Obtención de un preparado del componente C1 (q,r,s) del sistema complemento Obtaining a preparation of C1 component (q,r,s) of the complement system

Se obtuvo un preparado concentrado del componente C1 (q, r, s) del sistema completo en forma inactiva por un método de precipitación, libre de contaminación con los restantes componentes iniciales de la vía clásica, el C2 y el C4. Este preparado se mantuvo estable a 2 °C y en los ensayos funcionales fue capaz de fijarse al complejo EAC4, activar los componentes C2 y C4 para formar la convertasa del C3, y provocar la lisis de estas células. La reacción de hemólisis fue activada por el C2 e inhibida por el Cl inhibidor, lo que indica la especificidad del C1 obtenido.Este pudiera emplearse para lograr un antisuero específico, para la obtención de los subcomponentes C1q, C1r y C1s, o para la estandarización de métodos funcionales de estudiar el C1, el C2 o el C1 inhibidorA concentrated preparation of component C1 (q,r,s) of the complement system in an inactive form was obtained by a precipitation method, free of contamination with the rest of the initial components of the classical pathway, that is, C2 and C4. This preparation remained stable at 2°C and in the functional assays, it was able to bind to complex EAC4, to activate components C2 and C4 to form convertase C3 and cause lysis of these cells. Hemolysis reaction was activated by C2 and inhibited by C1 inhibitor, which indicates the specificity of the obtained C1. This preparation can be used to attain a specific antiserum to obtain subcomponents C1q, C1r and C1s or to standardize the functional methods of study of C1, C2 and C1 inhibito

Lectina de unión a manosa: actividad biológica y significado Manosse-binding lectin: biological activity and significance

La lectina de unión a la manosa (MBL) es una colectina que se sintetiza en el hígado y es secretada al torrente sanguíneo, la cual es capaz de unirse con estructuras repetidas de azúcares presentes en una amplia variedad de bacterias y otros microorganismos promoviendo su eliminación mediante la activación del complemento a través de serín proteasas asociadas. A las deficiencias de MBL se les considera como un importante factor de riesgo de infecciones en niños y en individuos inmunosuprimidos. Se discute la evidencia de que la MBL contribuye de forma importante a la inmunidad innata con el incremento de la susceptibilidad a determinadas enfermedades o la incidencia en el curso de estas. Estudios preliminares del empleo de terapias sustitutivas con MBL han arrojado resultados prometedores, los que deben ofrecer evidencias acerca del significado fisiológico de esta proteínaManosse-binding lectin (MBL) is a colectin that is synthesized in the liver and is secreted to the the blood stream. It is capable of binding to other repeated structures of sugars present in a wide variety of bacteria and other microorganisms, promoting their elimination by the activation of the complement through associated serin proteases. The MBL deficiencies are considered as an important risk factor for infections in children and immunosuppressed individuals. It is discussed the evidence that MBL contributes in an important way to the innate immunity with the increase of susceptibility to certain diseases or the incidence on their course. Preliminary studies on the use of replacement therapies with MBL have yielded encouraging results, which should offer evidences about the physiological significance of this protei

Aplicación del método inmunocitoquímico de la fosfatasa alcalina anti-fosfatasa alcalina para la clasificación inmunológica de las leucemias mieloides agudas Application of the alkaline phosphatase anti-alkaline phosphatase immunocytochemical method for the immunological classification of acute myeloid leukemias

