Cinética de expressão e localização de indutor de metaloproteínases (EMMPRIN) durante o desenvolvimento de lesão periapical induzida em camundongos

This study evaluated the kinetics of expression and location of EMMPRIN and the correlation of its expression with expression of MMPs -1, -2 and -9 and with alveolar bone loss during the development of experimentally induced periapical lesions in mice. A total of 40 C57BL/6 wild-type mice (WT) were used. The periapical lesions were induced in first lower molars. After 7, 14, 21 and 42 days, the animals were killed and the mandibles were removed. Mice without pulp exposure served as controls. Measurement of periapical lesions was performed in micro-computed tomography. mRNA levels of EMMPRIN, MMPs-1, -2, and -9 were detected by real time RT-PCR. Presence, localization, and expression of EMMPRIN and MMPs were evaluated by immunohistochemistry. Data were analyzed using ANOVA, Bonferroni and Spearman correlation tests with significance level of 5%. The results showed that periapical lesion area was significantly increased from 7 to 14 days (83%) and thereafter become stable. In the control group, EMMPRIN was strongly expressed in odontoblastic layer of the dental pulp. At 7, 14, 21 and 42 days there was intense immunostaining for EMMPRIN, MMPs -1, -2 and -9 in the adjacent region of apical foramen, where there was dense inflammatory infiltrate. These proteins were expressed in other parts of the periapical lesion occasionally. EMMPRIN, MMP-1, -2 and -9 were intensely expressed in mononuclear and polymorphonuclear inflammatory cells and discretely expressed in fibroblasts. In the periapical region, the EMMPRIN immunostaining was higher at 7, 14, 21 and 42 days compared with control. The expression of EMMPRIN gene was higher in control group compared with 7, 14, 21 and 42 days. The expression of MMP-1 gene increased at 7 days and stays elevated until 42 days. The mRNA levels of MMP -2 and -9 increased significantly at 14 days and returned to control level at 21 and 42 days. The EMMPRIN immunostaining was...Neste estudo foi avaliada a cinética de expressão, a localização do EMMPRIN e a correlação de sua expressão com a expressão das MMPs -1, -2 e -9 e com a perda óssea alveolar, durante o desenvolvimento da lesão periapical experimentalmente induzida em camundongos. Foram utilizados 40 camundongos wild-type (WT) da linhagem C57BL/6. As lesões periapicais foram induzidas nos 1os molares inferiores e após os períodos experimentais de 7, 14, 21 e 42 dias, os animais foram mortos e as mandíbulas foram removidas. Como controles foram usados 1os molares hígidos. A mensuração das lesões periapicais foi efetuada em microtomografia computadorizada. A expressão do RNA mensageiro (mRNA) do EMMPRIN, MMPs -1, -2, e -9 foi determinada por meio de RT-PCR em tempo real. A presença, a localização e a expressão do EMMPRIN e das MMPs nas lesões periapicais foram avaliadas por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por meio dos testes ANOVA, Bonferroni e correlação de Spearman com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a área da lesão periapical aumentou significativamente dos 7 para os 14 dias (83%) e a partir de então houve estabilização. No grupo controle, o EMMPRIN foi expresso fortemente nas células da camada odontoblástica da polpa dentária. Nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias, foram observadas imunomarcações intensas para o EMMPRIN, MMPs -1, -2 e -9 na região adjacente ao forame apical, onde havia infiltrado inflamatório denso e ocasionalmente em outras regiões da lesão periapical. O EMMPRIN, MMP-1, -2 e -9 apresentaram forte expressão em células inflamatórias mononucleares e polimorfonucleares e marcação discreta em fibroblastos. A imunoexpressão do EMMPRIN na região periapical foi maior nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias comparado ao controle. A expressão do gene EMMPRIN apresentou-se maior no grupo controle em relação aos 7, 14, 21 e 42 dias..

