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    Illuminated micro-catheter assisted trabeculotomy : literature review

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    Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2020Objetivo: Revisão da literatura da trabeculotomia assistida por microcateter iluminado (MAT) no tratamento do glaucoma pediátrico. Métodos: Realizou-se uma revisão da literatura até Janeiro de 2020, utilizando a pesquisa eletrónica na PubMed (MEDLINE) e Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL). A informação de cada artigo for compilada com base na abordagem terapêutica, tendo sido depois avaliada e interpretada criticamente. A análise dos artigos incluiu características do paciente, pressão intraocular (PIO), número de medicamentos para glaucoma, taxa de sucesso cirúrgico, causas de falha, complicações intra e pós-operatórias. Resultados: Foram incluídos onze estudos na revisão: oito MAT casos-serie e três ensaios clínicos randomizados, dos quais dez são estudos comparativos (entre MAT e goniotomia/CT/trab-trab). Cinco estudos incluíram apenas pacientes com PCG e seis estudos incluíram pacientes com PCG e/ou SCG. Foi incluída a análise de 507 olhos de 423 pacientes, sendo que a MAT foi realizada em 305 olhos, dos quais 197 olhos (64.7%) foram submetidos à canalização completa e 108 olhos (35.4%) apenas a canalização. Em 31 olhos (10.2%), a MAT não foi tecnicamente possível ser realizada, sendo realizada conversão para CT. A idade média no momento da cirurgia foi de 25.7±15.0 meses e o seguimento médio entre estudos foi de 13.0±8.5 meses. A PIO no pós-operatório e o número de medicamentos aos 24 meses de pós-operatório (11.5±3.4mmHg, 0.3±0.6 medicamentos) foram significativamente menores que os valores pré-operatórios (29.6±6.4mmHg, 2.0±0.9 medicamentos). A taxa média de CS foi de 75.0% e 65.5% aos 12 e 24 meses, respetivamente e a taxa média de QS foi de 86.8% e 83.9% aos 12 e 24 meses, respetivamente. Nos olhos submetidos à MAT, 46 falharam, a maioria (n=19 olhos, 41.3%) devido à necessidade de cirurgia adicional. A complicação intra e/ou pós-operatória mais comum na MAT foi o hifema. Conclusões: A MAT obteve efeitos significativos na redução da PIO com complicações mínimas no pós-operatório precoce (até 24 meses) e redução no uso de medicamentos no glaucoma pediátrico (PCG e/ou SCG), não apenas como intervenção inicial, como em pacientes com cirurgias prévias. Pode ser utilizado com sucesso para cateterizar o canal de Schlemm na maioria dos casos. Representa uma escolha razoável de tratamento cirúrgico inicial e repetido do glaucoma pediátrico. Serão necessárias mais pesquisas para determinar o sucesso e a segurança a longo prazo deste procedimento. Palavras-chave: glaucoma pediátrico, glaucoma congénito, pressão intraocular, trabeculotomia 360o, microcateter iluminado.Purpose: Review the literature of MAT for the treatment of pediatric glaucoma. Methods: Literature review from inception to January 2020 performed using an electronic database search on PubMed (MEDLINE) and Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL). Data retrieved from the articles included patient’s characteristics, IOP, glaucoma medication’s number, surgical success rate, failure causes, intra and postoperative complications. Results: Eleven studies were included in the review, 8 were MAT case series and 3 were RCT, of which 10 were comparative studies (between MAT and goniotomy/CT/trab-trab). Five studies included only patients with PCG and six studies included patients with PCG and/or SCG. Analysis of 507 eyes of 423 patients were included, MAT was performed in 305 eyes. of which 197 eyes (64.7%) underwent complete canalization and 108 eyes (35.4%) only partial SC canalization. In 31 eyes (10.2%) MAT was not technically possible with conversion to CT. The average age at the time of surgery was 25.7±15.0 months and the mean time of follow was 13.0±8.5 months. Postoperative IOP and number of glaucoma medications at 24 follow-up months (11.5±3.4mmHg, 0.3±0.6 medications) were significantly lower in comparison to preoperative values (29.6±6.4mmHg, 2.0±0.9 medications). The average CS rate was 75.0% and 65.5% at12 and 24 months of follow-up, respectively, and the mean QS rate was 86.8% and 83.9%, respectively. In the eyes that underwent MAT, 46 failed, most of them (n =19 eyes, 41.3%) due to need for additional glaucoma surgery. The most common intra and/or postoperative MAT complication was hyphema. Conclusions: MAT achieved significant pressure-lowering effects with minimal complications in the early postoperative course (up to 24 months) and a reduction in medication use, in pediatric glaucoma (PCG and/or SCG), not only as an initial intervention but also in patients with previous surgeries. It can be successfully used to catheterize SC in most cases. It represents a reasonable choice of initial and repeat surgical treatment of pediatric glaucoma. Further research is warranted to determine the long-term success and safety of this procedure

