Plasma centrifugation does not influence thrombin-antithrombin and plasmin-antiplasmin levels but determines platelet microparticles count

Introduction: Centrifugation is an essential step for plasma preparation to remove residual elements in plasma, especially platelets and platelet-derived microparticles (PMPs). Our working hypothesis was that centrifugation as a preanalytical step may influence some coagulation parameters. Materials and methods: Healthy young men were recruited (N = 17). For centrifugation, two protocols were applied: (A) the first centrifugation at 2500 x g for 15 min and (B) at 2500 x g for 20 min at room temperature with a light brake. In protocol (A), the second centrifugation was carried out at 2500 x g for 15 min, whereas in protocol (B), the second centrifugation involved a 10 min spin at 13,000 x g. Thrombin-antithrombin (TAT) and plasmin-antiplasmin (PAP) complexes concentrations were determined by enzyme-linked immunosorbent assays. PMPs were stained with CD41 antibody and annexin V, and analyzed by flow cytometry method. Procoagulant activity was assayed by the Calibrated Automated Thrombogram method as a slope of thrombin formation (CAT velocity). Results: Median TAT and PAP concentrations did not differ between the centrifugation protocols. The high speed centrifugation reduced the median (IQR) PMP count in plasma from 1291 (841-1975) to 573 (391-1010) PMP/µL (P = 0.001), and CAT velocity from 2.01 (1.31-2.88) to 0.97 (0.82-1.73) nM/min (P = 0.049). Spearman’s rank correlation analysis showed correlation between TAT and PMPs in the protocol A plasma which was (rho = 0.52, P < 0.050) and between PMPs and CAT for protocol A (rho = 0.74, P < 0.050) and protocol B (rho = 0.78, P < 0.050). Conclusion: Centrifugation protocols do not influence the markers of plasminogen (PAP) and thrombin (TAT) generation but they do affect the PMP count and procoagulant activit

FluoroGold-Labeled Organotypic Retinal Explant Culture for Neurotoxicity Screening Studies

Preclinical toxicity screening of the new retinal compounds is an absolute requirement in the pathway of further drug development. Since retinal neuron cultivation and in vivo studies are relatively expensive and time consuming, we aimed to create a fast and reproducible ex vivo system for retinal toxicity screening. For this purpose, we used rat retinal explant culture that was retrogradely labeled with the FluoroGold before the isolation. Explants were exposed to a toxic concentration of gentamicin and ciliary neurotrophic factor (CNTF), a known neuroprotective agent. The measured outcomes showed the cell density in retinal ganglion cell layer (GCL) and the activity of lactate dehydrogenase (LDH) in the culture medium. Gentamicin-induced oxidative stress resulted in retinal cell damage and rapid LDH release to the culture medium (p<0.05). Additional CNTF supplementation minimized the cell damage, and the increase of LDH release was insignificant when compared to LDH levels before gentamicin insult (p>0.05). As well as this, the LDH activity was directly correlated with the cell count in GCL (R=−0.84, p<0.00001), making a sensitive marker of retinal neuron damage. The FLOREC protocol could be considered as a fast, reproducible, and sensitive method to detect neurotoxicity in the screening studies of the retinal drugs

Predegenerated Schwann cells-a novel prospect for cell therapy for glaucoma : neuroprotection, neuroregeneration and neuroplasticity

Glaucoma is an optic neuropathy that leads to irreversible blindness. Because the current therapies are not sufficient to protect against glaucoma-induced visual impairment, new treatment approaches are necessary to prevent disease progression. Cell transplantation techniques are currently considered to be among the most promising opportunities for nervous system damage treatment. The beneficial effects of undifferentiated cells have been investigated in experimental models of glaucoma, however experiments were accompanied by various barriers, which would make putative treatment difficult or even impossible to apply in a clinical setting. The novel therapy proposed in our study creates conditions to eliminate some of the identified barriers described for precursor cells transplantation and allows us to observe direct neuroprotective and pro-regenerative effects in ongoing optic neuropathy without additional modifications to the transplanted cells. We demonstrated that the proposed novel Schwann cell therapy might be promising, effective and easy to apply, and is safer than the alternative cell therapies for the treatment of glaucoma.Peer reviewe

