Atividade antineoplásica in vitro e in vivo da chalcona n9 e seu possível mecanismo de ação

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011As chalconas (1,3-diaril-2-propen-1-onas), formam o núcleo de uma ampla variedade de compostos biológicos obtidos de vegetais, que têm espontado como potenciais agentes antitumorais. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo principal avaliar os efeitos antineoplásicos in vitro e in vivo do composto Chalcona N9, obtido sinteticamente. A Chalcona N9 demonstrou ser citotóxica nas linhagens celulares de carcinoma de pulmão humano A549, melanoma de camundongos B16-F10, glioma de rato C6, carcinoma de próstata humano DU 145, carcinoma de mama humano MCF-7 e glioblastoma humano U-87 MG e com citotoxicidade menor sobre a linhagem imortalizada de fibroblastos L929. Nos ensaios de citometria de fluxo para avaliação do ciclo celular foi demonstrado que a Chalcona N9 induziu o acúmulo de células U-87 MG na transição das fases G1-S. Ensaios por Western blotting demonstraram que a Chalcona N9 foi capaz de interferir na expressão de proteínas que participam do ciclo celular, reduzindo a expressão das ciclinas A, D1 e E, e quinases dependentes de ciclina CDK 2 e 6 nas células de glioma humano U-87 MG. Os ensaios de incorporação de Anexina V-FITC demonstraram que as duas concentrações utilizadas da Chalcona N9 induziram a morte por apoptose nas células U-87 MG ao final de 24 horas, e aumento no número de células apoptóticas ao final de 48 horas de tratamento com a Chalcona N9. A morte por apoptose foi também confirmada pelo ensaio de TUNEL. Através da utilização da sonda fluorescente JC-1, foi possível verificar que a Chalcona N9 alterou o potencial de membrana mitocondrial, num período de 2 até 24 horas, sugerindo um efeito sustentado sobre a permeabilidade mitocondrial. Alterações morfológicas da U-87 MG, como células arredondadas e fragmentação no núcleo, puderam ser visualizadas quando observadas por microscopia de fluorescência após o período de 24 horas de incubação com a Chalcona N9 na maior concentração utilizada. O tratamento com a Chalcona N9 reduziu significativamente o número de colônias das células U-87 MG, após 24 horas de incubação. O número de clones das células de glioblastoma multiforme após 48 horas de tratamento, foi significativamente reduzido, comparado com os clones das células do grupo controle. Nos modelos de tumor ascítico de Ehrlich em camundongos BALB/c, modelo de melanoma B16-F10 em camundongos C57Bl/6 e glioblastoma multiforme humano em camundongos nude, inoculados com as células U-87 MG, a Chalcona N9 foi capaz de reduzir a progressão tumoral. Em resumo, podemos concluir que a Chalcona N9 promove um atraso no ciclo celular, especialmente na fase de transição G1/S, além de promover o desencadeamento do processo apoptótico. O tratamento com a Chalcona N9 também altera o potencial de membrana mitocondrial e diminui o potencial proliferativo das células U-87 MG. Nossos resultados sugerem que a Chalcona N9 apresenta potencial atividade antitumoral sugerindo potenciais perspectivas com este composto em terapias contra o câncer.The chalcones (1,3-diaryl-2-propen-1-ones), a group of aromatic enones, form the core of a wide variety of organic compounds obtained from plants, and in the past 15 years those compounds have emerged as potential antitumor agents. This study aimed at evaluating the in vitro and in vivo antineoplastic effects of the compound Chalcone N9, which was synthetically obtained. The Chalcone N9 was shown to be cytotoxic in cell lines of human lung carcinoma A549, mouse melanoma B16-F10, rat glioma C6, human prostate carcinoma DU 145, human breast carcinoma MCF-7 and human glioblastoma U-87 MG and with lower cytotoxicity in immortalized fibroblast line L929. In tests of flow cytometry used to assess the cell cycle of U-87 MG cells, it was demonstrated that Chalcone N9 induced accumulation of cells in transition from G1-S phase. Western blotting assays showed that Chalcone N9 was able to influence the expression of proteins involved in the cell cycle, reducing the expression of cyclins A, D1 and E and the cyclin dependent kinases CDK 2 and 6. The annexin V-Fitc assay, which detects the incorporation of annexin, demonstrated that both concentrations of Chalcone N9 induced apoptosis in U-87 MG cell after 24 hours and increased the number of apoptotic cells after 48 hours of incubation with Chalcone N9. Death by apoptosis was also confirmed by TUNEL assay. By using the fluorescent probe JC-1, we observed that halcone N9 altered the mitochondrial membrane potential in a period of 2 to 24 hours, suggesting a sustained effect on mitochondrial permeability. Morphological changes of U-87 MG as round cells and fragmentation in the nucleus could be visualized when observed by fluorescence microscopy after 24 hours incubation with Chalcone N9 at the highest concentration used. Treatment with Chalcone N9 significantly reduced the number of colonies of cells U-87 MG, 24 hours after incubation. The number of clones of cells of glioblastoma multiforme after 48 hours of treatment was significantly reduced compared with clones of cells of the control group. In the models of Ehrlich ascites tumor in BALB/c mice, melanoma B16-F10 in C57BL/6 mice and human glioblastoma multiforme in nude mice inoculated with U-87 MG cells, Chalcone N9 was able to reduce tumor progression. In summary, we conclude that the Chalcone N9 promotes a delay in cell cycle, especially during the transition G1 / S, besides promoting the activation of the apoptotic process. Treatment with Chalcone N9 also changes the mitochondrial membrane potential and decreases the proliferative potential of U-87 MG cells. Our results suggest that Chalcone N9 has a potential antitumor activity suggesting potential prospects with this compound in cancer therapies

