Expresión de Citoquinas de la respuesta TH1 (Ifnγ e Il2) y TH2 (Il4 e Il10) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna Pacos) sanas y con Enteropatía

El objetivo del estudio fue caracterizar la expresión de citoquinas características de la respuesta inmune adaptativa celular (Th1) y humoral (Th2) en mucosa intestinal de crías de alpaca sanas y enfermas con enteropatía de cero a 45 días de edad. Se evaluó la expresión de ARNm de IFNγ e IL2 (Th1) junto a IL4 e IL10 (Th2) a través de RT-PCR Tiempo Real y cuantificación relativa según el método 2-ΔΔCt empleando el gen GAPDH como gen interno y en relación a animales calibradores recién nacidos que no han consumido calostro. Se encontró que la expresión de estas citoquinas es detectable a partir del nacimiento y que poseen una cinética ascendente y gradual que alcanza su máxima expresión entre la tercera y quinta semanas de edad en todas las citoquinas evaluadas en el grupo de animales sanos. Asimismo, se encontró pobre expresión de IL2 y una aparente polarización de la respuesta Th1 a través de expresión de IFNγ por encima del resto de citoquinas. Existió diferencia estadística significativa en las comparaciones hechas de acuerdo a grupo sanitarios y edad, así como correlación positiva entre edad y expresión de citoquinas, soportando la observación de la cinética ascendente y el establecimiento de esta cinética como patrón de expresión en los animales sanos. En los animales enfermos, se observó expresión aumentada de todas las citoquinas con respecto a los animales sanos y calibradores, particularmente en el caso de IFNγ e IL4, las que se regulan mutuamente y polarizan la respuesta inmune. No se halló un patrón específico ni correlación entre edad y expresión de citoquinas en este grupo. -- Palabras clave: crías de alpaca, mucosa intestinal, Th1, Th2, ARNm, RT-PCR Tiempo Real, cuantificación relativa.-- The aim of this study was to characterize expression of cytokines belonging to the immune cellular (Th1) and humoral (Th2) adaptative responses in intestinal mucosa tissue from healthy and from sick newborn alpacas showing clinical signs of enteropathy, ages ranging from zero to 45 days. We assessed expression of mRNA levels of IFNγ and IL2 (Th1) along with IL4 and IL10 (Th2) by means of Real Time RT-PCR and relative quantization according to the 2-ΔΔCt method using the GAPDH gene as internal control and in relation to newborn animals which had not consumed any colostrum right after birth (calibrators). We found that expression of all these cytokines is detectable at the time of birth and it varies according to a gradual ascendant kinetics reaching its maximum expression between the third and fourth weeks of age in healthy animals. Also, IL2 is expressed poorly in this tissue while there is an apparent polarization towards Th1 responses, mainly due to high expression of IFNγ which levels are always higher than the rest of cytokines. There was significant statistic difference when health status and age were compared, also positive correlation between age and levels of expression, supporting our observations regarding gradual ascendant kinetics as a pattern of cytokine expression in healthy animals. Enteropathic animals showed very elevated levels of cytokine expression when compared to healthy animals and calibrators, particularly in the case of IFNγ and IL4, which in turn regulate each other and polarize immune responses towards Th1 and Th2, respectively. We could not find any specific expression pattern or positive correlation between age and cytokine expression in this group of animals. -- Key words: newborn alpaca, intestinal mucosa, Th1, Th2, mRNA, Real Time RT-PCR, relative quantization.Tesi

AISLAMIENTO Y GENOTIPIFICACIÓN DEL VIRUS DEL SÍNDROME RESPIRATORIO Y REPRODUCTIVO PORCINO (VPRRS) EN GRANJAS SEROPOSITIVAS DE LAS PROVINCIAS DE LIMA Y AREQUIPA, PERÚ

