveis, constituído por 7 elementos. A activação dos linfócitos T fez-se com PMA, ionomicina e brefeldina e estudaram-se as citocinas intracitoplasmáticas IFN-γ, IL-4, IL-5 e IL-10 por citometria de fluxo. Procedeu-se a análise estatística por testes não paramétricos (Teste de Mann-Whitney U e Wilcoxon), considerando-se significativo pâ¤0,05.Resultados: A expressão de IL-4 e IL-5 nas células T, caracteristicamente aumentada nos doentes atópicos, respectivamente 13,8 (3,1-31,8) e 6,7% (1,0-20,4), é significativamente mais baixa no grupo que realizou a imunoterapia [5,4 (2,9-15,6) p=0,007 e 2,1% (0,6-4,8) p=0,035] não diferindo do grupo controlo não atópico [5,1 (4,1-6,9) e 1,0 (0,4-2,1)]. Os níveis de IFN-γ não variaram significativamente entre os três grupos estudados, mas a razão IFN-γ/ /IL-4 nos linfócitos T CD4 aumentou significativamente nos doentes submetidos a imunoterapia. Por outro lado, houve um aumento da expressão de IL-10 nas células T circulantes do grupo sob imunoterapia, comparativamente a controlos não atópicos [1,9 (1,0-4,9) versus 1,4% (0,9-1,4) p=0,02], sendo mais evidente nos linfócitos T CD8. A IL-10 correlacionou-se de forma significativa com todas as citocinas de perfil T2 (IL-4 e IL-5) e com o fenótipo Tc2.Conclusão: Após um ano de imunoterapia, a resposta das células T do sangue periférico a uma estimulação policlonal evidenciou uma diminuição da expressão das citocinas (IL-4 e IL-5), caracteristicamente aumentadas na doença alérgica. O aumento da IL-10, que também verificámos, sugere a existência de uma população reguladora de perfil T2, sendo mais evidente nos linfócitos T CD8.Rev Port Pneumol 2006; XII (2): 107-130 Abstract: Allergen-specific immunotherapy has been used for successful treatment of atopic diseases. They may act by modifying the patterns of cytokines produced by T cells. However, the precise mechanism by which it accomplishes these effects is still incompletely understood.Objective: To evaluate the effect of one year immunotherapy on cytokines profiles T1 and T2 of peripheral blood lymphocytes in atopic patients.Methods: We studied 10 atopic patients sensitised to common environmental allergens receiving immunotherapy over one year mean period. Six of these patients were studied before and after immunotherapy. Fourteen atopic patients untreated and 7 non-atopic subjects were used as control groups. Intracellular cytokine production (IFN-γ; IL-4; IL-5; IL-10) was determined by flow cytometry following stimulation with phorbol myristate acetate (PMA), ionomycin and brefeldin. Mann-Whitney U and Wilcoxon non-parametric tests were utilized for the statistical analysis.Results: The expression of IL-4 and IL-5 in T cells, characteristically increased in atopic patients, respectively 13.8 (3.1 â 31.8) and 6.7% (1.0 -20.4), was significantly lower in the immunotherapy group [5.4 (2.9 -15.6) p=0.007 and 2.1% (0,6 â 4.8) p=0.035] and similar in the non-atopic control group. The levels of IFN-γ did not differ between the studied groups but the ratio IFN-γ / IL-4 produced by CD4+ T lymphocytes increased significantly in the patients receiving immunotherapy. In addition, there was an increase in the expression of IL-10 by T cells of the immunotherapy group compared to the non-atopic controls [1.9 (1.0 â 4.9) versus 1.4% (0.9 â 1.4) p=0.02], being more evident in CD8+ T lymphocytes. IL-10 correlated significantly with all the profile T2 cytokines (IL-4 and IL-5) and with the phenotype Tc2.Conclusion: After one year of immunotherapy the peripheral T cells response to a polyclonal stimulation revealed a reduction in IL-4 and IL-5 production, characteristically increased in atopic disease. The increase of IL-10 that we found in our study suggested the existence of a profile T2 regulatory population, more evident in CD8+T lymphocytes.Rev Port Pneumol 2006; XII (2): 107-130 Palavras chave: Imunoterapia, linfócitos T1 e T2, razão IFN-γ / IL-4, IL-10, Keywords: Immunotherapy, T1 and T2 lymphocytes, ratio IFN-γ / IL-4, IL-1

Estudo de polimorfismos genéticos do HLA (classes I e II) e do TNF-α em doentes com sarcoidose

