Simulations lagrangiennes d'écoulements de poudre pour inhalation dans la tuyère de l'impacteur en cascade Andersen

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Impact virologique et pharmacologique de la complexation de la ribavirine aux cyclodextrines sur un modèle animal d'encéphalite rougeoleuse

La ribavirine est un agent antiviral à large spectre efficace in vitro contre de nombreux virus à ARN dont certains sont responsables d'encéphalites. In vivo la mauvaise diffusion de cet analogue nucléosidique au niveau de la barrière hémato-encéphalique, limite son efficacité dans le traitement des encéphalites virales. Des études antérieures ont montré la capacité des cyclodextrines natives à former des complexes d inclusion avec la ribavirine et l amélioration de l activité antivirale de la ribavirine in vitro lorsque celle-ci est complexée à l alpha- ou la bêta-cyclodextrine. Le bénéfice de cette complexation in vivo, a été évalué sur un modèle murin d'encéphalite utilisant une souche neuroadaptée du virus de la rougeole (CAM/RB) inoculée par voie intracrânienne chez la souris CBA/ca âgée de 3 à 4 semaines. Le développement de l infection a été contrôlé par détermination de la charge virale dans le cerveau des souris, à l aide d une RT-PCR quantitative en méthode TaqMan amplifiant le gène N du virus de la rougeole et d une gamme étalon externe. Lorsque les souris sont traitées par voie intrapéritonéale par 40 mg/kg de ribavirine complexée à l alpha-cyclodextrine, la morbidité et la mortalité liées à l encéphalite rougeoleuse sont diminuées par rapport à l administration de ribavirine libre et la charge virale diminue de façon significative dans le cerveau au jour J6. La complexation à la bêta-cyclodextrine n apporte pas de bénéfice comparé à la ribavirine libre. Ces données suggèrent que l alpha-cyclodextrine améliore in vivo le passage de la ribavirine au travers de la barrière hémato-encéphalique. La cinétique de la ribavirine dans le cerveau des souris traitées par le complexe ribavirine/alpha-cyclodextrine a été étudiée de 30 minutes à 48 heures après l administration de doses uniques ou répétées de ribavirine libre ou complexée à différents dosages. La ribavirine a été purifiée par une technique d extraction en phase solide et quantifiée par chromatographie liquide haute performance après élaboration d'une gamme de calibration ex vivo. La quantité de ribavirine retrouvée dans le cerveau est plus élevée lorsque la molécule est injectée sous forme de complexe chez la souris saine ou infectée. Ces données illustrent l'amélioration de survie observée au préalable et ce modèle d'étude a permis de mettre en évidence l'impact virologique et pharmacologique de la complexation d'une molécule antivirale à l'alpha-cyclodextrine.The objective of this work was to study the antiviral activity of ribavirin on measles encephalitis infection when using cyclodextrins as carriers. Ribavirin is a water-soluble synthetic nucleoside with broad spectrum antiviral properties, but it is ineffective against major viral encephalitis because of a failure to cross the blood brain barrier. The use of cyclic oligosaccharides can promote the activity of many drugs and the benefit of the association of ribavirin with alpha- or beta-cyclodextrine has already been demonstrated in vitro. The antiviral activity of the ribavirin/cyclodextrin complexes has been evaluated in vivo using an experimental model based on intracranial injection of the rodent adapted CAM/RB strain of measles virus in CBA/ca mice. Measles encephalitis development was monitored daily by viral load determination in mice brain. Intraperitoneal administration of the complex ribavirin/alpha-cyclodextrin (40 mg/kg of ribavirin) decreased the morbidity and the mortality of measles virus infected mice compared to free ribavirin treatment and the viral load in the brain is reduced at day 6 post-inoculation. At the opposite beta-cyclodextrin did not enhanced ribavirin in vivo antiviral activity. The role of alpha-cyclodextrin thus required to be defined and notably the hypothesis of ribavirin permeation enhancement through the blood brain barrier. Ribavirin specific extraction from brain tissue was developed, based on a solid phase extraction. It was quantified by high performance liquid chromatography at different time points after intraperitoneal injection of single or multiple doses of free ribavirin or of the complex ribavirin/alpha-cyclodextrin. Whatever the tested doses, quantity of ribavirin in the brain is significantly higher when the drug is injected as a complex with alpha-cyclodextrin, in healthy or measles virus-infected mice. So pharmacokinetic of ribavirin in brain tissue explains the advantage of the complex ribavirin/alpha-cyclodextrin over ribavirin in protecting mice from intracerebral infection with measles virus and confirms the interest of cyclodextrin complexes for human central nervous system diseases treatment.NANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocSudocFranceF

Les médicaments non utilisés et l'action humanitaire du pharmacien en Lorraine

Il y a en Lorraine une dizaine d'associations humanitaires qui récupèrent les médicaments non utilisés (M.N.U.) issus de la filière Cyclamed. Ces médicaments sont triés et font l'objet de dons à de nombreux hôpitaux et dispensaires dans les pays en voie de développement. A partir de janvier 2009, il ne sera plus possible à ces associations d'utiliser ces médicaments à des fins de solidarité. A la demande de l'Organisation Mondiale de la Santé, de l'Ordre National des pharmaciens, et même de certains pharmaciens responsables d'associations humanitaires, la valorisation et le don des M.N.U. seront très prochainement interdits en France. Cette décision suscite des réactions diverses et passionnées chez les pharmaciens lorrains impliqués dans l'aide humanitaire. Cette thèse se propose de dresser un bilan des actions qui ont été menées par les pharmaciens de notre région et de recueillir leurs sentiments face à leurs expériences passées en matière de dons de médicaments. Quel est le devenir des associations humanitaires "du médicaments" ? En effet, pour palier le manque de médicaments qui découlera inévitablement de cette nouvelle législation, le gouvernement français propose de subventionner ces associations pour leur permettre d'acheter des médicaments essentiels. Cette solution sera-t-ell satisfaisante ?NANCY1-SCD Pharmacie-Odontologie (543952101) / SudocSudocFranceF

Les préparations magistrales en pharmacie dans les années 1950-60

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Complexation de triterpènes pentacycliques par des cyclodextrines (caractérisations physicochimiques et activités biologiques)