The aim of this study was to isolate and genotyping the Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus (PRRSV) strain in pig farms in Lima and Arequipa, Peru. Seropositive pig farms to PRRSV were identified by ELISA test. Blood samples were collected from weaned pigs from positive pig farms in Lima (A=44, B=20; C=16) and Arequipa (D=32, E=92). The serum samples (n=204) were processed in 51 pools of 4 samples each for virus isolation using Porcine Alveolar Macrophage (PAM) cell line. The genome of the virus isolated was identified by Reverse Transcription-nested Polimerase Chain Reaction (RT-nPCR). The complementary DNA (cDNA) of genotype 1 and 2 of PRRSV vaccine strains were used as positive controls and cDNA of equine viral arteritis virus, classical swine fever virus and PAM cells as negative controls in the RT-nPCR. Three blind passages in PAM cell line with each of the 51 pool were done before searching PRRSV antigen by Immunofluorescence test. The 19.6% (10/51) of samples were positive to viral antigen by IF. The 70% (7/10) of the isolated strains had no cytopathic effect. Eight out of ten positive samples were confirmed as PRRSV using RT-nPCR test and 1 of the 41 negative samples was positive to PRRSV by RT-nPCR. The 17.6% (9/51) of isolated were positives to PRRSV using primers that recognize the common genomic sequence to genotype 1 and 2 of PRRSV. All the PRRSV strains confirmed by RT-nPCR test belonged to genotype 1. This is the first evidence of genotype 1-European of PRRSV in pig farms in Peru.El objetivo del presente estudio fue aislar e identificar el genotipo de las cepas del virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (VPRRS) de granjas porcinas de las provincias de Lima y Arequipa. Se identificaron granjas porcinas seropositivas al VPRRS mediante la prueba de ELISA. Se colectaron muestras de suero de porcinos en etapa de recría, engorde y acabado de tres granjas de Lima (A=44, B=20, C=16) y dos de Arequipa (D=32, E=92) en 2010. Las 204 muestras fueron procesadas en 51 mezclas de 4 muestras cada una, respetando el lugar de procedencia, para el aislamiento viral en el clon 3D4/31 de la línea celular de macrófago alveolar porcino (PAM). La identificación del genoma viral se realizó mediante la técnica de Transcripción Reversa Reacción en Cadena de la Polimerasa tipo anidada (RT-nPCR). El ADN complementario (ADNc) de cepas vacunales del VPRRS del genotipo 1 y 2 fueron utilizados como controles positivos y ADNc de los virus de la arteritis viral equina y peste porcina clásica y de las células PAM como controles negativos en la técnica de RT-nPCR. Se realizaron tres pasajes ciegos en la línea celular PAM con las 51 mezclas de suero antes de ser procesadas para la búsqueda de antígeno del VPRRS mediante la técnica de inmunofluorescencia directa (IF). El 19.6% (10/51) de las muestras de suero resultaron positivas al aislamiento viral por IF. El 70% (7/10) de las cepas aisladas no presentaron efecto citopático. De los 10 aislados positivos, 8 fueron confirmados como VPRRS por la técnica de RT-nPCR y 1 de las 41 mezclas negativas por IFD fue positiva al VPRRS por RT-nPCR. El 17.6% (9/51) de las muestras resultaron positivos al VPRRS utilizando los cebadores que reconocen a la secuencia génica común al genotipo 1 y 2 del VPRRS. Todas las cepas del VPRRS confirmadas por la técnica de RT-nPCR pertenecieron al genotipo 1. No hubo amplificación del ARN de los controles negativos. Esta es la primera evidencia del genotipo 1 del VPRRS en granjas porcinas en el Perú

CARACTERIZACIÓN HISTOLÓGICA Y DINÁMICA LINFOIDE DE LAS PLACAS DE PEYER EN CRÍAS DE ALPACA DURANTE LOS 45 PRIMEROS DÍAS DE VIDA

