Fotosensibilizadores fotodinámicos naturales y potenciales aplicaciones terapéuticas

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2017.El desarrollo del presente trabajo consistió en el estudio químico de las partes aéreas de Heterophyllaea lycioides (Rusby) Sandwith (Rubeaceae), especie fototóxica endémica de la región andina de Bolivia y sur de Perú. La aplicación de sucesivas técnicas cromatográficas y el empleo de diferentes técnicas espectroscópicas (IR, UV-Vis, RMN, HRMS, DC, entre otros) permitieron el aislamiento y elucidación estructural de 7 antraquinonas (AQs). Tres resultaron ser nuevas estructuras para esta familia de compuestos: 5-clorosoranjidiol (5clsor), 7-clorobisoranjidiol (7-clbis) y lycionina (lyc). La estructura de las dos nuevas AQs cloradas fue confirmada por semisíntesis a partir de soranjidiol y bisoranjidiol. Las cuatro restantes resultaron ser estructuras conocidas, por haberse aislado previamente de otra especie del mismo género (H. pustulata): soranjidiol (sor), bisoranjidiol (bis), pustulina y heterofilina. Cabe destacar que por primera vez se informa de la presencia de AQs halogenadas en la familia de las Rubiáceas, hecho que resulta novedoso teniendo en consideración la amplia diversidad de géneros y especies que presenta esta familia. Las nuevas AQs fueron estudiadas a fin de determinar sus propiedades fotosensibilizadoras, es decir, como generadores de especies reactivas del oxígeno (ERO) cuando son activadas por acción de la luz. Se demostró que las tres nuevas estructuras generan ERO mediante los mecanismos fotodinámicos Tipo I (generación de radical anión superóxido, O2¯) y II (producción de 1O2), destacándose 7-clbis como mayor productor de O2¯ y 5-clsor como mayor productor de 1O2. Por lo tanto, podemos afirmar que las nuevas AQs aisladas de H. lycioides contribuyen efectivamente a la fototoxicidad que se le atribuye a esta especie. En lo relativo a la actividad biológica de las AQ aisladas, se evaluó por un lado, la fotoinactivación de una cepa clínica de Staphylococcus aureus meticilino sensible y por otro lado, la fotoinactivación de - XVI - Leishmania amazonensis. Referente a la fotoinactivación bacteriana, se comprobó que 5-clsor dio la mejor respuesta al ser sometido al tratamiento por irradiación con luz actínica, al reducir en dos logaritmos las unidades formadoras de colonias respecto del tratamiento en oscuridad. Los resultados de la fotoinactivación de Leishmania amazonensis empleando LED azul mostraron que sor, bis y 5-clsor reducen la actividad metabólica por encima del 90 %. Los resultados preliminares de actividad biológica realizados, indican que varias de las AQs aisladas de H. lycioides, 5-clsor, sor y bis, se comportan como agentes fotosensibilizadores, con potencialidad para su aplicación en Terapia Fotodinámica Antimicrobiana.Cabrera, José Luis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Ciencias Farmacéuticas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina.Dimmer, Jesica Ayelen. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.Nuñez Montoya, Susana Carolina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Ciencias Farmacéuticas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina.Cabanillas, Ana María de Los Angeles. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.Argüello, Gerardo Aníbal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Fisicoquímica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Físico-Química de Córdoba; Argentina.Arena, Mario Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biotecnología Farmacéutica y Alimentaria; Argentina

Fotoinactivación de Leishmania spp. por antraquinonas naturales con proyección en terapia fotodinámica antiparasitaria

La leishmaniasis es una enfermedad provocada por protozoarios del género Leishmania e integran el grupo de enfermedades desatendidas (ED) en el mundo y con prevalencia en los países más pobres. En Argentina, entre 2013 y 2017 se diagnosticaron 1300 casos de leishmaniasis, donde el 87 % correspondieron a leishmaniasis cutánea (LC). Si bien, el mayor número de casos confirmados están localizados en el norte de nuestro país (área endémica), la dispersión del vector ha provocado reportes de casos en áreas no endémicas, como la provincia de Córdoba.La LC se manifiesta como una lesión ulcerosa con bordes elevados luego de la picadura del insecto vector. La falta de tratamiento o la falla terapéutica pueden producir la evolución hacia otras manifestaciones clínicas más graves. Los tratamientos que se emplean actualmente presentan numerosas desventajas, por lo cual resulta indispensable la búsqueda de alternativas terapéuticas. La terapia fotodinámica antiparasitaria (TFAp) es una terapia localizada que consiste en irradiar sólo la zona afectada, por lo que resulta más segura y fácil de administrar respecto de una administración sistémica. Produce la muerte del parásito mediante la generación de especies reactivas del oxígeno que dañan sobre diferentes biomoléculas. Se ha demostrado que antraquinonas (AQs) naturales reducen la viabilidad celular de promastigotas de L. amazonensis a bajas concentraciones y con bajas dosis de irradiación. Este plan de trabajo estudiará el efecto de dichas AQs sobre la forma promastigote y amastigote de otras especies de Leishmania, profundizando sobre su mecanismo de acción. El presente proyecto se inscribe en la necesidad que desde organismos estatales se desarrollen nuevas terapias para ED.Fil: Dimmer, Jesica Ayelen. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Núñez Montoya, Susana Carolina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Rivarola, Walter Denis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Departamento de Fisiología Humana y Física Biomedica. Cátedra de Física Biomedica; ArgentinaJornadas virtuales de Becarios y Becarias de la Secretaría de Ciencia y Técnica de la Universidad Nacional de Córdoba: Desafíos y perspectivas en la producción de conocimiento en contextos de crisisCórdobaArgentinaUniversidad Nacional de Córdoba. Secretaría de Ciencia y TécnicaBecarixs SeCy