Se realizó el inmunofenotipaje celular de 30 pacientes con el diagnóstico de leucemia mieloide aguda por el método inmunocitoquímico fosfatasa alcalina anti-fosfatasa alcalina (APAAP) introducido en nuestro laboratorio. Los marcadores estudiados fueron: CD3, CD13, CD15, CD19, CD33 y CD41. Para el estudio se utilizaron extendidos de médula ósea o sangre periférica fijados en acetona pura e incubados con el respectivo anticuerpo monoclonal. Posteriormente se añadió la inmunoglobulina anti ratón obtenida en conejo ( Linking ) y por último, el complejo APAAP. Los períodos de incubación fueron de 30 minutos y se realizaron lavados con solución amortiguadora entre cada uno de los pasos. La lectura de las láminas se realizó en microscopio óptico y se consideró positivo cuando el número de células marcadas era mayor o igual a 20 %. De los pacientes estudiados, el 93,3 % y el 90 %, respectivamente, expresaron antígenos pan mieloides CD13 y CD33; 16 de ellos expresaron el CD15 (53,3 %); 3 el CD19 (10 %) y 2 el CD41 (6,6 %). Se concluyó que el método APAAP es rápido y de bajo costo y puede ser aplicado con confiabilidad en la clasificación inmunológica de las leucemias mieloides agudas<br>The cellular immunophenotyping of 30 patients with the diagnosis of acute myeloid leukemia was conducted by the alkaline phosphatase anti-alkaline phosphatase immunocytochemical method (APAAP) introduced in our laboratory. The markers studied were: CD3, CD13, CD15, CD19, CD33 y CD41. Specimens of bone marrow or peripheral blood fixed in pure acetone and incubated with the respective monoclonal antibody were used for the study. Later on, the anti-mouse immunoglobulin obtained in rabbit (Linking) was added and, finally, the APAAP complex. The incubation periods were of 30 minutes and lavages with buffer solution were carried out between one step and the other. The reading of the slides was performed on the optical microscope and it was considered positive when the number of marked cells was higher than or equal to 20 %. Of the studied patients, 93.3 % and 90 %, respectively, expressed panmyeloid antigens CD13 and CD33; 16 of them expressed the CD15 (53.3 %); 3 the CD19 (10 %); and 2 the CD41 (6.6 %). It was concluded that the APAAP method is rapid and inexpensive and that it may be reliably applied in the immunological classification of the acute myeloid leukemia

Alteraciones de la solubilización e inhibición de la precipitación de inmunocomplejos en la anemia drepanocítica Alterations of the solubilization and inhibition of the precipitation of immunocomplexes in sickle cell anemia

Se estudiaron los fenómenos de solubilización e inhibición de la precipitación de inmunocomplejos en un grupo de 39 pacientes con anemia drepanocítica en crisis hepática (13) y en estado basal (26), utilizando como modelo el complejo125 I-toxoide tetánico/anti-toxoide tetánico. La inhibición de la precipitación estuvo disminuida en la crisis hepática y en el estado basal, con valores normales de la actividad hemolítica de la vía clásica y de los niveles séricos del C4, mientras que la disminución de la solubilización en la crisis hepática estuvo relacionada con una disminución de la actividad hemolítica de la vía alternativa, la actividad hemolítica del factor B y los niveles del componente C3, y con un aumento de los inmunocomplejos circulantes. Nuestros resultados sugieren la posible utilidad de estos mecanismos para evaluar otras funciones del complemento, no detectadas mediante una determinación de la actividad hemolítica, como medida de la función de las vías clásica y alternativaThe phenomena of solubilization and inhibition of the precipitation of immunocomplexes were studied in a group of 39 patients with sickle cell anemia in hepatic crisis (13) and in basal state (26), using as a model the tetanus toxoid/anti-tetanus toxoid complex125 I. The inhibition of the precipitation was reduced in the hepatic crisis and in the basal state with normal values of the haemolytic activity of the classical pathway and of the serum levels of C4, whereas the reduction of the solubilization in the hepatic crisis was related to a lowering of the haemolytic activity of the alternative pathway, the haemolytic activity of factor B and the levels of component C3, and to an increase of the circulating immunocomplexes. Our results suggest the possible usefulness of these mechanisms to evaluate other functions of the complement not detected by a determination of the haemolytic activity, as a measure of the function of..the classical and alternative pathway

Preparación de un conjugado peroxidasa-anti IgG humana (cadena ) en conejo Preparation of a peroxidase-anti human IgG conjugate (chain g) in rabbit