    Acute and Subacute Toxicity Study of Lehana Yogas in Wistar Albino Rats

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    Lehana Yogas is an Ayurvedic preparation which are known to enhance growth and development by providing sufficient nutrition and promoting health with improving intellect and speech and administered frequently with ghee and honey to children’s as immune boosters. In this study we assessed the safety parameters of the Lehana Yogas mentioned and its effect on acute and subacute administration in Wistar albino rats. The Wistar strain albino rats were divided into group of five, vehicle group of Ghrita-Madhu, Ghrita-Madhu with Suvarna Bhasma, Ghrita-Madhu -Suvarna Bhasma with Vacha Churna, Ghrita-Madhu -Suvarna Bhasma with Amalaki Churna, respectively. The duration of administration was for 28 days. During the course of study, no mortality and no significant behavioral changes were noticed in any group studied. No major alterations were observed in hematology and serum biochemistry reports. Histopathology of vital organs also shown no toxic effects. Materials and Methods: Thirty albino rats of either sex were selected and assigned to 5 groups of 6 each. Drugs will be administered for the duration of 28 days and will be assessed for toxicity profile at the end of the study. Result: Animals who were administered daily with Lehana Yogas for longer duration did not show any mortality. Hence, it indicates safer use of drugs in terms acute and subacute level of administration. Discussion: It is concluded that the administration of Lehana Yogas is safe and non-toxic at the tested dose levels

    Princípios da Haia sobre o direito aplicável aos contratos internacionais : o recurso à soft law

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    O trabalho objetiva analisar os efeitos do mais recente instrumento de Direito Internacional Privado que visa regulamentar o Direito Aplicável aos contratos comerciais internacionais qual seja, os Princípios da Haia. Deste modo, a primeira parte está voltada a pesquisar as ferramentas de Direito Internacional aplicável aos contratos, antecedentes aos referidos Princípios. A partir disso, passa-se ao estudo da construção dos Princípios da Haia. Em seguida, é realizado o exame do teor dos referidos Princípios, em especial o âmbito de aplicação e a possibilidade de recurso a instrumentos de soft law como direito aplicável tanto por tribunais arbitrais como por tribunais estatais. E, por último, pretende-se averiguar os efeitos dos Princípios quanto a sua aplicação sob o olhar da doutrina, a qual apresenta divergências, e pela jurisprudência arbitral e estatal, através de análise de casos. O método utilizado é o dialético. Como resultados depreende-se a ampliação do âmbito da autonomia da vontade dos contratantes ao poderem recorrer a instrumentos de soft law como direito aplicável independente do meio de resolução de conflitos e a crescente utilização também pela jurisdição estatal brasileira desses recursos e reconhecimento como sendo os mais adequados à realidade do comércio internacional.The present work aims to analyze the effects of the most recent Private International Law instrument which regulates the Applicable Laws on commercial contracts, namely the Hague Principles. Hence, the first part is devoted to researching the tools applicable to Internacional Law on contracts prior to the aforementioned principles. Then, there is a study of the construction of Hague Principles. Next, the content of said principles is analyzed, with special emphasis placed upon the application and possibility of recourses to soft law instruments as the law applicable both in arbitration courts and state courts. Finally, the effects of the Principles are investigated regarding their application under the doctrine, which presents divergences, and also under arbitration and state litigation, through case analysis. The method used is the dialectic. As a result, it is assumed the increase of the contractors' right to bequeath when choosing soft law instruments as the applicable law, regardless of the means of conflict resolution and the growing use by Brazilian state courts of such recourses as well as its recognition of being the most adequate concerning the reality of international trade