Uso da microtomografia computadorizada na análise da lesão periapical em animais de pequeno porte: revisão sistemática da literatura e estudo in vivo

Os objetivos do presente estudo foram: Publicação 1 - Realizar uma revisão sistemática sobre os parâmetros microtomográficos de aquisição, reconstrução e análise da lesão periapical (LP) em ratos e camundongos. Além disso, ilustrar o efeito da variação destes parâmetros (tamanho do voxel, beam hardening correction, smoothing, gray dataset, plano de orientação, região de interesse - ROI e threshold) em imagens microtomográficas de hemimandíbulas com LP induzida em molares inferiores de camundongos; e Publicação 2 - Avaliar a acurácia da microtomografia computadorizada (micro-CT) na análise de LP induzida em dentes de camundongos empregando como padrão ouro para comparação os valores obtidos por estereologia aplicada a dados histológicos. Na Publicação 1, foram pesquisados artigos que usaram a micro-CT para avaliar LP em ratos e camundongos de 2000 a janeiro de 2015 no PubMed. Para a ilustração dos efeitos da variação dos parâmetros de aquisição, reconstrução e análise da LP foram utilizadas mandíbulas de camundongos que tiveram LP induzida nos primeiros molares inferiores. Foram encontrados 21 artigos. Destes, 18 citaram algum parâmetro usado na aquisição, nenhum descreveu os parâmetros de reconstrução e 16 citaram alguns parâmetros de análise da LP. Nenhum artigo relatou o protocolo completo para aquisição, reconstrução e avaliação da LP. Nenhum artigo foi classificado como alta qualidade, 7 foram como moderada qualidade e 14 de baixa. A ilustração da variação dos parâmetros mostrou que o tamanho do voxel e os parâmetros de reconstrução podem interferir na nitidez da imagem. A orientação inadequada do plano altera o tamanho real da LP. Os ROIs não personalizados selecionam regiões além da LP e o personalizado seleciona apenas a lesão. O aumento dos valores do threshold aumenta a lesão. Concluiu-se que não há protocolo definido para a obtenção das imagens microtomográficas e análise da LP em ratos e camundongos, além dos parâmetros empregados não serem adequadamente explicados comprometendo a reprodutibilidade dos estudos. Na Publicação 2, a LP foi induzida nos primeiros molares inferiores de camundongos. Após 14 dias, os animais foram eutanasiados e as hemimandíbulas extraídas (n=28) e escaneadas em microtomógrafo. Para análise histológica da lesão periapical, as hemimandíbulas foram descalcificadas e submetidas ao processamento histotécnico. A área da lesão periapical da raiz distal dos molares foi mensurada em cortes histológicos empregando o programa Image J. A partir dos valores obtidos, foi calculado o volume da lesão periapical por meio do princípio de Cavalieri e, em seguida, foi aplicado o fator de correção ao volume obtido. Para calcular o volume de lesão periapical na micro-CT, as imagens microtomográficas no plano sagital foram anguladas seguindo a angulação das imagens obtidas nos cortes histológicos. O volume da lesão periapical foi mensurado empregando o programa CTAn (Skyscan). Todas as medidas foram realizadas por um avaliador previamente calibrado em dois momentos distintos. Os dados foram analisados por meio do teste t pareado e do coeficiente de correlação intraclasse (ICC) empregando nível de significância de 5%. Os resultados preliminares mostraram que não houve diferença estatisticamente significativa entre o volume da lesão periapical obtido por ambas as metodologias (p=0,642). O ICC (0,956) indicou alta concordância entre o volume da lesão periapical obtido histologicamente e por micro-CT. Com base nos resultados preliminares pode-se concluir que a micro-CT pode ser considerada uma metodologia precisa para a análise do volume da lesão periapical em camundongos.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Pesquisas em animais: uma reflexão bioética

