高脂血症患者の末梢リンパ球および肝細胞におけるリポ蛋白代謝の研究

金沢大学医学部研究課題/領域番号59770443, 研究期間(年度):1984出典：研究課題「高脂血症患者の末梢リンパ球および肝細胞におけるリポ蛋白代謝の研究」課題番号59770443（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-59770443/）を加工して作

コレステリルエステル転送蛋白欠損症と動脈硬化に関する研究

コレステリルエステル転送蛋白(CETP)はHDLとアポB含有リポ蛋白との間でCEを転送する。1980年、我々が最初に報告した家族性CETP欠損症に著しい高HDL血症が認められたことより、CETPのHDL代謝への大きな影響が認識されてきた。今回の研究で、我々はイントロン14のスプライシング異常によるCETP欠損症の遺伝子診断法を確立し、ヘテロおよびホモ接合体を診断し、リポ蛋白異常を明らかにした。1.本症はわが国でのみ発見されている代謝異常であり,このCETP遺伝子変異によるCETP欠損症が同じ起源を持つ遺伝子変異によることが、ハプロタイプの検討より明かとなった。2,我々が開発した、PCR法により新しい制限酵素切断部位を作成する方法は条件設定が比較的容易であり、アイソト-プを使用せず短時間で結果が判定できるスクリ-ニングに適した方法であった。HDLーCが120mg/dl以上での異常遺伝子発現頻度は52%であり、100mg/dl以上では28%であった。HDLーCが120mg/dl以上の21例中14例にこの遺伝子異常が認められたが、残り7例は別の原因による高HDLーC血症であった。3,ヘテロ接合体のHDLは量的には僅かのCEの増加を示すのみであったが、脂質組成では明らかなCETP量の低下の影響が認められた。さらに、CETP量とIDLのECおよびEC/TG比との間に正の相関が認められ、LDL同様に動脈硬化を促進するIDLーCの増加とCETPとの関係が示唆された。従って、CETP欠損症ではCETPの量の程度により動脈硬化を促進するリポ蛋白が減少し、また、動脈硬化を予防するリポ蛋白が増加していると思われた。以上より、CETPの減少は血清リポ蛋白を抗動脈硬化的に変化させている。CETPが約半量のCETP欠損症のヘテロ接合体での冠動脈硬化症の頻度の検討が今後の課題である。Cholesteryl ester transfer protein (CETP) can transfer cholesteryl ester from high density lipoprotein to apoB-containing lipoproteins. Our first report of familial CETP deficiency in 1980, revealed that the deficiency of CETP caused extremely high HDL cholesterol levels. Therefore, CETP plays an important role in HDL cholesterol metabolism. The CETP deficiency is caused by the mutation of intron 14 splice donor site of CETP gene, and the mutation of the CETP gene is common in CETP deficiency, resulted from the study of haplotype analysis.In this study, we developed a new methods about detecting the intron 14 splicing defect in CETP deficiency, and have searched the heterozygote of CETP deficiency. Allele frequency of the mutation was 8.0 % and 52.4 % in the groups of 100-119 mg/dl and equal or exceeded 120 mg/dl of HDL cholesterol. In the group of equal or exceeded 120 mg/dl of HDL cholesterol, 14 patients i 21 had the mutation of CETP gene, but other 7 patients had not. There was an increase of cholesteryl ester/triglyceride ratio in HDL in the heterozygous patients with CETP deficiency. Serum CETP concentration positively related to the intermediate density lipoprotein (IDL) cholesteryl ester and cholesteryl ester/triglyceride ratio. Thus, since the IDL cholesterol is atherogenic, the reduced IDL cholesterol in the heterozygotes may be anti-atherogenic.In conclusion, there was an anti-atherogenic change in the lipoprotein pattern in plasma obtained from the heterozygous patients with CETP deficiency. The frequency of coronary atherosclerosis in the heterozygotes should be studied in the near future.研究課題/領域番号:02670278, 研究期間(年度):1990-1991出典：「コレステリルエステル転送蛋白欠損症と動脈硬化に関する研究」研究成果報告書　課題番号02670278(KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）)　　　本文データは著者版報告書より作