Avaliação do potencial de utilização de nanocápsulas poliméricas na melhoria da resposta antimetastática de um alcalóide citotóxico, a camptotecina

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmáci

Obtenção de extratos secos de carotenoides a partir da biomassa da microalga Haematococcus pluvialis por secagem em torre de aspersão (spray-drying)

Os carotenoides compreendem uma classe de mais de 600 pigmentos naturais, cujo potencial biológicoestá relacionado à sua atividade antioxidante, regulação do crescimento celular, modulação da respostaimune e da atividade anti-inflamatória. A Haematococcus pluvialis é uma microalga verde, conhecida porsintetizar e acumular grandes quantidades de carotenoides, entre estes a astaxantina. Este trabalho tevecomo objetivo preparar e caracterizar extratos secos de H. pluvialis pela técnica de secagem em torre deaspersão, avaliando o efeito do emprego de adjuvantes farmacêuticos e dos parâmetros de secagem sobreas características finais dos extratos secos. Além disso, as atividades antioxidante e citotóxica doscarotenoides obtidos a partir dos extratos secos foram avaliadas. Quando a extração dos carotenoides apartir da biomassa da microalga foi avaliada, altos valores de rendimento que variaram entre 87,8% e94,6% foram obtidos. Após a extração e a secagem por pulverização não foram observadas diferenças namorfologia das partículas e os valores de densidade aparente e compactada não parecem ser afetadosquando as diferentes condições de secagem por pulverização foram testadas. Observou-se que o aumentoda temperatura e concentração do adjuvante de secagem proporcionou redução do teor de carotenoidestotais. Os valores da atividade antioxidante dos extratos de carotenoides variaram entre 55,78 e 77,83%,com os menores valores verificados para os extratos secos preparados com a maior temperatura deentrada. A avaliação da atividade antiproliferativa dos extratos de carotenoides demonstrou que asmaiores concentrações testadas reduziram de 66,58 e 82,91% a viabilidade de células de melanomamurino B16F10. Assim, o conjunto de resultados demonstrou que a obtenção de extratos secos a partir dabiomassa de Haematococcus pluvialis visando a produção de matérias-primas farmacêuticas utilizando asecagem em torre de aspersão (spray dryer) é promissor especialmente, com altos valores de carotenoidestotais e sem perda significativa da atividade antioxidante.Palavras-chave: carotenoides, microalgas, secagem por pulverização, astaxantina, antioxidantes

Preparation and characterization of campthotecin-loaded nanocapsules from poly (D,L-lactide) and poly (D,L lactide)-poly(ethyleneglycol) diblock copolymers