The study aimed to describe the histological features of Peyer’s patches in jejunum and ileum of 33 newborn alpacas from 0 to 45 days of age. Sections of jejunum and ileum were collected and fixed in 10% buffered formaldehyde. Standard histological slides stained with hematoxylin-eosin were obtained and poly-L-lysine coated slides were used for detection of T cells by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against CD-8 marker aided by Histostain development system. Histologically, newborn alpacas showed organized and well defined intestinal mucosa-associated lymphoid tissue in both, jejunum and ileum. In animals older than 14 days of age, jejunal Peyer’s patches develop showing regions of active cells and other areas of undifferentiated lymphoid cells. It was also found a very active and positive reaction to CD8 marker on lymphocytes grouped in follicles and on Peyer’s patches of jejunum and ileum of animals from 6 to 10 days of age and onwards. The number of CD8 (+) lymphocytes increases according to the animal’s age. It is concluded that Peyer’s patches develop before birth in the ileum and jejunum, both locations being active after birth although ileal Peyer’s patches decrease in time while jejunal Peyer’s patches persist through lifespan.El objetivo del estudio fue describir las características histológicas de las placas de Peyer (PP) en yeyuno e íleon en 33 crías de alpaca de 0 a 45 días de edad. Se colectaron las porciones del yeyuno e íleon y las muestras se fijaron en formaldehído al 10% tamponado. Se obtuvieron láminas histológicas coloreadas con Hematoxilina-Eosina y láminas positivadas con poli-L-lisina con muestras de yeyuno e íleon para detección de linfocitos T por inmunohistoquímica, utilizando anticuerpos monoclonales contra CD-8 y el sistema de revelado Histostain. Histológicamente, las crías al nacimiento muestran organizaciones linfoides asociadas a mucosa intestinal bien definidas tanto en yeyuno e íleon. En crías mayores de 14 días se observa un mayor crecimiento conformado por las placas de Peyer yeyunales (PPY), que presentan una región de linfocitos activos y otra de células no diferenciadas. Se encontró gran actividad y positividad al marcador CD8 en los linfocitos agrupados en folículos y PP, tanto yeyunales como del íleon (PPI) a partir de crías de 6-10 días. El número de linfocitos que expresan CD8 se incrementa a medida que aumenta la edad del animal. Se concluye que existe un desarrollo de las PPI y PPY anterior al nacimiento, siendo las PPI las que sufren una involución y las PPY las que persisten durante toda la vida del animal, siendo ambas activas posnacimiento

Expresión de Citocinas Pro-Inflamatorias de Leucocitos de Alpaca (Vicugna pacos) Inducidos por el Extracto de Macroquistes de Sarcocystis aucheniae

The aim of this research was to determine the expression of proinflammatory cytokines from alpaca leukocytes through the antigenic challenge with macrocyst extract of Sarcocystis aucheniae at various doses and exposure times. Leukocytes in a concentration of 500 000 cells/ml were exposed to concentrations of 0.5, 1, 50, 500 and 1000 ng of macrocyst extract ofS. aucheniae and incubated for 1, 12 and 24 h. The total messenger RNA (mRNA) was extracted for each treatment using Trizol and used to perform real-time RT-PCR with specific primers for cytokine TNF-α and interleukins IL-1α, IL-1β and IL-6. The generated mRNA levels of IL-1α and TNF-α at 1 h were detectable and higher in comparison to the calibrator (leukocytes not exposed to the extract). IL-1β increased at the 1 ng/ml concentration at 24 h showing a negative kinetic expression when compared with the untreated control group. IL-6 was not evidenced by RT-PCR real time. In addition, the leukocytes viability at 1, 12 and 24 h corroborated the toxic effect of the macrocyst extract ofS. aucheniae at high concentrations.El objetivo del trabajo fue determinar la expresión de citocinas pro-inflamatorias de leucocitos de alpaca mediante el enfrentamiento antigénico de extracto de macroquistes de Sarcocystis aucheniae a diversas dosis y tiempos de exposición. Se empleó una concentración de leucocitos de 500 000/ml expuestos a 0.5, 1, 50, 500 y 1000 ng de extracto de macroquistes de S. aucheniae e incubados por 1, 12 y 24 h. Se extrajo los ARN mensajeros (ARNm) totales de cada tratamiento con Trizol y se utilizaron en una RT-PCR tiempo real con cebadores específicos de la citosina TNF-α e interleucinas IL-1α, IL-1β e IL-6. Se observó que los niveles de ARNm de IL-1α y TNF-α generados a 1 h de incubación eran detectables y comparativamente elevados con respecto al calibrador (leucocitos no expuestos a extracto). La IL-1β se encontró incrementada en la concentración de 1 ng/ml a las 24 h, mostrando una cinética de expresión negativa en comparación con el control no tratado. La IL-6 no se evidenció mediante RT-PCR tiempo real. Asimismo, se realizó la observación de viabilidad leucocitaria a los tiempos de 1, 12 y 24 h permitiendo corroborar el efecto tóxico del extracto de macroquistes de S. aucheniae a altas concentraciones