    Bordetella pertussis, an agent not to forget: a case report

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    INTRODUCTION: In the past, pertussis affected particularly children under 6 years of age, but recent trends show that there is a shift toward the older age group. The clinical presentation can be atypical in the adolescent age group, and the disease is often misdiagnosed. CASE PRESENTATION: We present a case of an 11-year-old male patient oriented to our unit with anorexia, weight loss and persistent cough with nocturnal paroxysms for 4 weeks. He also reported occasional wheezing and chest tightness. He denied fever, chills, myalgia, sore throat, or rhinorrhea. The patient presented to his primary care physician 1 week prior with the same complaint and was treated with amoxicillin and ebastine. Facing the persistence of the complaints he was oriented to our unit in order to exclude tuberculosis. Further study confirmed Bordetella pertussis infection and he started clarithromycin (15 mg/kg/day for 14 days). The patient's symptoms resolved after two weeks. Two of the patient's family members have developed symptoms of Bordetella pertussis infection and were treated after convenient study. CONCLUSION: Cough is one of the most common complaints among children and its causes are multiple. Active immunization and early diagnosis are crucial in the management of pertussis

    Proposta de sistemática para priorização de indicadores de afastamento em ambientes hospitalares na gestão de saúde e segurança do trabalho

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    O Sistema de Gestão da Saúde e Segurança do Trabalho é um conjunto de práticas e ferramentas de gestão que visam promover o bem-estar, saúde e segurança dos trabalhadores de forma lógica e flexível, adaptando-se às características de cada organização. Empresas que implementam esses sistemas podem obter benefícios operacionais, como melhoria no desempenho, redução de custos e de acidentes, lesões e doenças. Sendo importante para melhorar o ambiente laboral na área da saúde. Dentro da gestão da Saúde e Segurança do Trabalho, a análise dos Indicadores de Afastamentos é uma parte do sistema essencial para identificar as causas e os padrões do absenteísmo relacionado tais como doenças ou lesões ocupacionais. O objetivo deste estudo foi propor uma abordagem sistemática de priorização indicadores de afastamentos em ambientes hospitalares no contexto do Sistema de Gestão da Saúde e Segurança do Trabalho. Para priorização desses indicadores dentro de um contexto avaliativo de critérios e do ponto de vista grupal foi utilizado o método de AHP Group, a fim de auxiliar os gestores nas tomadas de decisão relacionadas aos aspectos de saúde e segurança no trabalho. Através da priorização dos indicadores de afastamentos, a sistemática propõe identificar e atuar nas causas raiz por meio do método de Ishikawa e propor ações de mitigação por um PDCA, prevenindo assim recorrência dos afastamentos e promovendo a saúde e bemestar dos colaboradores. Os principais resultados do estudo foram a proposta de uma abordagem sistemática para priorizar indicadores relacionados à gestão do absenteísmo, que auxilia os gestores na tomada de decisões. Os indicadores foram divididos em dois grupos, seguindo a divisão da própria instituição. Dentre os resultados do AHP temos que o indicador de "número de atestados médicos" foi considerado o elemento mais importante para o grupo 1, enquanto o "número de ausências por setor" foi considerado o mais importante para o grupo 2, e para os dois grupos o critério de gravidade obteve a classificação mais alta. Além disso se identificou que a gestão do absenteísmo no ambiente hospitalar ainda é incipiente, afetando especialmente os técnicos de enfermagem, mulheres e os setores de emergência. E embora o número total de ausências tenha diminuído no contexto “pós-pandemia”, sua duração em total de dias ainda levanta preocupações em relação à produtividade e gestão organizacional.The Occupational Health and Safety Management