Se preparó un conjugado con peroxidasa a partir de los anticuerpos específicos aislados de un suero de conejo anti cadenas g de la IgG humana. Los anticuerpos específicos se aislaron por cromatografía de afinidad, y el conjugado se preparó por el método de oxidación con peryodato. El conjugado obtenido presentó una relación molar IgG/peroxidasa de 1,07, un valor de RZ de 0,33 y resultó evaluado satisfactoriamente en cuanto a su especificidad y reactividad en los ensayos inmunoenzimáticos realizadosA peroxidase conjugate was prepared starting from the specific antibodies isolated from an anti-chain rabbit serum and from human IgG. The specific antibodies were isolated by affinity chromatography and the conjugate was prepared by the method of oxidation with periodate. The conjugate obtained presented a molar IgG/peroxidase relation of 1.07, a RZ value of 0.33 and it was satisfactorily evaluated as regards its specificity and reactivity in the immunoenzimatic assays carried ou

Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA): una herramienta importante en el diagnóstico de las vasculitis Antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA): an important tool for the diagnosis of vasculitis

Se determinó la presencia de anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA) específicos para la proteinaza 3 (cANCA) y la mieloperoxidasa (pANCA) en 166 pacientes, 45 con vasculitis no precisadas y el resto con diferentes enfermedades asociadas con procesos inflamatorios, fenómenos autoinmune e infecciones, mediante inmunofluorescencia indirecta. Se detectó la presencia de cANCA en 12 casos con vasculitis, y pANCA en 8 pacientes con enfermedades autoinmunes y en 14 con anemia drepanocítica. Nuestros resultados sugieren la posibilidad de cierto grado de participación de estos autoanticuerpos en el daño del endotelio vascular que se observa en estas enfermedades, debido a la activación de los neutrófilosThe presence of antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA) specific to proteinase 3(cANCA) and myeloperoxidase (pANCA) were determined by indirect immunofluoresce test in 166 patients, 45 of which presented with undetermined vasculitis and the rest with different diseases associated with inflammatory processes, autoimmune phenomena and infections. cANCA were detected in 12 cases with vasculitis whereas pANCA were observed in 8 patients with autoimmune diseases and in 14 with sickle cell anemia. Our results suggest the possibility of some level of involvement of these autoantibodies in the vascular endothelium damage that is observed in these diseases due to neutrophil activatio

Preparación de un conjugado anti IGG de ratón-peroxidasa en cabra Preparation of an anti-mouse IgG peroxidase conjugate in goat

<abstract language="eng">Se preparó un conjugado con peroxidasa a partir de los anticuerpos específicos aislados de un antisuero de cabra anti IgG de ratón (molécula completa). Los anticuerpos se aislaron por cromatografía de afinidad y el conjugado se preparó por el método de oxidación con peryodato. El conjugado obtenido presentó una relación molar IgG/peroxidasa de 1,31, un valor de RZ de 0,285 y resultó evaluado satisfactoriamente en cuanto a su especificidad y reactividad en los ensayos inmunoenzimáticos realizado

Purificación de IgG1, IgG2 e IgG3 mediante cromatografía de afinidad a partir de intacglobín Purification of IgG1, IgG2 and IgG3 by affinity chromatography starting from Intacglobin

Se describe un método de purificación de las subclases IgG1, IgG2 e IgG3 a partir de Intacglobin mediante cromatografía de afinidad con el empleo de proteína A Sepharose y la aplicación de un gradiente lineal de pH. Se detectó la presencia de IgG1, IgG2 e IgG3 en las fracciones eluidas mediante doble inmunodifusión e inmunoelectroforesis, utilizando sueros comerciales anti IgG, anti IgG1, anti IgG2 y anti IgG3. El procedimiento desarrollado se caracterizó por su sencillez, elevada resolución y la relativa pureza de las subclases aisladas. Se logró un rendimiento total del 53,7 %, lo que indica la eficiencia del método<br>A method for the purification of IgG1, IgG2, and IgG3 subclasses starting from Intacglobin by affinity chromatography with the use of protein A Sepharose and the application of a lineal gradient of pH is described. IgG1, IgG2 and IgG3 were detected in the eluted fractions by doble immunodifussion and immunoelectrophoresis by using anti IgG, anti IgG1, anti IgG2 and anti IgG3 commercial sera. The procedure developed was characterized by its simplicity, high resolution and the relative purity of the isolated subclasses. A total yield of 53.7 % was attained, which demonstrates the efficiency of this metho