EVALUACIÓN in vitro DE LA RESPUESTA LEUCOCITARIA DE ALPACAS (Vicugna pacos) EN PRESENCIA DE ANTÍGENOS CLOSTRIDIALES

The aim of this study was to evaluate the expression of proinflammatory cytokines of alpaca circulating leukocytes when confronting total extract of Clostridum perfringens (structural components and toxins). Whole blood was collected from the jugular vein of 5 female and 5 male adult alpacas. The leukocytes were separated using ammonium chloride to lyse erythrocytes followed by centrifugation and then cultured at a concentration of 500 000 cells/ml of MEM (Minimal Essential Medium) in culture plates of 12 wells. Simultaneously were challenged with total extract of C. perfringens grown in thioglycolate broth at concentrations of 400, 80, 16, 0.8 and 0.2 μg/ml and then quantifying by RT-PCR the expression of cytokines TNF∝, IL-1∝, IL-6 and IL-1ß at 1, 12 and 24 h of exposure. The results showed that low doses of clostridial extracts (0.2 to 0.8 mg/ml) are capable of inducing expression of TNF∝, IL-1∝ and IL-1ß at 1, 12 and 24 h of incubation, whereas higher doses do not exceed the expression of cytokines in unstimulated (control) leukocytes. There was no significant production of IL-6 up to 24 h after exposure to whole extract of C. perfringens. These results indicate that C. perfringens and its toxins at low doses induce activation of circulatory leukocyte in alpacas producing proinflammatory cytokine secretion.El objetivo del presente estudio fue evaluar la expresión de citoquinas proinflamatorias de leucocitos circulantes de alpaca al enfrentarlos a extracto total de Clostidium perfringens (componentes estructurales y toxinas). Se colectó sangre entera de la vena yugular de 5 alpacas hembras y 5 alpacas machos adultos. Los leucocitos fueron separados utilizando cloruro de amonio para lisar los eritrocitos, seguido de centrifugación y luego cultivados a una concentración de 500 000 leucocitos/ml de medio MEM (Medio Mínimo Esencial) en placas de cultivo de 12 pocillos. Simultáneamente, fueron enfrentados a extracto total de C. perfringens cultivados en caldo tioglicolato a concentraciones de 400, 80, 16, 0.8 y 0.2 μg/ml, para luego cuantificar, mediante la RTPCR, la expresión de las citoquinas TNF∝, IL-1∝, IL-1ß e IL-6 a 1, 12 y 24 h de exposición. Los resultados demostraron que dosis bajas de extractos clostridiales (0.2 a 0.8 μg/ml) son capaces de inducir expresiones de TNF∝, IL-1∝, e IL-1ß a 1, 12 y 24 h de incubación, a diferencia de dosis altas donde no sobrepasan la expresión de las citoquinas en leucocitos no estimulados (control). No se evidencia producción considerable de IL-6 hasta las 24 h post exposición a extracto completo de C. perfringens. Los resultados indican que el C. perfringens y sus toxinas a dosis bajas inducen la activación de los leucocitos circulantes de alpacas produciendo la secreción de citoquinas proinflamatorias

GENOMIC DETECTION AND EXPRESSION OF ANTIMICROBIALS PEPTIDES (? - AND ? - DEFENSINS) IN INTESTINAL MUCOUS OF NEWBORN ALPACA (VICUGNA PACOS)

