Induction of Superovulation in Aged and Fattened Japanese Black Cattle

微弱発情または無発情の老令肥育牛からの多排卵誘起を目的として本研究を行った. 老令および繁殖不全の理由で肥育した黒毛和種8頭を用い,供試時に微弱発情を示した2頭の牛を第1群とし,全く発情を示さない6頭を第2群とした. 第1群の牛には,性周期第16日にPMS4,000IUを注射し,19および20日目にEBをそれぞれ2mg注射し,発情の発現後12時間以内にHCG2,000MUを静脈内に注射した. 第2群の牛には任意の日にPMS4,000IUを注射し,2日後にPgF2a2mgを子宮内に注入し,さらに発情後HCG2,000MUを静脈内に注射した. ホルモン処理によって発情した牛は,6時間－8時間間隔で3回,和牛凍結精液を人工授精した. 採卵は排卵4日後に摘出された卵管･子宮の灌流によって行った. 第1群の牛では,2頭とも排卵(平均3.5個)が認められ,回収された卵子はすべて受精卵でそれぞれ1個と6個であった. 第2群の牛については,6頭中4頭に排卵が認められたが,受精卵が得られたのは2頭(5個と10個)だけで残りの2頭からは未受精卵のみが得られた. 第2群の平均排卵数は11個とかなり多かったが,このうち,平均2,5個(22.4%)が受精していた. 本研究から,老令肥育牛からも受精卯を採卵しうる可能性が示唆された. しかし,このような牛からの多排卵誘起,特に多数の受精卵を得ることはかなり困難であり,更なる研究を必要とする

Succesful Trans-cervical Transfer of Cow Embryo

1.黄体期にPMS3,000 IUを投与し,60時間後にPGF2a誘導体(ONO-1052)800ugによって過排卵を誘起させ,排卵7日後にバルーンカテーテルによる子宮角灌流法によって初期胚盤胞を回収した. 2.採卵から移植まで室温(25℃)で6時間,生食・血清媒液で静置させた胚でも受卵牛の子宮で正常な産子にまで発育した. 3.細菌感染をできるだけ少なくするため牛体の洗浄と,紙さやの使用とによって,受卵牛の7日目子宮頚管経由移植を行ない受胎例を得た. 4.分娩した和牛とホルスタイン種の雑種の在胎日数や新生時体重は黒毛和種とホルスタイン種の中間値を示した

Survival of Frozen Rat Embryos : Freezing and Storage of Rat Blastcyst by Dry Ice Alcohol

ラットの受精卵の-20℃から-79℃の温度域における凍結法を明らかにするためにこの研究を行なった. 卵子浮遊液には,生理食塩水・同種不活化血清（2：1）を用い,抗凍結剤として8% DMSOを加えた. ラット胚盤胞の-50℃までの凍結において,-20℃から-40℃の温度息では急冷し,他の温度息では毎分0.33℃の緩冷を行なった場合に,融解後の卵の形態も正常であり,またその移植によっても良好な生存性が得られた. -50℃から-79℃では毎分2℃の冷却速度が最適であった. -79℃ドライアイスアルコールで冷凍保存したラット胚盤胞の生存能は数日間であることが明らかとなった

Production of Rat Diploid Parthenogenones by Suppression of 2nd Polar Body Extrusion and their Preimplantation Development

幼若ラット過排卵卵を用いて,排卵卵母細胞をヒアルロニダーゼ・低温処理により,第2極体放出を抑制することによって,2倍体胚へ発育しうる活性卵を作出することを目的とし,さらにそれらの着床前における発育性を卵管in-vivo培養に続くin-vitro培養によって検討した. 卵令20-23時間卵において卵をヒアルロニダーゼ30-60分処理後5℃又は8℃のいずれかの低温にさらすことにより高率に第2極体放出抑制活性卵が得られ,そのほとんどは,"2前核"卵であった. 次に第2極体放出抑制活性卵作出に及ぼす卵令の影響について検討した結果,最適卵令20-23時間の結果とは異なり,卵令18時間では,活性化は誘起されなかった. 卵令26-27時間卵では,fragmentation卵と多核を有した卵が非常に多く観察された. この結果より卵令は活性化誘起に対し,Critical factorであることが示された. 本実験で得られた. "第2極体+1前核"卵は,2細胞期あたりで発育を停止したが,しかし,"2前核"卵は,桑実胚あるいは胚盤胞へ発育することがわかった. また,得られた単為発生胚盤胞の倍数性は40の染色体を持つ2倍体と判定された. 以上の結果より,ラット単為発生胚の着床前発育にとって,2倍体胚の重要性が示された