Tumor heterogeneity and its impact on sotorasib response in a patient with non-small cell lung cancer

Mutations in the Kirsten rat sarcoma virus (KRAS) gene are the most common mutations in NSCLC, and they occur in 25–40% of patients with lung adenocarcinoma. Sotorasib, a selective KRAS inhibitor, is an anticancer drug used in NSCLC patients with a G12C mutation in the KRAS gene. In previously treated patients, this therapy was safer and more effective than docetaxel chemotherapy. Heterogeneity refers to differences between tumor cells within a single tumor as well as in primary and metastatic lesions. It may influence the response to targeted therapies and the development of acquired resistance to these therapies. It is assumed that sotorasib efficacy is lower in patients with known tumor molecular heterogeneity, which may be common in patients exposed to tobacco smoke.  This case report presents a 63-year-old woman with advanced NSCLC and a confirmed G12C mutation in the KRAS gene detected with the real-time PCR technique. A later next-generation sequencing (NGS) examination did not show the presence of this mutation. However, the NGS study was performed on material from a different metastatic lesion. The negative NGS result from this material was confirmed by the real-time PCR technique. The patient had a short-term benefit from first-line chemotherapy and second-line nivolumab immunotherapy (disease stabilization). Due to progression (progression of measurable lesions and new metastases to the CNS), the patient received brain radiotherapy and then sotorasib in the third line of treatment. However, the effectiveness of KRAS inhibition was limited. Regression of the lesion with a detected mutation in the KRAS gene and progression of lesions without this mutation were observed. Sotorasib therapy was terminated. The woman died two years after diagnosis, not benefiting from subsequent lines of therapy.  NSCLC heterogeneity (presence of mutations in only some clones of cancer cells) may be responsible for primary and acquired resistance to molecularly targeted therapies, including KRAS inhibitors.

Porównawcza ocena skuteczności klinicznej dwóch dawek czteroazotanu pentaerytrytylu* (100 mg i 30 mg) u pacjentów ze stabilną chorobą wieńcową

Wstęp: W ciągu ostatnich 10 lat przedstawiono wyniki wielu eksperymentalnych i klinicznych prac oceniających skuteczność i brak tolerancji po stosowaniu wysokich dawek czteroazotanu pentaerytrytylu (PETN) u pacjentów z chorobą wieńcową. Celem badań była ocena skuteczności klinicznej dwóch dawek PETN: 100 mg i 30 mg po podaniu jednorazowym i wielokrotnym. Materiał i metody: W randomizowanym badaniu, z zastosowaniem podwójnie ślepej próby w odniesieniu do placebo i podjęzykowej nitrogliceryny w dawce 0,5 mg uczestniczyło 30 pacjentów, u których potwierdzono chorobę wieńcową. Chorym podawano raz dziennie zakodowane tabletki PETN w dawkach 100 mg albo 30 mg przez dwa 2-tygodniowe okresy, ze zmianą grup po pierwszej fazie leczenia. Ocenę kliniczną obu dawek PETN przeprowadzano metodą prób wysiłkowych (PW) na bieżni przed oraz po 3 i 6 h po podaniu wylosowanego leku albo placebo. Ponadto pacjent rejestrował liczbę bólów i zużycie nitrogliceryny w okresach przyjmowania placebo albo dawek leku. W celu standaryzacji działania PETN w porównaniu z nitrogliceryną przeprowadzano dwie próby wysiłkowe w czasie wstępnej wizyty: pierwszą po podaniu placebo, a następnie po 3 h, 5 min po podjęzykowym podaniu nitrogliceryny. Wyniki: Zarówno w 3., jak i 6. h po jednorazowym oraz wielokrotnym podaniu PETN w dawce 100 mg stwierdzano istotne przyrosty wskaźników próby wysiłkowej w porównaniu z placebo: całkowitego czasu marszu (WTT): 14,4-18,0%, czasu marszu do wystąpienia bólu (WTA): 24,5&#8211;28,4% oraz czasu marszu do niedokrwienia (WTI): 31,3-37,6% (p < 0,0001). Przyrosty czasu marszu po 6 h po podania PETN w dawce 100 mg sięgały w zakresie WTT oraz WTA 90%, a w zakresie WTI prawie 80% przyrostów obserwowanych w czasie szczytowego działania nitrogliceryny. Liczba bólów wieńcowych i zużycie nitrogliceryny w okresie leczenia PETN w dawce 100 mg były również znacząco mniejsze w porównaniu z placebo. Podczas wielokrotnego stosowania PETN w dawce 30 mg obserwowano niewielką poprawę tolerancji wysiłku ograniczoną tylko do 3 h po podania leku. Wnioski: W badaniach porównawczych wykazano wysoką skuteczność terapii PETN w dawce 100 mg w zakresie tolerancji wysiłku, zmniejszenia liczby bólów wysiłkowych i zużycia nitrogliceryny podczas przewlekłego stosowania u pacjentów ze stabilną chorobą wieńcową. Ponadto wykazano niezadawalające działanie kliniczne PETN w dawce 30 mg. (Folia Cardiol. 2004; 11: 939&#8211;951