Le manque de thérapies innovantes en chimiothérapie humaine incite la communauté scientifique à s'intéresser à de nouvelles sources de composés bioactifs. Nous pouvons citer les métabolites secondaires de plantes, auxquels appartiennent les acides hydroxy pentacycliques triterpénoiques (AHPTs) et plus particulièrement les Acides Ursolique (AU), Oléanolique (AO) et Bétulinique (AB). Ces molécules font l'objet de nombreuses études qui tendent à démontrer leurs propriétés : anti-infectieuses, anticancéreuses, antiprolifératives, anti-inflammatoires, hépatoprotectrices. Le principal obstacle à leur utilisation à des fins thérapeutiques, reste l'insolubilité de ces AHPTs dans l'eau. L'objectif de ce travail a donc été d'augmenter leur hydrosolubilité. Dans un premier temps, en accord avec les recommandations et/ou normes existantes, nous avons démontré que le spectre d'activité antibactérienne de l'AU et de l'AO se limitait aux bactéries à Gram positif. Aucun AHPT n'a montré d'activité antifongique. Seul l'AB a montré une activité intéressante sur le Cytomégalovirus humain (hCMV) ; aucune activité antivirale n'ayant été retrouvée sur le Poliovirus. Enfin, l'AB, mais encore plus l'AU ont montré une activité anticancéreuse à l'encontre de cellules modèles de leucémie myéloïde chronique (LMC). Dans un deuxième temps, nous avons procédé à la fabrication et à l'étude de complexes entre les AHPTs et des cyclodextrines. Nous avons retenu la gamma-cyclodextrine (gamma-CD), qui présentait l'avantage de complexer les 3 AHPTs avec une constante de formation moyenne à élevée . Ces complexes AHPTs :gamma-CD ont été caractérisés en utilisant diverses techniques : chromatographiques, thermiques et spectrométriques. Nous avons conclu à l'obtention de complexes d'inclusion qui ont permis d'augmenter la solubilité des AHPTs. Dans une dernière partie, nous avons évalué les activités biologiques des complexes AHPTs : gamma-CD. Les résultats montrent que les complexes AU : gamma-CD et AO : gamma-CD restent actifs à l'encontre des bactéries à Gram positif (mais avec une efficacité plus faible) ; tandis que le complexe AB : gamma-CD se révèle être actif sur certaines bactéries. Le complexe AB : gamma-CD, et de façon surprenante le complexe AU : gamma-CD présentent une activité antivirale à l'encontre du hCMV. Enfin, la diminution de la cytotoxicité liée à la complexation des AHPTs accroit l'intérêt des molécules d'AU et d'AB sur les cellules de LMCThe lack of innovative therapies in human chemotherapy incites the scientific community to be interested in new sources of bioactive compounds. We can quote the secondary metabolites of plants, to which belong hydroxy pentacyclic triterpene acids (HPTAs) and more particularly Ursolic (UA), Oleanolic (OA) and Betulinic Acids(BA). These molecules are the subjetc of numerous studies which tend to demonstrate their properties: anti-infective, anticancer, antiproliferatives, anti-inflammatory and hepatoprotectrive. The main obstacle to their use in therapeutic purposes stays the insolubility of these AHPTs in the water. Thus the objective of this work was to increase their hydrosolubility. At first, in agreement with the recommendations and/or the existing standards, we demonstrated that the antibacterial spectra of UA and OA are limited to Gram-positive bacteria. No HPTA showed antifungal activity. Only the BA showed an interesting antiviral activity on human Cytomegalovirus (hCMV); no antiviral activity was on Poliovirus. Finally, the BA, but even more UA showed an anticancer activity against cellular model of chronic myeloid leukemia (CML). Secondly, we proceeded to the manufacturing and to the study of complexes between HPTAs and cyclodextrines. We retained gamma-cyclodextrine (gamma-CD), which presented the advantage to complex the 3 AHPTs with a constant of "average" to "raised". These HPTAs:gamma-CD complexes were characterized by using diverse techniques: chromatographic, thermal and spectrometric. We concluded in the obtaining of inclusion complexes which allowed increasing the solubility of the HPTAs. In a last part, we estimated the biological activities of the HPTAs:gamma-CD complexes. The results show that the UA:gamma-CD and OA:gamma-CD complexes remain active against Gram-positive bacteria (but with a weaker efficiency); whereas the BA:gamma-CD complex shows to be active on certain bacteria. The BA:gamma-CD complex, and in a surprising way the UA:gamma-CD complex presents an antiviral activity against the hCMV. Finally, the decrease of the cytotoxicity linked to the complexation of the HPTAs believes the interest of UA and of BA on CML cellsMETZ-SCD (574632105) / SudocNANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocNANCY2-Bibliotheque electronique (543959901) / SudocNANCY-INPL-Bib. électronique (545479901) / SudocSudocFranceF

Desulfovibrio spp. dans la maladie parodontale (Interactions avec les cellules épithéliales KB et activité de l'amoxicilline libre ou complexée sur ces formes extracellulaires et intracellulaires)