El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia genómica de ? - y ?- defensinas (Defa 8 y??-def alp) y sus niveles de expresión como ARN mensajeros, en muestras de mucosa intestinal de crías alpaca. Se colectaron muestras de yeyuno y sangre de 30 animales de 0 a 45 días de edad. Se extrajo el ADN genómico y los ARN mensajeros para el análisis por PCR y RT-PCR tiempo real, respectivamente. La prueba de PCR convencional determinó que todas las muestras amplificaron un segmento genómico de entre 800 y 900 pb correspondiente a una Defa 8, y el 90% (27/30) de las muestras amplificó un segmento esperado de 300 a 350 pb para ?-def alp y dos bandas adicionales de 800 a 900 pb, evidenciados en la electroforesis en gel de agarosa. La detección de ARN mensajeros por RT-PCR tiempo real se realizó en base al análisis de las curvas de amplificación (Ct) y curvas de disociación (Tm) de los productos amplificados. Las Cts de los amplificados de Defa 8 estuvieron entre 25.1 y 39.5 ciclos, con un promedio de 36.4 ± 1.9, y las Tm entre 79.1 y 85.7 ºC. Las Cts de los amplificados de ?-def alp estuvieron entre 22.7 y 36.8 ciclos, con un promedio de 32.4 ± 3.3, y las Tm tuvieron un rango de 71 a 81.9 ºC. Los niveles de expresión se determinaron por cuantificación relativa en base al método de Ct comparativo. Los resultados mostraron niveles crecientes de Defa 8 y ?- def alp hasta la 3ª semana, disminuyendo entre la 4ª y 6ª semana. Los resultados demuestran la presencia genómica y expresión de ? - y ?-defensinas en el yeyuno de las crías de alpaca menores de 45 días de edad.The aim of this study was to determine the presence of genomic ?-and ? -defensins (bovine enteric beta defensin – ?-def alp – and Defa 8 respectively) and their levels of expression as messenger RNA in samples of intestinal mucosa of newborn alpacas. Samples of jejunum of 30 animals from 0 to 45 days of age were collected. Genomic DNA and mRNA were extracted for PCR analysis and real-time RT-PCR respectively. All samples amplified a single DNA segment (between 800 and 900 pb) by PCR which corresponds to the alpha defensin 8 (defa 8), while 90% (27/30) amplified a segment expected 300-350 pb for ?-def alp and two additional bands of 800-900 pb evidenced by agarose gel electrophoresis. The detection of mRNAs by real time RT-PCR was performed based on Cycle threshold (Ct) analysis and Melting temperature (Tm) of the amplified products. The Cts for defa 8 products were found between 25.1 and 39.5 cycles with an average of 36.4 ± 1.9, and the Tm of the amplicons was located between 79.1 and 85.7 ºC. The Cts for ?-def alp were found between 22.7 and 36.8 cycles with an average of 32.4 ± 3.3 and the Tm of these amplified products ranged between 71 and 81.9 ºC. The expression levels were determined by relative quantification based on the comparative Ct method. The results showed increased levels of defa 8 and ?-def alp until the 3rd week of age, and a decline between the 4th and 6th week of age. The results demonstrate the genomic presence and expression of ? - and ?-defensins in the jejunum of alpacas younger than 45 days old

ESTANDARIZACIÓN DE LA TÉCNICA RT-PCR TIEMPO REAL PARA LA DETECCIÓN DEL VIRUS DE LA NECROSIS PANCREÁTICA INFECCIOSA (VNPI) EN TRUCHAS ARCO IRIS (Oncorhynchus mykiss).