Induced Precocial Puberty by the Dialyzable Fraction of Male Mouse Urine

本報告は雄マウスの尿と分画された雄尿の離乳雌マウスの性成熟に及ぼす影響を知るために行なった. ICR系雌マウスは22日令から初発情まで雄の尿あるいは尿の画分にさらされた. 尿サンプルは同系統の繁殖能力のある雄マウスから採取した. 3mlの尿をセルロースチューブを用いて水に対して透析した. 雄尿及び雄尿の透析画分と非透析画分をそれぞれ0.05mlずつ離乳後の雌マウスの人中に毎日塗布した. 雄尿を塗布した未成熟雌マウスは対照区や水を塗布した区のマウスより早く膣開口と初発情を示した. 膣開口と初発情の日令は水処理より透析画分において有意に早かった. 非透析画分を塗布したマウスでは春機発動促進効果は認められなかった. これらの結果は雄マウス尿中春機発動促進フェロモンが低分子物質であることを示唆している

Aggregation and Fusion in HVJ-infected Blastomere of Rat Embryos and the Subsequent Developemental Ability of the Aggrigates

透明帯除去ラット胚は,いずれの発育ステージにおいてもHVJを媒介することによって,簡単な接触から凝集・融合胚が形成されることが認められた. 前もってHVJで感染させた胚制球を非感染新鮮胚割球と,5℃,10分間で凝集させ,続いて37℃,20-40分間で融合が完了した. 1細胞胚割球を種々融合させることによって望まれる倍数体胚を得る可能性が示唆され,桑実胚の融合胚は宿主で満期胎児に発育することが認められた

Studies on the Transport of the Superovulatory Egg in the Oviduct and Its Following Development in Mature Rat

成熟ラットの過排卵卵の卵管下降遠度と卵管内発育を観察して,過排卵卵の正常性を検索した. あわせて,過排卵卵の胎児や産子への発育能を明らかにしようとした. 卵管下降遠度はHCG後24時間では,卵管膨大部で対照よりやや遅れており,46時間後には対照では膨大部狭部接合部を中心に存在するが,処置卵管では,狭部下方に集中して,下降遠度が促進されている. 68時問では,対照はいまだ狭部にあるが,処置区では既に半数近くが子宮に到達しており,86時聞では最早卵管には卵は存在しない. 正常妊娠雌へのエストロゲン単独処置で卵管下降促進が認められた. 卵分割速度は,卵管下降の促進にもかかわらず,対照のそれと変らなかった. 従って68時間で既に4-cell卵のまま子宮内への移行が認められた. 86時間では,対照は卵管子宮接続部に桑実胚として存在するのに比して,処置区では,全て子宮部に桑実胚および8-cell卵以下が約50%ずつ認められた. 後者は発育の遅れというよりむしろ,発育途中における斃死卵もしくは退行中の卵と恩われた. 結紮卵管より回収した過剰排卵処理による胚盤胞は,正常な宿主子宮では発育したが,処置宿主子宮では一例の発育をも認めなかった. 一方対照子宮より回収した胚盤胞は処置宿主子宮では全く発育せず,脱落膜腫も少例に認めたに過ぎない. このように成熟ラットにおける過排卵処理は卵管卵の発育遠度に対する影響は少ないが,卵の卵管下降遠度とくに狭部から子宮への移行を著しく促進する. 卵管感作時闇の減少することというよりむしろ,胚の発育に不都合な環境の子宮に卵が早めに進入することが,子宮内での着床前胚の発育の障害になっているようである.このことは,結紮卵管内で胚盤胞に発育した過排卵処置胚でも正常な子宮環境下では,新生児の発育へと全うできるという観察から裏づけられた