System is a set of management practices and tools that aim to promote the logical and flexible well-being, health, and safety of workers, adapting to the characteristics of each organization. Companies that implement these systems can achieve operational benefits, such as improved performance, cost reduction, and a decrease in accidents, injuries, and illnesses, which is important for improving the work environment in the health area. Within Occupational Health and Safety Management, the analysis of Absenteeism Indicators is an essential part of the system to identify the causes and patterns of absenteeism related to occupational illnesses or injuries. The aim of this study was to propose a systematic approach to prioritize absenteeism indicators in hospital environments within the context of the Occupational Health and Safety Management System. The AHP Group method was used to prioritize these indicators within an evaluative criteria context and from a group perspective, to assist managers in making decisions related to health and safety aspects in the workplace. Through the prioritization of absenteeism indicators, the systematic approach proposes to identify and act on root causes using the Ishikawa method and propose mitigation actions through a PDCA, thereby preventing the recurrence of absenteeism and promoting employee health and well-being. The main results of the study were the proposal of a systematic approach to prioritize indicators related to absenteeism management that assists managers in decision-making. The indicators were divided into two groups, following the division of the institution itself. Among the AHP results, the "number of medical certificates" indicator was considered the most important element for group 1, while the "number of absences by sector" was considered the most important for group 2, and for both groups, the severity criterion obtained the highest ranking. It was also identified that absenteeism management in the hospital environment is still incipient, affecting especially nursing technicians, women, and emergency departments. And although the total number of absences has decreased in the "post-pandemic" context, their total duration still raises concerns regarding productivity and organizational management

    Estrutura do capital humano alocado nas atividades de planejamento e controle dos Municípios do Vale do Ribeira, Estado de São Paulo

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    Resumo: Devido ao capital humano ser responsável pela aplicação de mais 50% das receitas correntes arrecadadas nos municípios, este estudo buscou evidenciar a estrutura do capital intelectual alocado nas atividades de planejamento e controle dos municípios paulistas do Vale do Ribeira. Para tanto se fez um censo populacional que apurou uma população de 551 servidores. A região paulista do Vale do Ribeira está localizada na região sul do Estado de São Paulo, confrontando com a região leste do Estado do Paraná, sendo composta por 23 municípios distribuídos por três regiões administrativas: Registro, São Paulo e Sorocaba. Os dados foram coletados usando a técnica de interrogação por meio de entrevista e analisados usando a estatística descritiva e inferencial paramétrica e não paramétrica. Para comparação de édias, usou-se o teste paramétrico ANOVA e os testes não paramétricos Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. Utilizou-se, ainda, Análise de Correspondência para tratar a relaçãoentre perfil sócio educacional do gestor e perfil educacional dos servidores. Os esultados revelaram diferenças estatísticas de médias para as variáveis remuneração e tamanho do município; remuneração e regiões administrativas; remuneração e escolaridade dos servidores, contudo a variável remuneração e gênero dos servidores não apresentou diferenças de médias. A ANCOR revelou que há relação entre os gestores com nível médio de escolaridade e os servidores com nível de escolaridade equivalente

    Avaliação da qualificação do setor de fabrico de soluções injetáveis de pequeno volume