食後レムナント代謝異常におけるコレステリルエステル転送蛋白の役割

動脈硬化症の成因および進展にリポ蛋白代謝異常の重要性が指摘されている。今回は、我々が世界で初めて報告したCETP遺伝子異常をさらに検討し、新しいエキソン15のミスセンス変異を明らかにした。また、食後レムナント代謝異常が存在する糖尿病患者と家族性複合型高脂血症(FCHL)の関係の検討のために、家族調査により診断されたFCHLの耐糖能異常を検討した。CETP遺伝子異常の検討で、Int14Aのホモ接合体は15例、ヘテロ接合体は12例、D442Gのホモ接合体は4例、ヘテロ接合体は35例が明らかにされた。一般男性でのCETP遺伝子異常の頻度はInt14Aのヘテロが2%、D442Gのヘテロが7%と高頻度に認められ、CETP遺伝子異常が日本人のリポ蛋白代謝へ大きく影響を及ぼしていると考えられた。FCHLの頻度の検討では、49例中14例(29%)がFCHLであった。高脂血症を合併する糖尿病患者の50%がFCHLであった。さらに、FCHLでは耐糖能障害が多く認められ、75g0GTTによるIRI濃度時間曲線下面積(AUC-IRI)の平均は、FCHL群のN群とIGT群ではC群のN群とIGT群より有意に高値であった(p〈0.05)。さらに、FCHL群のN群とIGT群のAUC-IRI/AUC-血糖比は、C群のN群とIGT群より有意に高値であった(p〈0.05)。FCHLのN群のHDL-CはC群より有意に低値であり、IRI反応とIDL-C、HDL-C、TGとの関係では、FCHL群ではIDL-CとAUC-IRIとの間に有意な正相関が認められた(p〈0.05)。糖尿病患者の血清CETP活性は正常コントロールと有意差は認められなかった。以上より、高脂血症を伴う糖尿病患者ではFCHL合併が高頻度に示唆され、さらに、FCHLにおける高インスリン血症が明らかとなった。今後さらにレムナント代謝とCETPの関係を、動脈硬化を生じるリポ蛋白代謝異常の解明のために検討しなければならない。Cholesteryl ester transfer protein (CETP) mediates the heteroexchange of HDL cholesteryl esters with triglycerides of VLDL and chylomicrons. The impaired triglyceride-rich lipoprotein metabolism and accumulaton of remnant lipoproteins, has been reported in diabetic or familial combined hyperlipidemic patiens. The increased CETP activity may produce atherogenic lipid compositions of apoprotein-B-containing lipoproteins, as a result of cholesterol transport from HDL.To study a role of CETP in the impaired remnant metabolism, the CETP gene mutations were searched in Japanese people, and the insulin resposes after glucose administration in FCHL patients were examined.Two novel mutations were identified : an intron 14 splice donor site mutation caused by a T insertion at position +3 (Int14 T) and a missense mutation (Asp442 to Gly) within exon 15 (D442G), in addition to an intron 14G (+1) to A mutaion (Int14 A) which was previously reported. Prevalences of the D442G and Int14 A mutations were extremely high in the general sample of Japanese men (n=236), with heterozygote frequencies of 7% and 2%, respectively.According to the 75gOGTT,35% of FCHL patients showed an impaired glucose tolerance and 25% of FCHL patients a diabetic glucose tolerance. Area under the plasma insulin concentration-time curve in the FCHL patients with normal and impaired glucose tolerances were significant higher than those in the control group (p<0.05). There were significant relationships between AUC-IRI and LDL-cholesterol levels (p<0.05). FCHL and hyperinsulinemia in diabetic patients, may be important factors linkaging diabetes and CHD.In conclusion, FCHL patients showed hyperinsulinemia after glucose administration, and may contribute to the increased CHD in the patients with glucose intolerance. CETP may play a role in the impaired remnant metabolism in FCHL and diabetic patients. Further study will be required.研究課題/領域番号:06671013, 研究期間(年度):1994-1995出典：「食後レムナント代謝異常におけるコレステリルエステル転送蛋白の役割」研究成果報告書　課題番号06671013(KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）)　　　本文データは著者版報告書より作