A camptotecina (CPT) é um fármaco de elevada atividade antitumoral cujo uso na terapêutica tem sido limitado devido a sua baixa solubilidade aquosa e elevada instabilidade após administração intravenosa. Buscando contornar estas limitações e melhorar a eficácia terapêutica, a encapsulação da camptotecina em nanocápsulas convencionais e furtivas foi realizada, empregando o ácido poli (D,L-lático) (PLA) e copolímeros diblocos do ácido poli (D,L-lático) e polietilenoglicol (PLA-PEG). A eficiência de encapsulação da CPT variou de 76 a 97%, dependendo da formulação testada. Entretanto, a taxa de recuperação reduziu consideravelmente com o aumento da quantidade inicial de fármaco. As nanocápsulas foram avaliadas quanto as suas características físico-químicas e morfologia. A presença das cadeias de polietilenoglicol na superfície das nanocápsulas foi evidenciada pela redução de ambos diâmetro médio e potencial zeta. A liberação in vitro da CPT a partir das nanocápsulas não foi afetada pela natureza do polímero, mas a barreira polimérica retardou a liberação do fármaco.Camptothecin (CPT) is a drug presenting a high antitumor activity, but its use in therapeutics has been limited by its poor aqueous solubility and poor stability after administration by intravenous route. In order to overcome these drug drawbacks and to improve the therapeutic efficacy, encapsulation studies of CPT in nanocapsules was realized using poly (D,L-lactide) (PLA) and poly (D,L lactide)-poly(ethyleneglycol) diblock copolymers (PLA-PEG). The encapsulation efficiency was varied from 76 to 97%. However, the drug recovered was reduced with the increase of the CPT amount added to the formulations. The presence of PEG chains at the surface of nanocapsules was evidenced by reduction of both mean particle diameter and zeta potential values. In vitro release of CPT from nanocapsules was not affected by the type of polymer, but the polymeric barrier appeared to retard the drug release.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Pharmacist contributions for basic care from the perspective of professionals of familial health care teams

This study aimed to investigate the social representations of professionals included in the team of Family Health Strategy (physicians, nurses and dentists) respecting the action possibilities and contributions of the pharmacist for the basic care, and based on social psychology and, particularly, on the theory of social representations. The epistemological basis of the research is qualitative, and the data were collected by means of individual semi-structured interviews, which were submitted to analysis of categorical thematic content. Apparently, the majority of professionals already inserted in the team know and recognize the importance of professional pharmacists in the basic care, as well as their potential contribution to this topic. The representations were constructed according to the following parameters: a) the study object and the intervention area, b) the individual practice of every professional and c) his/her action in specific cases. The quality of the professional or personal experience concerning the action of these professionals has contributed for the knowledge about the possibilities of pharmacists' intervention in basic care.<br>Este estudo teve por objetivo investigar as representações sociais dos profissionais incluídos na equipe de Estratégia em Saúde da Família (médico, enfermeiro e odontólogo), sobre as possibilidades de atuação e as contribuições do farmacêutico na atenção básica, tendo por fundamento a psicologia social e, particularmente, a teoria das representações sociais. A base epistemológica da pesquisa é qualitativa, sendo os dados coletados por meio de entrevistas individuais semi-estruturadas e analisados por meio de análise de conteúdo categorial temático. Constatou-se que a maioria dos profissionais já inseridos na equipe conhece e reconhece a importância do profissional farmacêutico na atenção básica e as suas possibilidades de contribuição. As representações foram construídas a partir dos seguintes parâmetros: a) o objeto de estudo e de intervenção da área; b) as práticas de cada um dos profissionais e c) a sua atuação em casos específicos. A qualidade da experiência profissional ou pessoal acerca da atuação desses profissionais contribuiu para o conhecimento sobre as possibilidades de intervenção do farmacêutico na atenção básica

Preparation and characterization of campthotecin-loaded nanocapsules from poly (D,L-lactide) and poly (D,L lactide)-poly(ethyleneglycol) diblock copolymers