The objective of this study was to standardize and validate the real-time RT-PCR technique for diagnosis of Infectious Pancreatic Necrosis virus (IPNV) in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) from Central Sierra of Peru. Samples of kidney and spleen (n=61) of rainbow trout with apparent clinical signs of IPN and from rainbow trout apparently healthy (n=60) were collected from two fish farms located in the central sierra. Before standardization of the real-time RT-PCR technique, the kidney and spleen samples of 121 rainbow trout were tested for antigen of IPNV by indirect immunofluorescent (IIF) test. In addition, kidney and spleen samples of 10 rainbow trout negative to IPNV by IIF were inoculated with a serial dilution of IPNV strain (from initial concentration of 103 PFU/ml). The RNA extraction of the 121 samples and of the 10 samples inoculated with IPNV strain, the cDNA and the real-time RT-PCR were carried out by commercial kits. The WB1 and WB2 primers were used to amplify a segment that codifies the protein VP2 of the Aquabirnavirus. A strain of IPNV as a positive control and Rotavirus A strain, Gumboro disease virus, bovine viral diarrhea virus, and parainfluenza-3 were used as negative controls. The 121 kidney and spleen samples were negative to IPNV by IIF test. The results of real time RT-PCR technique were evaluated considering the cycle threshold values of 31.7 and temperature melting of 80.4 °C of the amplicons. The real time RT-PCR technique was able to detect a concentration of 102 PFU/ml of IPNV in the kidney and spleen samples inoculated and the 121 of kidney and spleen samples were negative to IPNV. This technique had 100% of sensibility and specificity for detection of IPNV.El objetivo del presente estudio fue estandarizar y validar la técnica de RT-PCR tiempo real para el diagnóstico del virus de Necrosis Pancreática Infecciosa (VNPI) en truchas arco iris (Oncorhynchus mykiss) de la sierra central del Perú. Se colectaron muestras de riñón y bazo de truchas con aparentes signos clínicos de necrosis pancreática infecciosa (NPI) (n= 61) y truchas aparentemente sanas (n= 60) de dos piscigranjas del valle del Mantaro, Junín. Previo a la estandarización, las muestras fueron procesadas para la detección de antígeno del VNPI por inmunofluorescencia indirecta (IFI). Diez muestras de riñón y bazo de truchas negativas al VNPI por IFI fueron inoculados con una cepa del VNPI con título de 103 UFP/ml. La extracción del ácido nucleico del VNPI de las 121 muestras de riñón y bazo y de las 10 muestras de riñón y bazo inoculadas con el VNPI, la síntesis del ADN complementario y la RT-PCR tiempo real se realizaron utilizando kits comerciales. Se usaron los cebadores WB1 y WB2 correspondientes a un segmento del gen que codifica la proteína VP2 de los Aquabirnavirus. Una cepa del VNPI fue utilizada como control positivo y cepa de Rotavirus A, virus de Gumboro, virus de diarrea viral bovina, parainfluenza 3 como controles negativos. Las 121 muestras de riñón y bazo de las truchas arco iris resultaron negativas al VNPI por IFI. Los resultados de la RT-PCR en tiempo real fueron determinados en función a los valores del ciclo de amplificación que fue de 31.7 y temperatura de disociación de 80.4 °C de los productos del virus control positivo. La técnica de RT-PCR en tiempo real fue capaz de detectar hasta una concentración de 102 DI50UFP/ml del VNPI en las muestras de riñón y bazo inoculadas, mientras que las 121 muestras de truchas resultaron negativas al VNPI. La técnica de RT-PCR en tiempo real tuvo 100% de sensibilidad y especificidad en la detección del virus de la necrosis pancreática infecciosa en truchas arco iris

SEROPREVALENCIA DE ANTICUERPOS CONTRA SEROVARES DE Leptospira spp EN YEGUAS DE UN HARAS DE LA CIUDAD DE LIMA.

The seroprevalence of Leptospira spp in mares with abortion problems in a stud in Lima was determined. Two blood samples were collected from each mare within a 2-month period for the detection of antibodies against 12 Leptospira serovars using the microaglutination test. The serovars included in the study were icterohaemorraghiae, canicola, pomona, bratislava, georgia, tarassovi, autumnalis, pyrogenes, hardjo, ballum, australis and gryppotyphosa. Total prevalence of Leptospira spp was 96 and 100% in the first and second sampling respectively. Antibodies against serovars canicola, icterohaemorraghiae, pomona and georgia were more frequently detected during both period of sampling. No antibodies were found against serovars bratislava, tarassovi, autumnalis, hardjo, australis or gryppotyphosa. Sixty five percent of the animals were positive for three serovars simultaneously. The most frequent serovar was georgia (100%), which has not been reported as a pathogen for horses. The study showed the wide distribution of various Leptospira serovars in horses.Se determinó la prevalencia de Leptospira spp en yeguas de un haras de la ciudad de Lima con historial de aborto. Se tomaron 2 muestras de suero de todas las yeguas (n= 48) con un intervalo de 2 meses para la detección de anticuerpos contra 12 serovares de Leptospira mediante la prueba de microaglutinación. Los serovares fueron icterohaemorraghiae, canicola, pomona, bratislava, georgia, tarassovi, autumnalis, pyrogenes, hardjo, ballum, australis y gryppotyphosa. La prevalencia total de Leptospira spp fue de 96 y 100% en el primer y segundo muestreo, respectivamente. Anticuerpos contra los serovares canicola, icterohaemorraghiae, pomona y georgia fueron los más frecuentemente detectados durante los dos periodos de muestreos. No se encontró anticuerpos contra los serovares bratislava, tarassovi, autumnalis, hardjo, australis y gryppotyphosa. El 65% de los equinos fue positivo a anticuerpos contra tres serovares a la vez. El serovar de Leptospira con mayor frecuencia en el estudio fue georgia (100%), el cual no ha sido descrito en la literatura para equinos. El estudio demuestra la presencia ubicua y simultánea de distintos serovares de Leptospira en equinos