コレステロールエステル転送蛋白と動脈硬化症との関連についての研究

コレステロールエステル転送蛋白(CETP)は、アポB含有リポ蛋白(LpーB)へコレステリルエステル(CE)を転送する蛋白であり、動脈硬化の進展、退縮に重要と考えられているコレステロール逆転送系に関係している。我々はCETPと動脈硬化症との関係を検討し、以下の結果をえた。1、冠動脈造影所見より、冠動脈狭窄はHDLーC、HDLーC/Al比と負相関を示した。このHDLーCおよびHDLーC/Al比の変化はアポB値と有意の負の相関を示し、HDLーCの低下における、LpーBの増加の影響が示唆された。2、家族性高コレステロール血症患者(FH)における比重1.063以上分画のアポE/アポAl比は正常者より増加していた。アポE含有HDL(EーHDL)の増加がヘテロ接合体およびホモ接合体FHで認められ、コレステロール逆転送系の障害が示唆された。ヘテロFHのCETAは正常より高値であり、ホモFHでは正常の4倍の高値であった。また、CETAとHDLーC/Al比とは負の相関が認められた。3、CETP遺伝子はTaqI制限酵素により2種のRFLPを示した(A:9.0Kb/7.5Kb,5.3Kb/4.4Kb)。CETAの欠損している家族性高HDL血症患者のRFLPを検討した。完全欠損と考えられた発端者(SY)においてもCETP遺伝子は存在し、7.5Kbと4.4Kbのホモ接合であった。この家系内でのHDLーCの高値とRFLPのタイプとの間の関係は認められなかった。FHでのCETP遺伝子のRFLPが同様に検討された。特定のalleleとCETAとの間に有意の関係はみられなかったが、HDLーC/Al比とRFLPのパターンとの関係が認められる家系も存在し、HDLの変化に対するCETP遺伝子の関与が示唆された。以上より、CETPは高脂血症では増加しており、HDLーCの低下とLpーBのCEの増加に関与し、動脈硬化に促進的に働くと考えられた。CETAの調節には遺伝子レベルでの関与も示唆された。Cholesteryl-ester transfer protein (CETP) transfers and exchanges cholesteryl esters between liporoteins. An increase of cholesteryl-ester transfer activities (CETA) may result in low levels of high-density-lipoprotein cholesterol (HDL-C). To investigate a role of CETP on progression or regression of atherosclerosis, CETA and HDL-C/apoAI ratio were examined in patients with familial hypercholesterolemia (FH) or coronary heart disease. Restriction fragment length polymorphisms (RFLP) of CETP gene were analyzed on FH or familial hyperalphalipoproteinemia with deficiency of CETA.Coronary atherosclerosis indeces which were estimated from the findings of selective coronary cine angiogram, showed a negative correlation with HDL-C levels and HDL-C/apoAI ratios. The decrease of HDL-C level was related to the increase of apoB-containing lipoprotiens. On plasma of FH, there were significantly high activities of cholesteryl ester transfer between HDL and other lipoproteins, and a negative correlation between CETA and HDL-C/apoAI ratio. Taq I RFLP of CETP gene was analyzed in patients with familial hyperalphalipoproteinemia or FH. A familial hyperalphalipoproteinemic patient with CETA deficiency showed a homozygosity in RFLP of CETP gene. The relationship between HDL-C/apoAI ration and RFLP patten of CETP gene was recognized in members of a FH family.These results indicated that CETA increased in hyperlipoproteinemia. The increase of CETA might cause an increase of atherogenic remnant cholesterol and a decrease of HDL-C, resulting in progression of atherosclerosis.研究課題/領域番号:62570282, 研究期間(年度):1987-1988出典：「コレステロールエステル転送蛋白と動脈硬化症との関連についての研究」研究成果報告書　課題番号62570282 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）)　　　本文データは著者版報告書より作