Estudio de las subpoblaciones linfocitarias T en pacientes pediátricos con anomalías tronco-conales cardiovasculares Study of the T-lymphocyte subpopulations in pediatric patients with conal-truncal cardiovascular abnormalities

Se estudiaron en 20 pacientes pediátricos con anomalías tronco-conales cardiovasculares las subpoblaciones de linfocitos T mediante el método de la fosfatasa alcalina antifosfatasa alcalina con los anticuerpos monoclonales específicos anti-CD3, anti-CD4 y anti-CD8. Se tomó como grupo control a 25 individuos supuestamente sanos. Se obtuvieron diferencias significativas para las subpoblaciones T CD3 y CD4 positivas (p < 0,05). El déficit inmunológico celular encontrado en estos pacientes indica la necesidad de incluir en el tratamiento de los mismos a inmunomoduladores para prevenir las complicaciones sépticas<br>The T-lymphocyte subpopulations were studied in 20 pediatric patients with conal-truncal cardiovascular abnormalities by the alkaline phosphatase alkaline antiphosphatase method with the anti-CD3, anti-CD4, and anti-CD8 specific monoclonal antibodies. 25 apparently sound individuals were selected as the control group. Significant differences were obtained for the CD3- and CD4-positive T cell subpopulations (p< 0.05). The cellular immunological deficit found in these patients shows the need to include immunomodulators in their treatment to prevent septic complication

Posible participación del sistema complemento en el desarrollo de manifestaciones autoinmunes en la leucemia linfocítica crónica Possible role of the complement system in the development of autoimmune manifestations in chronic lymphocytic leukemias

Se efectuó la medición de la actividad de la vía clásica, alternativa, factor B, factor D, así como la cuantificación de C1q, C3 y C4 del sistema complemento en 27 pacientes con leucemia linfocítica crónica de tipo B (LLC-B) CD5+ estadificados en 2 grupos: 12 pacientes en fase poco avanzada de la enfermedad (estadios 0, I, II) y 15 en fase avanzada (estadios III, IV). Se demostró una disminución de la actividad de la vía clásica y de la concentración de C1q y C4 en 10 pacientes en fase avanzada, 7 de los cuales tenían asociada una anemia hemolítica autoinmune (AHAI); en el grupo en fase poco avanzada de la enfermedad no se demostraron deficiencias de complemento ni manifestaciones autoinmunes. Los datos obtenidos sugieren la posible participación del sistema complemento en el mantenimiento de la tolerancia inmunológica, cuya ruptura pudiera provocar la síntesis de anticuerpos antieritrocitarios, y por lo tanto, la anemia hemolítica que se asocia en determinados pacientes en fase avanzada de la enfermedadThe measurement of the activity of the classical pathway, the alternative pathway, factor B, factor D, as well as the quantification of Clq, C3 and C4 of the complement system were made in 27 patients with type B chronic lymphocytic leukemia (CLL-B) CD5+, classified into 2 groups: 12 patients at little advanced stage of the disease (stages 0, I, II) and 15 patients at advanced stage (stages III, IV). It was proved that the activity of the classical pathway and the concentration of Clq and C4 lowered in 10 patients at advanced stage, 7 of them also had autoimmune hemolytic anemia. Neither complement deficiencies nor autoimmune manifestations were shown in the group of patients at little advanced stage of the disease. Collected data indicates the possible involvement of the complement system in keeping the immune tolerance, the rupture of which may cause the synthesis of anti-erythrocyte antibodies and thus, the hemolytic anemia that occurs in certain patients at advanced stage of the diseas