Porównawcza ocena skuteczności klinicznej dwóch dawek czteroazotanu pentaerytrytylu* (100 mg i 30 mg) u pacjentów ze stabilną chorobą wieńcową

Wstęp: W ciągu ostatnich 10 lat przedstawiono wyniki wielu eksperymentalnych i klinicznych prac oceniających skuteczność i brak tolerancji po stosowaniu wysokich dawek czteroazotanu pentaerytrytylu (PETN) u pacjentów z chorobą wieńcową. Celem badań była ocena skuteczności klinicznej dwóch dawek PETN: 100 mg i 30 mg po podaniu jednorazowym i wielokrotnym. Materiał i metody: W randomizowanym badaniu, z zastosowaniem podwójnie ślepej próby w odniesieniu do placebo i podjęzykowej nitrogliceryny w dawce 0,5 mg uczestniczyło 30 pacjentów, u których potwierdzono chorobę wieńcową. Chorym podawano raz dziennie zakodowane tabletki PETN w dawkach 100 mg albo 30 mg przez dwa 2-tygodniowe okresy, ze zmianą grup po pierwszej fazie leczenia. Ocenę kliniczną obu dawek PETN przeprowadzano metodą prób wysiłkowych (PW) na bieżni przed oraz po 3 i 6 h po podaniu wylosowanego leku albo placebo. Ponadto pacjent rejestrował liczbę bólów i zużycie nitrogliceryny w okresach przyjmowania placebo albo dawek leku. W celu standaryzacji działania PETN w porównaniu z nitrogliceryną przeprowadzano dwie próby wysiłkowe w czasie wstępnej wizyty: pierwszą po podaniu placebo, a następnie po 3 h, 5 min po podjęzykowym podaniu nitrogliceryny. Wyniki: Zarówno w 3., jak i 6. h po jednorazowym oraz wielokrotnym podaniu PETN w dawce 100 mg stwierdzano istotne przyrosty wskaźników próby wysiłkowej w porównaniu z placebo: całkowitego czasu marszu (WTT): 14,4-18,0%, czasu marszu do wystąpienia bólu (WTA): 24,5&#8211;28,4% oraz czasu marszu do niedokrwienia (WTI): 31,3-37,6% (p < 0,0001). Przyrosty czasu marszu po 6 h po podania PETN w dawce 100 mg sięgały w zakresie WTT oraz WTA 90%, a w zakresie WTI prawie 80% przyrostów obserwowanych w czasie szczytowego działania nitrogliceryny. Liczba bólów wieńcowych i zużycie nitrogliceryny w okresie leczenia PETN w dawce 100 mg były również znacząco mniejsze w porównaniu z placebo. Podczas wielokrotnego stosowania PETN w dawce 30 mg obserwowano niewielką poprawę tolerancji wysiłku ograniczoną tylko do 3 h po podania leku. Wnioski: W badaniach porównawczych wykazano wysoką skuteczność terapii PETN w dawce 100 mg w zakresie tolerancji wysiłku, zmniejszenia liczby bólów wysiłkowych i zużycia nitrogliceryny podczas przewlekłego stosowania u pacjentów ze stabilną chorobą wieńcową. Ponadto wykazano niezadawalające działanie kliniczne PETN w dawce 30 mg. (Folia Cardiol. 2004; 11: 939&#8211;951