Il a été suggéré que les Desulfovibrio, qui sont des bactéries anaérobies sulfato-réductrices, pourraient être impliqués dans les parodontites. Nous avons évalué le pouvoir invasif de Desulfovibrio vis-à-vis de cellules épithéliales et leur capacité à induire la production de cytokines par ces cellules. Nous avons montré que Desulfovibrio desulfuricans et Desulfovibrio fairfieldensis sont capables d'envahir et de se multiplier dans les cellules épithéliales buccales (cellules KB). La localisation intracytoplasmique de ces deux bactéries a été confirmée par microscopie confocale et électronique à transmission. L'internalisation de ces souches était dépendante de la polymérisation des microtubules mais pas de celle de l'actine. L'infection avec Desulfovibrio était responsable d'une augmentation de la production d'IL-6 et d'IL-8 par les cellules KB. La capacité de D. desulfuricans et de D. fairfieldensis à survivre dans les cellules épithéliales et à moduler leur réponse immunitaire pourrait contribuer au développement des maladies parodontales. Desulfovibrio ainsi que d'autres parodontopathogènes peuvent produire des ß-lactamases et sont capables d'envahir les cellules épithéliales. Il a été suggéré que l'hydrolyse de l'amoxicilline pourrait être évitée grâce à l'utilisation d'un complexe amoxicilline-ß-cyclodextrine (ßCD) et que la diffusion intracellulaire d'agents antimicrobiens pourrait être améliorée après complexation avec des ßCD. Un complexe stable amoxicilline-ßCD, caractérisé après analyse spectrale et thermique, n'a ni amélioré l'activité de l'amoxicilline vis-à-vis de souches produisant des ß-lactamases ni augmenté la diffusion intracellulaire de ce composé.It has been suggested that Desulfovibrio, which are sulfate-reducing anaerobic bacteria, may be involved in periodontitis. We investigated the capacity of Desulfovibrio to invade epithelial cells and induce cytokine secretion from these cells. We showed that Desulfovibrio desulfuricans and Desulfovibrio fairfieldensis were able to invade and to multiply within oral epithelial cells (KB cells). Intracytoplasmic location of both bacteria was confirmed by confocal laser scanning and transmission microscopy. Invasion of these strains involved microtubule but not microfilament polymerization. Infection by Desulfovibrio resulted in an increase of the production of IL-6 and IL-8 by KB cells. The ability of D. desulfuricans and D. fairfieldensis to survive within oral epithelial cells and to modulate the epithelial immune response may contribute to the initiation and progression of periodontal diseases. Desulfovibrio as well as other periodontopathogens may produce ß-lactamases and have the capacity to invade epithelial cells. It has been suggested that the hydrolysis of amoxicillin might be prevented by using an amoxicillin-ß-cyclodextrin (ßCD) complex and that intracellular diffusion of antimicrobial agents might be enhanced after complexation with ßCDs. A stable [1:1] amoxicillin-ßCD complex, characterized by spectroscopic and thermal analysis, did neither improve the activity of amoxicillin against ß-lactamase producing strains nor enhance the intracellular diffusion of this compound.NANCY1-Bib. numérique (543959902) / SudocSudocFranceF

Preparation and Physicochemical Characterization of Amoxicillin β-cyclodextrin Complexes

Amoxicillin (AMOX), a penicillin A, belongs to the β-lactam family It is usually the drug of choice within the class because it is better absorbed, following oral administration, than other β-lactam antibiotics. Its β-lactamase degradation might be prevented by using a molecular [AMOX:β-CD] complex. The aim of this work was to prepare complexes using two methods and then characterize interactions between AMOX and the native β-CD. The extent of complexation in solution has been evaluated by high-performance liquid chromatography (HPLC), nuclear magnetic resonance (NMR), and 2D rotating-frame Overhauser enhancement spectroscopy (2D ROESY). Mass changes (TG), calorimetric effects (DSC), and mass spectrometry (MS) were determined on the same sample under identical conditions using the Skimmer coupling system. Skimmer and infrared spectroscopy (FT-IR) were used to characterize the solid state of the binary system. Complexation of AMOX with β-CD was proven by FT-IR, NMR, DSC, and HPLC. The 2D ROESY spectra did not show any dipolar proton interaction of the AMOX with cyclodextrin. The 1:1 stoichiometry of the complex was obtained by HPLC. The stability constant for AMOX with β-CD was determined to be 1,878 M−1. In the [AMOX:β-CD] complex, the phenyl group is included inside the β-CD, and the ionized carboxyl group on the penam ring forms hydrogen bonds with the secondary hydroxyl groups of another β-CD to keep the complex stable. Preparation methods allowed exactly the same complex