Animal models are an important tool in scientific research. It is known that this practice must be based on bioethical principles in order to impose limits about pain and suffering, or for inspecting proceedings and research site. This study has as aim to evaluate and present current legislation ruling animal research in Brazil, comparing it with other countries, as well as fostering bioethical reflection about this issue. For this, we present current Brazilian legislation and we have carried out international literature review and discussion. The articles were searched in PubMed data base, using the key words “bioethics” and “animal welfare”. Nineteen articles from 1997 to 2013 were included. It was concluded the evident contribution of animal research for scientific research in several fields. It is morally relevant for humans, as rational beings, to secure humane treatment to animals contributing to research. The safest way to follow this path is establishing clear norms and studies well designed, involving society for assigning ethical norms. Thus, animal welfare would be guarantee.Los modelos animales son una herramienta importante en la investigación científica. Se sabe que esta basarse en principios bioéticos, sea para imponer límites sobre el dolor y el sufrimiento, o para procedimientos. Este estudio tuvo el objetivo de evaluar y presentar las normas vigentes que rigen la investigación con animales en Brasil, comparándolas con otros países, así como fomentar la reflexión bioética sobre este tema. Para eso, presentamos la legislación brasileña vigente y realizamos una revisión y discusión de la literatura internacional. La búsqueda de artículos fue realizada en la base de datos PubMed, usando las palabras-clave “bioética” y “bienestar del animal”. Se incluyeron diecinueve artículos publicados entre 1997 e 2013. Se concluyó que es evidente la contribución de los animales para la investigación científica de varias áreas. Cabe moralmente al ser humano, como ser racional, asegurar un tratamiento humanitario de los animales que contribuyen con la investigación. La forma más segura de seguir este camino es estableciendo leyes claras e investigaciones bien delineadas, que involucren la sociedad para designar normas éticas. Así, el bienestar de los animales estaría garantizado.Os modelos de experimentação animal constituem uma importante ferramenta na pesquisa científica. Sabe-se que essa prática deve estar baseada em princípios bioéticos, seja para impor limites de dor e sofrimento, como para fiscalizar instalações e procedimentos. Assim, o presente estudo teve por objetivo levantar e apresentar as normas atuais que regulamentam as pesquisas em animais no Brasil comprando-as a outros países, bem como fomentar reflexões bioéticas sobre esse mote. Para isso, apresentamos a legislação brasileira vigente e conduzimos uma revisão e discussão da literatura internacional. A busca de artigos foi realizada na base de dados PubMed, utilizando como palavra-chave os termos “bioética” e “bem-estar do animal”. Foram incluídos dezenove artigos, publicados entre os anos de 1997 a 2013. Concluiu-se que é evidente a contribuição dos animais para pesquisas científicas de diversas áreas. Cabe moralmente ao Homem, como ser racional, garantir um tratamento digno aos animais que contribuem para a pesquisa. A forma mais segura de seguir este caminho é estabelecendo leis claras e pesquisas bem delineadas, que envolvam a sociedade para designar normas éticas. Dessa forma, o bem-estar animal estaria garantido

Association of matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) with the expression of matrix metalloproteinases-1, -2 and -9 during periapical lesion development

Objective: To evaluate the expression of matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) and its correlation with the expression of matrix metalloproteinases (MMPs)-1, -2 and -9 during the development of periapical lesion in mice.Methods: Periapical lesions were induced in the lower first molars of mice and after 7, 14, 21 and 42 days the mandibles were removed. The periapical lesions were measured by micro-computed tomography. The expression of EMMPRIN, MMPs-1, -2, and -9 genes were determined by real-time RT-PCR. The location and expression of EMMPRIN and MMPs were evaluated by immunohistochemistry.Results: At 14 days, the periapical lesion area was higher than at 7 days. At 21 and 42 days no statistically significant bone loss was observed in comparison to 14 days. The control group showed discrete and occasional EMMPRIM, MMP-1, -2 and -9 immunostaining in the periodontal ligament fibroblasts. At 7, 14, 21 and 42 days intense immunoexpression was observed for EMMPRIN, MMPs-1, -2 and -9 in the region adjacent to the apical foramen. The EMMPRIN immunoexpression was higher at 7, 14, 21 and 42 days compared with the control. There was a positive correlation between gene expression of EMMPRIN and MMPs in the active phase of periapical lesion development.Conclusion: There is a high expression of EMMPRIM mainly by the inflammatory infiltrate in the region adjacent to the apical foramen during periapical lesion development. Furthermore, the positive correlation with MMP-1, -2, and -9 during the first days after periapical lesion induction indicates that EMMPRIM may be involved in the active phase of periapical lesions development. (C) 2014 Elsevier Ltd. All rights reserved.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Pesquisas em animais: uma reflexão bioética