Resumo: Introdução: A susceptibilidade genética na ocorrência da sarcoidose é sugerida por alguns factores, nomeadamente pela observação de casos de agregação familiar e a associação da raça a diferentes tipos de incidência e gravidade da doença. Vários estudos têm evidenciado a associação da classe I e especialmente da classe II do sistema HLA com a susceptibilidade à sarcoidose.Objectivos: Estudo dos polimorfismos genéticos da classe I e II do sistema HLA e do TNF-α num grupo de doentes com sarcoidose, nomeadamente a sua influência na susceptibilidade, apresentação clínica e evolução da doença.Material e métodos: Foram incluídos 104 doentes com sarcoidose, tendo sido estudadas a apresentação clínica, funcional, radiológica e os resultados do LBA. Foram usados métodos de biologia molecular na genotipagem do HLA-A*, B*, C*, DRB1*, DQB1* e TNF-α. O ADN foi extraído do sangue periférico e foram usados os métodos PCR-SSP e PCR-reverse hibridization. As frequências alélicas foram comparadas com controlos da mesma região geográfica pelo teste Ï2, sendo usado o teste Kruskal-Wallis para variáveis contínuas.Resultados: Comparativamente com os controlos, os doentes incluídos apresentavam frequências aumentadas de: B*08 (10,6% vs 6,1%), OR=1,8, IC=[1,1;3,1], p=0,02; DRB1*12 (4,3% vs 1,7%), OR=2,63, IC=[1,1;6,1], p=0,03. Os doentes com eritema nodoso apresentaram aumento das frequências alélicas de DRB1*03 (28% vs 9,3%), RR=2,39, IC=[1,5;3,8], pc=0,01 e DQB1*02 (38% vs 18%), RR=2,1, IC=[1,3;3,3], pc=0,02. O alelo DQB1*03 está diminuído nos doentes que apresentam síndroma ventilatória obstrutiva, RR=0,53, IC=[0,3;0,9], pc=0,05. O alelo DRB1*15 encontra-se significativamente associado quer à síndroma ventilatória restritiva quer à diminuição da transferência alveolocapilar (21,1% vs 6,6%), RR=2,46, IC=[1,35;4,48], p=0,01 e (18,1% vs 3,8%), RR=1,87, pc=0,05, respectivamente. Por sua vez, o genótipo A/A (high) do TNF-α apresentou uma frequência aumentada (p=0,04) nos doentes com eritema nodoso.Conclusões: Os resultados obtidos adicionam evidência ao facto de, quer a classe I quer a classe II do sistema HLA influenciarem a susceptibilidade, o tipo de apresentação, o grau de gravidade e a evolução na sarcoidose. Por outro lado, o eritema nodoso parece relacionar-se com o genótipo de elevada produção de TNF-α, associação esta já anteriormente descrita.Rev Port Pneumol 2008; XIV (6): 727-746 Abstract: Introduction: Several factors suggest a genetic predisposition to sarcoidosis, namely the recognition of race as a risk factor and the occurrence of familial clustering of cases. Several studies have reported an association of sarcoidosis and HLA class I and especially class II alleles in different populations.Aim: HLA class I, class II and TNF-α genotyping in a group of sarcoidosis patients and its relation with clinical presentation and outcome.Material and methods: A total of 104 sarcoidosis patients were included. Clinical presentation, functional, radiology, BAL findings and organ involvement were studied. HLAâ A*, -B*, -C*, DRB1*, DQB1* and TNF-α were genotyped by molecular biology methods. DNA was extracted from peripheral blood and PCR-SSP and PCR-reverse hybridisation methods were used. Allele frequencies were compared with controls from the same region. The X2 test was used for discrete values and the Kruskal-Wallis test for continuous values.Results: When patients were compared with controls we noticed increased frequencies of B*08 (10.6% vs. 6.1%), O.R.=1.8, C.I.=[1.1;3.1], p=0.02; DRB1*12 (4.3% vs. 1.7%), O.R.=2.63, C.I.=[1.1;6.1], p=0.03. Patients with erythema nodosum have increased frequencies of the alleles DRB1*03 (28% vs. 9.3%), R.R.=2.39, C.I.=[1.5;3.8], pc=0.01 and DQB1*02 (38% vs. 18%), R.R.=2.1, C.I.=[1.3;3.3], pc=0.02. Allele DQB1*03 is decreased in patients with obstructive pattern R.R.=0.53, C.I.=[0.3;0.9], pc=0.05. Allele DRB1*15 is related to restrictive pattern and reduced diffusion capacity (21.1% vs. 6.6%), R.R.=2.46, C.I.=[1.35;4.48], p=0.01 and (18.1% vs. 3.8%), R.R.=1.87, pc=0.05 respectively. The TNF-α A/A (high) genotype is significantly associated with erythema nodosum (p=0.04).Conclusions: These data add support to the genetic association of HLA class I and II with sarcoidosis in terms of susceptibility, type of presentation, severity and outcome. Moreover as previously described in other populations, the TNF-α A/A (high) genotype has a significant association with erythema nodosum.Rev Port Pneumol 2008; XIV (6): 727-746 Palavras-chave: Sacordoise, genética, HLA, Key-words: Sarcoidosis, genetics, HL