Avances en el estudio químico de raíces de Heterophyllaea lycioides

Se inició el estudio químico de Heterophyllaea lycioides (Rusby) Sandwith (Rubiaceae), extrayendo los principales metabolitos secundarios presentes en el extracto de Acetato de Etilo (AcOEt) obtenido de las raíces. Mediante particiones liquido-liquido se realizó una primera purificación del extracto de AcOEt, obteniéndose una fracción enriquecida en antraquinonas (AQs). Posteriormente, esta fracción se sometió a cromatografía en columna (CC), lo cual permitió separar siete derivados antraquinónicos, purificados por cromatografía en capa delgada preparativa (TLCp) y caracterizados por co-cromatografía en TLC y espectrofotometría UV-Visible. Entre ellos, dos resultaron ser AQs aisladas previamente del género Heterophyllaea, Damnacanthol y Bisoranjidiol. Las restantes se encuentran en proceso de dilucidación de su estructura. Hasta el momento los datos de espectrofotometría permiten deducir que se trataría de derivados que no han sido obtenidos previamente de H. lycioides y H. pustulata; por tanto, serían estructuras aisladas por primera vez en el género Heterophyllaea y particularmente, en la especie H. lycioides.Fil: Escatena Perez, Franco Maximiliano. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; ArgentinaFil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Cabrera, Jose Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Núñez Montoya, Susana Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaXXVII Jornadas de Jóvenes InvestigadoresSao CarlosBrasilAsociación de Universidades Grupo MontevideoUniversidade Federal de São Carlo

Photosensitizing anthraquinones from Heterophyllaea lycioides (Rubiaceae)

Seven anthraquinones were isolated from aerial parts of Heterophyllaea lycioides (Rusby) Sandwith (Rubiaceae), including three derivatives that have not been described before: a hetero-bianthraquinone identified as (R)-2-hydroxymethyl-2´methyl-1,1´,6,6´-tetrahydroxy-5,5´ bianthraquinone (lycionine), and two mono-chlorinated derivatives related to soranjidiol. One of them is a homo-bianthraquinone: (R)-7-chloro-2,2´-dimethyl-1,1´,6,6´-tetrahydroxy-5,5´ bianthraquinone (7-chlorobisoranjidiol), whereas the second halogenated derivative corresponds to a monomeric structure: 5-chloro-1,6-dihydroxy-2-methyl anthraquinone (5-chlorosoranjidiol). The four known compounds were already isolated from another species of this genus, H. pustulata, and they were identified as 5,5´-bisoranjidiol, soranjidiol, pustuline and heterophylline. Structural elucidation was performed by means of an extensive spectroscopic analysis, including 1D and 2D NMR data as well as by HRMS analysis. Chemical structures of 7-chlorobisoranjidiol and 5-chlorosoranjidiol were confirmed by their synthesis from 5,5´-bisoranjidiol and soranjidiol, respectively. Type I photosensitizing properties (superoxide anion radical generation, O2?¯) were assessed by using the nitroblue tetrazolium assay. When lycionine and chlorinated derivatives were irradiated, they enhanced the O2?¯ production with respect to the control; 7-chlorobisoranjidiol stood out by generating an increase of 20%, whereas the other anthraquinones only produced a slight increase of 7%.Fil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia. Catedra de Farmacognosia; ArgentinaFil: Núñez Montoya, Susana Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia. Catedra de Farmacognosia; ArgentinaFil: Mendoza, Caterine S.. Universidad de San Francisco Xavier de Chuquisaca. Facultad de Ciencias Químico Farmacéuticas y Bioquímicas. Departamento de Farmacia; BoliviaFil: Cabrera, Jose Luis. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia. Catedra de Farmacognosia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentin

Towards effective natural anthraquinones to mediate antimicrobial photodynamic therapy of cutaneous leishmaniasis