Animal models are an important tool in scientific research. It is known that this practice must be based on bioethical principles in order to impose limits about pain and suffering, or for inspecting proceedings and research site. This study has as aim to evaluate and present current legislation ruling animal research in Brazil, comparing it with other countries, as well as fostering bioethical reflection about this issue. For this, we present current Brazilian legislation and we have carried out international literature review and discussion. The articles were searched in PubMed data base, using the key words "bioethics" and "animal welfare". Nineteen articles from 1997 to 2013 were included. It was concluded the evident contribution of animal research for scientific research in several fields. It is morally relevant for humans, as rational beings, to secure humane treatment to animals contributing to research. The safest way to follow this path is establishing clear norms and studies well designed, involving society for assigning ethical norms. Thus, animal welfare would be guarantee.Los modelos animales son una herramienta importante en la investigación científica. Se sabe que esta práctica debe basarse en principios bioéticos, sea para imponer límites sobre el dolor y el sufrimiento, o para inspeccionar las instalaciones y procedimientos. Este estudio tuvo el objetivo de evaluar y presentar las normas vigentes que rigen la investigación con animales en Brasil, comparándolas con otros países, así como fomentar la reflexión bioética sobre este tema. Para eso, presentamos la legislación brasileña vigente y realizamos una revisión y discusión de la literatura internacional. La búsqueda de artículos fue realizada en la base de datos PubMed, usando las palabras-clave "bioética" y "bienestar del animal". Se incluyeron diecinueve artículos publicados entre 1997 e 2013. Se concluyó que es evidente la contribución de los animales para la investigación científica de varias áreas. Cabe moralmente al ser humano, como ser racional, asegurar un tratamiento humanitario de los animales que contribuyen con la investigación. La forma más segura de seguir este camino es estableciendo leyes claras e investigaciones bien delineadas, que involucren la sociedad para designar normas éticas. Así, el bienestar de los animales estaría garantizado.Os modelos de experimentação animal constituem uma importante ferramenta na pesquisa científica. Sabe-se que essa prática deve estar baseada em princípios bioéticos, seja para impor limites de dor e sofrimento, como para fiscalizar instalações e procedimentos. Assim, o presente estudo teve por objetivo levantar e apresentar as normas atuais que regulamentam as pesquisas em animais no Brasil comprando-as a outros países, bem como fomentar reflexões bioéticas sobre esse mote. Para isso, apresentamos a legislação brasileira vigente e conduzimos uma revisão e discussão da literatura internacional. A busca de artigos foi realizada na base de dados PubMed, utilizando como palavra-chave os termos "bioética" e "bem-estar do animal". Foram incluídos dezenove artigos, publicados entre os anos de 1997 a 2013. Concluiu-se que é evidente a contribuição dos animais para pesquisas científicas de diversas áreas. Cabe moralmente ao Homem, como ser racional, garantir um tratamento digno aos animais que contribuem para a pesquisa. A forma mais segura de seguir este caminho é estabelecendo leis claras e pesquisas bem delineadas, que envolvam a sociedade para designar normas éticas. Dessa forma, o bem-estar animal estaria garantido

Effect of final irrigation protocols on microhardness and erosion of root canal dentin

The aim of this study was to evaluate the effect of final irrigation protocols (17% EDTA, BioPure MTAD, SmearClear, and QMiX) on microhardness and erosion of root canal dentin. Fifty roots were sectioned transversely at the cement-enamel junction and each root was sectioned horizontally into 4-mm-thick slices. The samples were divided into five groups (n=10) according to the final irrigation protocol: G1: distilled water (control group); G2: 17% EDTA; G3: BioPure MTAD; G4: SmearClear; and G5: QMiX. The dentin microhardness was then measured with a load of 25 g for 10 s. Initially, the reference microhardness values were obtained for the samples without any etching. The same samples were then submitted to the final irrigation protocols. A new measure was realized and the difference between before and after the procedures was the dentin microhardness reduction. In sequence, the specimens were submitted to SEM analysis to verify the dentinal erosion. The Kruskal Wallis and Dunn tests (α=5%) were used to compare the results. The dentin microhardness decreased for all final irrigation protocols. There was no significant difference between groups 2, 3, 4, and 5 (P>0.05), but this groups presented significant dentin microhardness reduction than G1 (P<0.05). In G2, occurred the highest incidence of dentinal erosion (P<0.05). 17% EDTA, BioPure MTAD, SmearClear, and QMiX promoted significant dentin microhardness reduction. © 2013 Wiley Periodicals, Inc