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    Na indústria farmacêutica, principalmente no fabrico das formas farmacêuticas estéreis, existe controlo, não só do processo de fabrico e produto final, como também de todas as condições processuais de fabrico de forma a cumprir as normas que regulam os medicamentos da União Europeia, as normas orientadoras sobre as boas práticas de fabrico - medicamentos de uso humano e veterinário, as International Organization for Standardization e as Farmacopeias. Esta dissertação está direcionada para a análise da qualificação do setor de soluções injetáveis de pequeno volume da empresa Laboratórios Vitória S.A, sendo esta certificada e auditada pelo INFARMED. Nesta empresa, a requalificação de todas as variáveis do setor de soluções injetáveis foi realizada em 2000 e por isso surgiu a necessidade de realizar uma avaliação do status da qualificação através da análise de resultados dos últimos 2 anos, com o intuito de evidenciar todos os pontos críticos do processo e possibilidades de melhoria. Nesta dissertação procedeu-se à análise de dados históricos de 2 anos relativos às contaminações em determinadas fases do processo e identificação dos microrganismos mais frequentes; à realização de uma auditoria interna e à realização de uma proposta de layout para o setor de injetáveis que cumpra com as regras impostas pelas entidades reguladoras da indústria farmacêutica; à análise de risco do Media Fill e pontos de amostragem para controlo microbiológico; à identificação do produto “worst case”, tanto em produtos de processo assético como em produtos de esterilização final e à realização de cartas de controlo a parâmetros ambientais nas salas críticas. No final da avaliação da qualificação ao setor de soluções injetáveis verificou-se que este precisa de ações de melhoria, nomeadamente efetuar algumas alterações na sala de filtração, no sistema de Aquecimento, Ventilação e Ar Condicionado (AVAC), no sistema de fecho de portas automático, no aumento de pontos de amostragem para controlo microbiológico, na implementação de intercomunicadores e se possível construir um layout mais funcional. Não foi possível tirar conclusões à conformidade dos parâmetros ambientais uma vez que os dados analisados não tinham em consideração as atividades que estavam a decorrer na sala limpa. No entanto, este setor encontra-se em conformidade. O trabalho desenvolvido ajudou o setor de engenharia industrial e o controlo de qualidade fornecendo dados importantes para melhorar a qualidade do setor de soluções parenterais da empresa