Przydatność określania obecności mutacji BRAF V600E w biopsji aspiracyjnej celowanej cienkoigłowej w zmianach niezdeterminowanych

  Introduction: Fine-needle aspiration biopsy (FNAB) is regarded as the gold standard method for the diagnosis of thyroid nodules, but it has its limitations. Additional methods that would improve sensitivity and specificity in the diagnosis of thyroid cancer (TC), especially in indeterminate lesions. Molecular tests seem to be such a tool. BRAF V600E mutation (the most common in TC) can be detected in FNAB and can be potentially a very useful ancillary marker for FNAB practice. The aim of our study was to evaluate the usefulness of the detection of the BRAF V600E mutation in FNAC in the early diagnosis of TC in patients with indeterminate cytology. Material and method: 2290 FNAB were performed and 147 indeterminate results (group 3, 4, and 5 of the Bethesda system) were obtained. Material from these groups was submitted for molecular tests for the occurrence of BRAF V600E mutation. Sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, and accuracy of the tests were calculated. Results: Determining the presence of BRAF V600E mutation in FNAC material in groups 3 and 4 together and in group 5 is associated with sensitivity of TC diagnosis of 37.5% and 81.8%, respectively. In all cases the detection of BRAF V600E mutation was associated with histopathologically proving the presence of TC (specificity of the test — 100%). Conclusions: The presence of BRAF V600E mutation in FNAC material is always associated with the presence of TC. The usefulness of determining the presence of BRAF V600E in FNAC in cytological groups 3 and 4 is associated with low sensitivity in the diagnosis of thyroid cancer. Due to its high specificity BRAF V600E study may be useful in determining the scope of surgery in patients in cytological group 5. (Endokrynol Pol 2016; 67 (1): 41–47)    Wstęp: Biopsja aspiracyjna celowana cienkoigłowa (BACC) jest uznawana za złoty standard w diagnostyce guzków tarczycy. Ma ona jednak swoje ograniczenia. Poszukiwane są więc dodatkowe metody, które poprawiłyby czułość i specyficzność diagnozowania raka tarczycy, zwłaszcza w przypadku zmian niezdeterminowanych w BACC. Badania molekularne wydają się być takim narzędziem. Mutacja BRAF V600E (najczęstsza w raku tarczycy) może być wykrywana w materiale z biopsji i może wspomagać BACC w rozpoznawaniu raka tarczycy. Celem pracy była ocena przydatności wykrywania mutacji BRAF V600E w BACC w zmianach niezdeterminowanych we wczesnej diagnostyce pacjentów ze zmianami ogniskowymi w tarczycy. Materiał i metody: Przeprowadzono 2290 BACC, uzyskując w 147 próbkach wyniki niezdeterminowane (grupy 3, 4 i 5 wg klasyfikacji Bethesda). W grupie tej przeprowadzono badania molekularne w kierunku występowania mutacji BRAF V600E. Obliczono czułość, swoistość, wartość predykcyjną dodatnią, wartość predykcyjną ujemną i dokładność testu. Wyniki: Obecność mutacji BRAF V600E w grupach cytologicznych 3 i 4 łącznie oraz w grupie 5 wiązała się z czułością w rozpoznawaniu raka tarczycy odpowiednio 37,5% i 81,8%. W każdym przypadku wykrycia mutacji BRAF V600E w badaniu pooperacyjnym rozpoznano raka tarczycy (specyficzność testu —100%). Wnioski: Obecność mutacji BRAF V600E w materiale BACC jest zawsze związana z obecnością RT. Przydatność określenia obecności BRAF V600E w BACC w grupach cytologicznych 3 i 4 jest związana z niską czułością rozpoznania RT. Ze względu na wysoką specyficzność BRAF V600E badania mogą być przydatne w określaniu zakresu operacji u pacjentów z grupy cytologicznej 5. (Endokrynol Pol 2016; 67 (1): 41–47)

The influence of the reclassification of NIFTP as an uncertain tumour on risk of malignancy for the diagnostic categories according to the Bethesda system for reporting thyroid cytopathology