A camptotecina (CPT) é um fármaco de elevada atividade antitumoral cujo uso na terapêutica tem sido limitado devido a sua baixa solubilidade aquosa e elevada instabilidade após administração intravenosa. Buscando contornar estas limitações e melhorar a eficácia terapêutica, a encapsulação da camptotecina em nanocápsulas convencionais e furtivas foi realizada, empregando o ácido poli (D,L-lático) (PLA) e copolímeros diblocos do ácido poli (D,L-lático) e polietilenoglicol (PLA-PEG). A eficiência de encapsulação da CPT variou de 76 a 97%, dependendo da formulação testada. Entretanto, a taxa de recuperação reduziu consideravelmente com o aumento da quantidade inicial de fármaco. As nanocápsulas foram avaliadas quanto as suas características físico-químicas e morfologia. A presença das cadeias de polietilenoglicol na superfície das nanocápsulas foi evidenciada pela redução de ambos diâmetro médio e potencial zeta. A liberação in vitro da CPT a partir das nanocápsulas não foi afetada pela natureza do polímero, mas a barreira polimérica retardou a liberação do fármaco.Camptothecin (CPT) is a drug presenting a high antitumor activity, but its use in therapeutics has been limited by its poor aqueous solubility and poor stability after administration by intravenous route. In order to overcome these drug drawbacks and to improve the therapeutic efficacy, encapsulation studies of CPT in nanocapsules was realized using poly (D,L-lactide) (PLA) and poly (D,L lactide)-poly(ethyleneglycol) diblock copolymers (PLA-PEG). The encapsulation efficiency was varied from 76 to 97%. However, the drug recovered was reduced with the increase of the CPT amount added to the formulations. The presence of PEG chains at the surface of nanocapsules was evidenced by reduction of both mean particle diameter and zeta potential values. In vitro release of CPT from nanocapsules was not affected by the type of polymer, but the polymeric barrier appeared to retard the drug release.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

A homeopatia no SUS na perspectiva de estudantes da área da saúde

A homeopatia foi reconhecida como especialidade médica em 1980. Após a criação do SUS, alguns estados e municípios brasileiros começaram a oferecer atendimento homeopático aos usuários dos serviços públicos de saúde. Em 2006, foi editada a Portaria 971, que assegura o acesso à homeopatia a estes usuários, entre outras práticas integrativas e complementares. Diante disto, investigamos as percepções de estudantes dos cursos de Farmácia, Medicina e Odontologia sobre a homeopatia e sua prática no SUS, tendo por fundamento a teoria das representações sociais. Estas representações foram construídas com os seguintes parâmetros: a homeopatia como terapêutica; a relação entre a homeopatia, o SUS e o princípio da integralidade. Os estudantes souberam correlacionar o atendimento integral ao sujeito à compreensão de suas necessidades a partir de sua realidade. Constatou-se desconhecimento sobre os pressupostos teóricos da homeopatia e o não reconhecimento da incorporação da homeopatia no SUS, para a maioria dos estudantes. Pode ser sugerido que a inserção dos futuros profissionais no contexto das atividades em saúde e o acesso a outras racionalidades permitiriam uma escolha mais lúcida de suas práticas profissionais

Overexpression of miR-124 in Motor Neurons Plays a Key Role in ALS Pathological Processes

miRNA(miR)-124 is an important regulator of neurogenesis, but its upregulation in SOD1G93A motor neurons (mSOD1 MNs) was shown to associate with neurodegeneration and microglia activation. We used pre-miR-124 in wild-type (WT) MNs and anti-miR-124 in mSOD1 MNs to characterize the miR-124 pathological role. miR-124 overexpression in WT MNs produced a miRNA profile like that of mSOD1 MNs (high miR-125b; low miR-146a and miR-21), and similarly led to early apoptosis. Alterations in mSOD1 MNs were abrogated with anti-miR-124 and changes in their miRNAs mostly recapitulated by their secretome. Normalization of miR-124 levels in mSOD1 MNs prevented the dysregulation of neurite network, mitochondria dynamics, axonal transport, and synaptic signaling. Same alterations were observed in WT MNs after pre-miR-124 transfection. Secretome from mSOD1 MNs triggered spinal microglia activation, which was unno-ticed with that from anti-miR-124-modulated cells. Secretome from such modulated MNs, when added to SC organotypic cultures from mSOD1 mice in the early symptomatic stage, also coun-teracted the pathology associated to GFAP decrease, PSD-95 and CX3CL1-CX3CR1 signaling im-pairment, neuro-immune homeostatic imbalance, and enhanced miR-124 expression levels. Data suggest that miR-124 is implicated in MN degeneration and paracrine-mediated pathogenicity. We propose miR-124 as a new therapeutic target and a promising ALS biomarker in patient sub-populations