    Análise da sonolência na condução rodoviária a partir de sinais EEG

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    A Sociedade Europeia de Pesquisa do Sono realizou muito recentemente um estudo, onde mostrou que a prevalência média de adormecimento ao volante nos últimos 2 anos foi de 17%. Além disto, tem sido provado por todo o mundo que a sonolência durante a condução é uma das principais causas de acidentes de trânsito. Torna-se assim conveniente, o desenvolvimento de sistemas que analisem a suscetibilidade de um determinado condutor para adormecer no trânsito, bem como de ferramentas que monitorem em tempo real o estado físico e mental do condutor, para alertarem nos momentos críticos. Apesar do estudo do sono se ter iniciado há vários anos, a maioria das investigações focaram-se no ciclo normal do sono, estudando os indivíduos de forma relaxada e de olhos fechados. Só mais recentemente, têm surgido os estudos que se focam nas situações de sonolência em atividade, como _e o caso da condução. Uma grande parte Dos estudos da sonolência em condução têm utilizado a eletroencefalografia (EEG), de forma a perceber se existem alterações nas diferentes bandas de frequência desta, que possam indicar o estado de sonolência do condutor. Além disso, a evolução da sonolência a partir de alterações no piscar dos olhos (que podem ser vistas nos sinais EEG) também tem sido alvo de grande pesquisa, tendo vindo a revelar resultados bastante promissores. Neste contexto e em parceria com a empresa HealthyRoad, esta tese está integrada no projeto HealthyDrive, que visa o desenvolvimento de um sistema de alerta e deteção de sinais de fadiga e sonolência nos condutores de veículos automóveis. A contribuição desta tese no projeto prendeu-se com o estudo da sonolência dos indivíduos em condução a partir de sinais EEG, para desta forma investigar possíveis indicadores dos diferentes níveis desta que possam ser utilizados pela empresa no projeto. Foram recolhidos e analisados 17 sinais EEG de indivíduos em simulação de condução. Além disso foram desenvolvidos dois métodos de análise destes sinais: O primeiro para a deteção e análise dos piscar de olhos a partir de EEG, o segundo para análise do espetro de potência. Ambos os métodos foram utilizados para analisar os sinais recolhidos e investigar que tipo de relação existe entre a sonolência do condutor e as alterações nos piscares dos olhos, bem como as alterações do espetro do EEG. Os resultados mostraram uma correlação entre a duração do piscar de olhos e a sonolência do condutor. Com o aumento da sonolência velicou-se um aumento da duração do piscar, desencadeado principalmente pelo aumento na duração de fecho, que chegou aos 51.2%. Em relação ao espectro de potência, os resultados sugerem que a potência relativa de todas as bandas analisadas fornecem informações relevantes sobre a sonolência do condutor. Além disso, o parâmetro (_+_)/_ demostrou estar relacionado com variações da sonolência, diminuindo com o seu avanço e aumentando significativamente (111%) no instante em que os condutores adormeceram.The European Society of Sleep Research recently conducted a study whose results howed that the average prevalence of prevalence of drowsiness in individuals during driving activities was 17% over the last two years. Similarly to this, several other studies showed that sleepiness during driving is one of the main causes of traffic accidents. Due to this fact, it is necessary the development of systems capable of analysing the susceptibility of a particular driver falling asleep in traffic. In addition, the creation of tools to monitor the physical and mental state of the driver in real time is faced as an essential point. Although the sleep study started several years ago, most in researches have focused on the normal sleep cycle by studying relaxed and closed eyes subjects. More recently, there has been an increasing number of studies focusing on sleepiness situations in activity, such as driving. A large piece of the driving drowsiness studies have sed the electroencephalogram (EEG) to observe changes in its different frequency bands, indicating the driver drowsiness state. Moreover, the study of drowsiness from the variability of eye blinks which have shown a significant relationship with drowsiness, and can be observed in the EEG. In this context and in partnership with HealthyRoad Company, this thesis is integrated in the HealthyDrive project. The project seeks to develop a detection and alert system of the drivers fatigue and sleepiness. This work’s contribution to the HealthyDrive project is linked to the experimental study of the subjects’ drowsiness while driving simulations. The purpose is to determine possible indicators of the drowsiness levels that may be used posteriorly by the company. A set of experiments were conducted and 17 EEG signals were collected and analysed while driving simulations. In addition, two methods of EEG analysis were developed. The first was designed to detect and analyze the eye blink of the EEG data. The second was developed to analyze the EEG power spectrum. Both methods were used to analyze the collected signals and thereby to determine the relation between the driver’s drowsiness and the eye blink changes, as well as the EEG spectrum changes. The results show a high correlation between the eye blink measures and driver’s drowsiness. As the drowsiness increases it was observed an increase of the eye blink duration, mainly triggered by the increase in the eye closure duration which reached 51.2%. Regarding the power spectrum, the results suggest that the relative power of all analyzed bands give relevant information about the driver drowsiness. Furthermore, the ratio (θ+α)/β as shown to be intimately related to drowsiness variations, by decreasing with its advance and increasing significantly (111%) at the same time that drivers fall asleep