Suberose e doença dos criadores de aves: estudo comparativo do perfil radiológico, funcional e do lavado broncoalveolar

RESUMO: A alveolite alérgica extrínseca (AAE) é uma doença intersticial pulmonar de mediação imunológica, resultando da inalação repetida de vários agentes ambientais. Tem sido descrita heterogeneidade da apresentação clínica e do perfil do líquido de lavagem broncoalveolar (LLBA), possivelmente relacionada com diferentes exposições ocupacionais.O objectivo deste trabalho foi comparar as características clínicas, funcionais, radiológicas e do LLBA de duas das mais frequentes AAE no nosso país: a suberose e a doença de criadores de aves (DCA).Foram estudados 81 doentes com suberose, com média de idades de 38,8±11,3 anos e exposição média de 20,0±10,5 anos e 32 doentes com DCA, com uma média de idades de 46,3±11,8 anos e exposição média de 10,5±1,0 anos.Os doentes com DCA apresentavam mais formas agudas, enquanto as formas subagudas e crónicas predominaram na suberose. A síndroma ventilatória restritiva foi o padrão funcional mais frequente, sendo mais severo na DCA. As opacidades em âvidro despolidoâ foram o padrão mais frequentemente encontrado na tomografia axial computorizada de alta resolução. A normalidade da radiografia de tórax foi mais frequentemente observada na suberose. Ambos os tipos de AAE tinham alveolite linfocítica no LLBA: suberose â 6,6±5,7 x 105 ml-1 células, 58,8±18,9% linfócitos; DCA â 9,0±6,5 x 105 ml-1 células, 61,7±22,2% linfócitos. Apesar de os linfócitos CD8+ do LLBA predominarem em ambas doenças, a percentagem de células CD4+ e a relação CD4/CD8 eram significativamente mais elevadas na DCA (suberose: 0,47±0,33 versus BFD: 1,1±1,5; p <0.005). Para além disso, a celularidade do LLBA e o número de mastócitos eram também significativamente mais elevados na DCA.Em conclusão, a suberose e a doença de criadores de aves são AAE com diferentes perfis clínicos e laboratoriais, sugerindo que, apesar das suas semelhanças fisiopatológicas, diferentes exposições antigénicas podem causar uma diferente dinâmica da resposta imune/inflamatória do pulmão.REV PORT PNEUMOL 2004; X (1): 63-75 ABSTRACT: Extrinsic Allergic Alveolitis (EAA) is an immunologically mediated interstitial lung disease that may result from repeated inhalation of many different environmental agents. Heterogeneity of the clinical presentation and bronchoalveolar lavage profiles has been described, possibly related to different occupational exposures. The aim of our study was to compare bronchoalveolar lavage fluid (BALF), clinical, functional and radiological characteristics of the two most frequent forms of EAA seen in our practice: Suberosis and Bird Fancierâs Disease (BFD).We included 81 patients with Suberosis, with a mean age of 38.8±11.3 years and a mean exposure of 20.0±10.5 years and 32 patients with BFD, with a mean age of 46.3±11.8 years and mean exposure of 10.5±1.0 years.Patients with BFD had more acute forms, while subacute and chronic presentations predominated in Suberosis. Restrictive defect was the most frequent pattern of lung function impairment, and more severe in BFD. Ground glass opacities were the most frequent pattern in high-resolution computed tomography. A normal chest x-ray was more frequently seen in Suberosis. Both types of EAA had lymphocytic alveolitis in BALF: Suberosis 6.6±5.7 x 105 ml-1 cells, 58.8±18.9% lymphocytes; bird fancierâs disease - 9.0±6.5 x 105 ml-1 cells, 61.7±22.2% lymphocytes. Although BALF CD8+ lymphocytes predominated in both diseases, the proportion of CD4+ and CD4/CD8 ratios were significantly higher in Bird Fancierâs Disease (Suberosis: 0.47±0.33 versus BFD: 1.1±1.5; p <0.005). Moreover, BALF cellularity and mast cell counts were also significantly higher in BFD.In conclusion, Suberosis and bird fancierâs disease are EAA with different clinical and laboratory profiles, suggesting that despite their pathophysiological similarities, different antigenic exposures may cause different immune and inflammatory response dynamics in the lung.REV PORT PNEUMOL 2004; X (1): 63-75 Palavras-chave: Lavagem broncoalveolar, TAC-AR, suberose, doença de criadores de aves, Key-words: Bronchoalveolar lavage, HRCT, suberosis, bird fancierâs diseas