Introduction: The noninvasive encapsulated, follicular variant of papillary thyroid carcinoma was reclassified as noninvasive follicular thyroid neoplasm with papillary-like nuclear features (NIFTP). The exclusion of NIFTP from the group of malignant tumours decreases the risk of malignancy (RoM) as defined by the Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology (TBSRTC). The aim of the present study was to evaluate the RoM for each category in TBSRTC with and without exclusion of NIFTP from the tally of malignancies. Material and methods: The present study included 998 thyroid nodules cases. All patients underwent diagnostic tests, including fine-needle aspiration cytology, and received surgical treatment. Slides for all resection specimens with a diagnosis of cancer were reviewed to identify NIFTP. The RoM for each of the categories in TBSRTC with and without exclusion of NIFTP from the malignant tumours was evaluated. Results: The RoM decreased with the exclusion of NIFTP from malignant categorisation with the following values for the different TBSRTC categories: non-diagnostic (ND): 0%; benign: 0%; atypia/follicular lesion of undetermined significance (AUS/FLUS): 1.6%; follicular neoplasm/suspicious for follicular neoplasm (FN/SFN): 0.7%; suspicious for malignancy (SUS): 6.9%; and malignant: 2.5%. The difference of 2.5% in the malignant category was statistically significant (p = 0.0253). Conclusions: The RoM for specific TBSRTC categories needs to be defined for each treatment centre because it is important for the selection of the appropriate surgical treatment for thyroid tumours

Радиопоглощающие материалы на основе наполненного полиэтилена

Радиопоглощающие материалы (РПМ) и электромагнитные экраны на их основе являются одним из эффективных средств решения проблем электромагнитной безопасности и электромагнитной совместимости радиоэлектронной техники. Среди многообразия РПМ свою нишу занимают материалы на основе наполненного полиэтилена. Для композитных РПМ на основе полиэтилена, содержащего различные функциональные дисперсные наполнители и армированные электропроводящими тканями, установлены оптимальные значения толщины образцов, степени наполнения, при которых ослабление энергии СВЧ-излучения максимально. Оценены радиофизические параметры полимерных композитных РПМ в диапазоне частот 2,0–27,0 ГГц при нормальном падении на образец электромагнитной волны. С применением растровой электронной микроскопии изучена структура композитных РПМ. По технологическим и технико-экономическим критериям наиболее перспективными средствами радиозащиты являются РПМ на основе функционально наполненных термопластов. РПМ относятся к материалам двойного назначения и могут быть использованы при создании малозаметных объектов, в том числе летательных аппаратов.Radioabsorbing materials and electromagnetic screen based on these materials are one of the effective means of solving electromagnetic safety and electromagnetic compatibility problems of radioelectronic equipment. Among the variety of radioabsorbing materials loaded polyethylene based materials hold their own place. For composite radioabsorbing materials based on polyethylene including various functional dispersed fillers and reinforced with conducting textiles optimum thickness values of the samples are specified and also the levels of filling at which the attenuation of microwave radiation reaches maximum. Radio physical parameters of polymer composite radioabsorbinhg materials in the range of frequencies of 2,0–27,0 GHz at normal incidence of electromagnetic wave on a sample are evaluated. Using raster electronic microscopy the structure of composite radioabsorbing materials have been studied. Evaluated by technological and technical-economic parameters the most promising means of radioprotection are radioabsorbing materials based on functionally loaded thermoplastic materials. Radioabsorbing materials are referred to as double-purpose materials and can be used for making barely visible objects such as flying apparatuses

Wytyczne dla laboratoriów genetyki nowotworów litych

Niniejsze wytyczne skierowane są do laboratoriów wykonujących diagnostyczne badania genetyczne technikami biologii molekularnej i cytogenetyki molekularnej (FISH) w zakresie genetyki nowotworów litych zarówno w obszarze zaburzeń genetycznych dziedzicznych, jak i nabytych. Diagnostyczne badanie genetyczne jest wykonywane w celu identyfikacji zaburzeń w DNA komórek człowieka. Przestrzeganie niniejszych zasad ma na celu zapewnienie wysokiego poziomu usług medycznych świadczonych przez laboratoria