A Simplified Rapid-Freezing of Rat Embryos by Liquid Nitrogen Gas

哺乳動物胚凍結保存法を簡易化するため,家畜動物胚のモデルとしてラット胚を用い,液体窒素ガスによる簡易急速凍結を試みた. 凍結保護物質には比較的高濃度感作後でもin vitroにおけるラット胚の発育性に影饗を及ぼさなかったerythritolを選定した. 冷却方式は凍結開始後,胚の温度が20分で-20℃､25分で-60℃,30分で-180℃になるようにし,融解方式はストローを液体窒素から30℃温湯へ直接入れるようにした時に,その生存率が最も高かった. 10% erythritolによるラット胚の凍結法において,-20℃から-38℃までの冷却脱水温度域を持った冷却法による融解胚の生存率は50%以上であった. -43℃から-74℃までの冷却脱水温度域を持った冷却法による融解胚の生存率は40%以下で,しかも冷却脱水温度域の下降に供なって生存率も低下していった. そしてこの冷却脱水温度域と融解胚の生存率の関係から凍結の機序を検討した. erythritol を凍結保護物質としてラット胚を凍結した際に最も生存率の高かった冷却融解方式で他の凍結保護物質を用いてラット胚を凍結してみたが,inositol,ethylene glycol,glycerinでは融解胚の生存率は0%であった

Studies on the Induction of Parthenogenetic Mammalian Embryos : In vitro Activation of Superovulatory Eggs of Immature Rat

幼若ラット過排卵卵をヒアルロニダーゼ・低張処理法により活性化させるための条件を検討し,その活性化法を確立することを目的とした. さらに,得られた活性卵の発育性を体外培養で観察し,活性卵の正常性について,形態的観察からも検索した. 卵令20～21時間卵の場合,高い活性率を得るためのヒアルロニダーゼ(100mits/ml)処理条件と低張処理条件は,それぞれ90分と3/5Mまたは,3.5/5Mを組み合わせた場合であり,低張処理において,等張液から低張媒液へ除々にでなく直ちに卵を処理することが必要であった. 卵令25～26時間卵の活性条件は,ヒアルロニダーゼ90分処理のみで,活性化し,低張処理を必要としなかった. 一方,卵令16時間卵は,ヒァルロニダーゼ処理90分,低張処理3/5Mあるいは3.5/5Mの活性条件では,活性卵は得られず,さらに,ヒァルロニダーゼ処理120分,低張処理3/5Mと活性刺激を強めてもほとんど活性卵は得られなかった. これらのことより,卵令に伴う第2次成熟分裂紡錘糸の変化(軸転そして卵中央部への移動)が,卵の活性化に影響を及ぼしていることが推察された. どの処理条件においても,得られた活性卵の発育型は,ほとんど“第2極体十1前核”であり,それらは,半数体と推定された. 次に,これらの活性卵の発育性を体外培養で観察した結果,それらの40～60%が第1分割分裂期を経て,受精卵の場合とほぼ同じ時間経過で2-cellへ発育した. しかし,2-cell以後の発育は,ほとんど観察されなかった

Respiration-dependent Calcium Transport in the Cold-shocked Goat Spermatozoa

寒冷衝撃による山羊精子の原形質膜の損傷は,ひいては原形質膜のイオン選択透過性の低下をもたらしているものと考えられる. そこで,本研究は寒冷衝撃不動化山羊精子の原形質膜の損傷を,Ca2+依存性酸素消費の亢進を測ることによって明らかにしようとした. 1.NaF不動化精子と正常精子の酸素消費量は,添加Ca2+によって影響されなかった. また,DNP添加によって脱共役効果が認められた. 2.寒冷衝撃を施した不動化精子の酸素消費量は,添加Ca2+の添加量(1mM以下)に応じて段階的に亢進された. また,その酸素消費量の亢進,すなわち,Ca2+の取り込みはDNPによってわずかに阻害された. 高濃度(1mM以上)の添加Ca2+は阻害的に作用した. 3.寒冷衝撃時に卵黄物質が存在することにより,その酸素消費量はCa2+添加によって影響されなかった. 寒冷衝撃は,山羊精子における添加Ca2+依存性酸素消費量の亢進を示し,このことは原形質膜でのCa2+の選択透過性の低下をもたらしているものと思われた. また,寒冷衝撃時の卵黄物質の存在によって,原形質膜の機能低下が防がれることが推察された