    Sustainability in the recent production of social housing

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    O objetivo deste trabalho é identificar como a sustentabilidade tem sido introduzida na produção recente de habitação de interesse social, a partir do Programa Minha Casa Minha Vida (PMCMV), que têm reorientado suas ações em relação à sustentabilidade recentemente. A motivação da pesquisa se dá pelo interesse em torno da qualidade socioambiental urbana e seus reflexos na vida das pessoas. Neste sentido, são necessários estudos para a aplicação de critérios mais consistentes de sustentabilidade nas habitações sociais, a fim de minimizar os impactos ambientais, socioculturais e econômicos. A partir de levantamento preliminar de conjuntos habitacionais produzidos pelo PMCMV a partir de 2013 que tiveram destaque para a sustentabilidade, realizou-se um estudo de caso de empreendimento em Campinas-SP. O estudo pretende contribuir para um olhar mais apurado de como os conceitos da sustentabilidade socioambiental na produção de habitação social têm sido incorporados, se estão sendo efetivos e identificar os desafios para adotar medidas mais sustentáveis.The aim of this paper is to identify how sustainability has been introduced in the recent production of social housing through the Minha Casa Minha Vida Program (PMCMV), which has recently reoriented its actions towards sustainability. The research motivation is due to the interest around the urban socioenvironmental quality and its reflexes in people's lives. So, studies are needed to apply more consistent criteria of sustainability in social housing, in order to minimize environmental, socio-cultural and economic impacts. From a preliminary survey of housing developments produced by PMCMV from 2013 that had a focus on sustainability, we conducted a case study of development in Campinas-SP. The study aims to contribute to a closer look at how the concepts of social and environmental sustainability in the production of social housing have been incorporated, their effectiveness and identify the challenges for adopting more sustainable measures

    Analysis of sugarcane microtranscritome in drought tolerance

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    Orientador: Marcelo Menossi TeixeiraTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é a cultura mais promissora para a obtenção de energia renovável, tendo sua produção movida pelo setor sucroenergético. O Brasil é o maior produtor mundial e os cultivares atualmente utilizados são híbridos interespecíficos aneuplóides, resultado do melhoramento genético clássico. As espécies selvagens que deram origem a esses cultivares, Saccharum officinarum e Saccharum spontaneum, possuem características importantes para a produção como alto teor de sacarose e resistência à doenças e estresse abióticos, respectivamente. Contudo, as perdas de produtividade são frequentes nas regiões produtoras. A regulação gênica mediada por microRNAs pode estar relacionada a mecanismos de tolerância a estresses abióticos. Os microRNAs são sequências de RNA de 19-24 nucleotídeos. Esses pequenos RNAs (sRNAs) atuam no silenciamento gênico através da clivagem ou repressão da tradução de genes alvos, por similaridade quase perfeita de suas sequências. Neste trabalho foi realizada a análise do microtranscritoma de plantas de cana-de-açúcar com 11 meses, cultivadas em campo sob regimes de irrigação (controle) ou sequeiro (estressado). Amostras de sRNAs folhas de quatro cultivares foram sequenciadas (RB867515, RB855536, RB92579 e RB72454). As análises fisiológicas de trocas gasosas, como condutância estomática, fotossíntese e transpiração, e de desenvolvimento das plantas mostraram que os quatro cultivares sofreram os efeitos da seca. A análise do sequenciamento permitiu a identificação de um total de 29 miRNAs, pertencentes a 19 famílias. Dentre esses, 27 microRNAs, pertencentes a 17 famílias, foram diferencialmente expressos pela seca nos quatro cultivares de Saccharum spp. analisados. A predição de alvos para o miRNAs diferencialmente expressos levou à identificação dos genes relacionados à biogênese dos próprios microRNAs, ao desenvolvimento das plantas e de genes envolvidos em respostas a estresses abióticos, em particular à seca. Os microRNAs ssp-miR164, ssp-miR171-seq 2, ssp-miR393 e ssp-miR528 foram reprimidos pela seca, tendo como alvos preditos genes que codificam para proteínas com domínio NAC, fator de transcrição tipo SCARECROW (SCL), proteína de transporte relacionada à auxina (TIR1) e a subunidade ?EI da enzima piruvato desidrogenase, respectivamente. Experimentos de PCR em tempo real confirmaram as correlações de expressão esperados para a maioria os miRNAs e seus respectivos genes alvo. As construções de silenciamento gênico para os microRNAs ssp-miR164, ssp-miR171-seq 2, ssp-miR393 e ssp-miR528 foram obtidas a com a técnica de microRNA artificial (amiRNA). Os experimentos de transformação gênica em calos embriogênicos de Setaria viridis via Agrobacterium tumefaciens evidenciaram a necessidade de uma real padronização no protocolo desse procedimento, devido, principalmente, à dificuldade na eliminação das agrobactérias após infecção dos calos. A análise do microtranscritoma permitiu a identificação dos microRNAs diferencialmente expressos sob seca, bem como a predição das principais rotas reguladas por esses sRNAs. Os alvos de quatro microRNAs que foram reprimidos pela seca nessas plantas estão envolvidos com processos potencialmente associados à características agrícolas importantes de resposta à seca. Tais genes devem ser explorados funcionalmente em plantas modelo com protocolos adequados, bem como em plantas de cana-de-açúcar. As informações geradas neste trabalho aumentam o conhecimento dos mecanismos moleculares das plantas do complexo Saccharum em resposta ao estresse hídrico e auxiliam futuros estudos na busca por cultivares que apresentem maior nível de tolerância à secaAbstract: Sugarcane (Saccharum spp.) is the most promising crop of renewable energy, which production is driven by alcohol and sugar industry. Brazil is the world leading producer, and as result of classical genetic improvement cultivars used are aneuploid interspecific hybrids. The wild parents, Saccharum officinarum e Saccharum spontaneum, have important features as high sucrose content and diseases and abiotic stresses resistance, respectively. However, yield losses are frequent in producing regions. Genic regulation performed by microRNAs might be related to abiotic stresses tolerance. MicroRNAs comprise RNA sequences of 19-24 nt. These small RNAs (sRNAs) act in gene silencing by cleavage or translation repression of target genes, by near perfect base pairing. In this work, the microtranscriptome of 11 months old field grown sugarcane plants were evaluated, plants were cultivated under irrigation (control) or dry land (stressed). Samples of sRNAs extracted from leaves of four Brazilian cultivars were sequenced (RB867515, RB855536, RB92579 e RB72454). Physiological analysis of gas exchanges, like stomatal conductance, photosynthesis and transpiration, and plant development measures showed that drought affected the four cultivars. Sequencing analysis allowed the identification of 29 miRNAs, from 19 families. From these, 27 microRNAs, from 17 families, were differentially expressed by drought in the four Saccharum spp. cultivars analyzed. From target prediction for the differentially expressed microRNAs, genes related to miRNAs biogenesis, plant development and stress responsive genes, in particular drought, were identified. Ssp-miR164, ssp-miR171-seq 2, ssp-miR393 and ssp-miR528 were down regulated by drought, and predicted target genes for these miRNAs are NAC-domain protein, SCARECROW-like transcription factor (SCL), auxin related transport inhibitor response protein 1 (TIR1), and ?EI subunit of pyruvate dehydrogenase, respectively. Real time PCR experiments confirmed the expected expression correlation in most miRNAs and their target genes. Gene silencing constructions for the microRNAs ssp-miR164, ssp-miR171-seq 2, ssp-miR393 and ssp-miR528 were obtained using artificial microRNA (amiRNA) approach. Experiments on Setaria viridis transformation via Agrobacterium tumefaciens mediated calli infection emphasized the real need of a standard protocol for this proceeding, mainly due to the difficulty on calli agrobacteria disinfection step. Microtranscriptome analysis allowed the identification of differentially expressed miRNAs under drought stress, and the prediction of main pathways regulated by these sRNAs. The target genes of the four microRNAs down regulated by drought are related to processes potentially associated to important agricultural features in response to drought stress in sugarcane plants. These targets must be functionally explored in model plants with appropriated protocols, as well as in sugarcane plants. The information generated in this work increases the knowledge concerning molecular mechanisms of Saccharum complex plants in response to water deficit, and help future researches on the development of cultivars with a higher level of drought toleranceDoutoradoGenetica Vegetal e MelhoramentoDoutora em Genética e Biologia Molecular140310/2011-8CNP
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