Cutaneous leishmaniasis (CL) is an important tropical neglected disease withbroad geographical dispersion. The lack of effective drugs has raised an urgent need to improveCL treatment, and antimicrobial photodynamic therapy (APDT) has been investigated as a newstrategy to face it with positive outcomes. Natural compounds have emerged as promisingphotosensitizers (PSs), but their use in vivo remains unexplored.Purpose: In this work, we investigated the potential of three natural anthraquinones (AQs) onCL induced by Leishmania amazonensis in BALB/c mice.Study Design/Methods: Animals were infected and randomly divided into four groups: CG(control, non-treated group), G5ClSor-gL (treated with 5-chlorosoranjidiol and green LED,520±10 nm), GSor-bL and GBisor-bL (treated with soranjidiol and bisoranjidiol, respectively,exposed to violet-blue LED, 410±10 nm). All AQs were assayed at 10 μM and LEDs delivereda radiant exposure of 45 J/cm2 with an irradiance of 50 mW/cm2. We assessed the parasiteburden in real time for three consecutive days. Lesion evolution and pain score were assessedover 3 weeks after a single APDT session.Results: G5ClSor-gL was able to sustain low levels of parasite burden over time. Besides,GSor-bL showed a smaller lesion area than the control group, inhibiting the disease progression.Conclusion: Taken together, our data demonstrate that monoAQs are promising compounds forpursuing the best protocol for treating CL and helping to face this serious health problem.Studies involving host-pathogen interaction as well as monoAQ-mediated PDT immuneresponse are also encouraged.Fil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Cabral, Fernanda V.. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; BrasilFil: Núñez Montoya, Susana Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Ribeiro, Martha S.. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; Brasi

Tratamiento con combinaciones de Anfotericina B y Clomipramina de macrófagos J774 infectados con amastigotas de Leishmania amazonensis

La leishmaniasis, una enfermedad infecciosa causada por protozoarios del género Leishmania. Anfotericina-B (ANF), fármaco utilizado en el tratamiento, es a menudo tóxico para los pacientes. La búsqueda de nuevos antiparasitarios consiste en identificar blancos moleculares en el parásito, que estén ausentes en el huésped. La tripanotiona reductasa es una enzima exclusiva del orden Kinetoplastide, por lo que le confiere utilidad como blanco molecular. Clomipramina (CLO) es buen inhibidor de esta enzima. En el presente trabajo analizamos el tratamiento combinado de ANF y CLO sobre macrófagos infectados con amastigotes de L. amazonensis. En primer lugar, se realizó el ensayo de citotoxicidad en macrófagos de la línea celular J774. A continuación, se infectaron 2x105 macrófagos/pocillo con una proporción 1:5 de parásitos. Luego del tratamiento con las concentraciones de CLO y ANF y sus combinaciones no citotóxicas, se incubaron 72 h. Finalmente, se realizó la tinción de Giemsa para determinar la tasa de infección: número de macrófagos infectados x cantidad de amastigotas por macrófago.El ensayo de citotoxicidad determinó que por debajo de las combinaciones de 1,5 μg/mL ANF-0,75 μg/mL CLO y 0,7 μg/mL ANF-1,55 μg/mL CLO se asegura una viabilidad celular de los macrófagos por encima del 75 %.La tasa de infección de los macrófagos no tratados de 275 ± 32,5 % se redujo significativamente a 97,5 ± 25,6 % con la combinación ANF-CLO (1 μg/ml + 0,12 μg/ml). Dicha combinación resultó ser estadísticamente significativa respecto a los tratamientos sólo con ANF (1 μg/ml): 169,1 ± 14,9 % y CLO (0,12 μg/ml): 162 ± 21 %.Los resultados observados en la combinación de ambos fármacos podrían ser la consecuencia de que los mecanismos de acción complementarios de CLO y ANF estarían potenciando el efecto leishmanicida, logrando mayor letalidad que la monoterapia y sin efectos tóxicos evidentes sobre el huésped.Fil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Juarez, Marcos. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Departamento de Fisiología Humana y Física Biomedica. Cátedra de Física Biomedica; ArgentinaFil: Mendoza Aguilar, Javier Ivan. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Virología Dr. J. M. Vanella; ArgentinaFil: Konigheim, Brenda Salome. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Instituto de Virología Dr. J. M. Vanella; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rivarola, Hector Walter. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Departamento de Fisiología Humana y Física Biomedica; ArgentinaXXV Congreso de la Federación Latinoamericana de Parasitología FLAP 2019. V Congreso Nacional de Microbiología y ParasitologíaPanamaPanamáFederación Latinoamericana de Parasitologí

Amino acid content and acetylcholinesterase inhibition of Huperzia saururus infusion and decoction

Huperzia saururus (Lam.) Trevis. (Lycopodiaceae), an autochthonous plant species in Argentina, is used as a memory improver in traditional medicine. It was studied for this reason and the purified alkaloid extract did show significant activity on learning and memory. The species is mostly consumed in the form of infusions and decoctions. Objectives: To evaluate the activity of the H. saururus infusion and decoction as inhibitors of acetylcholinesterase (AChE) and to determine the amino acid content in both extracts. Material and methods: Infusion and decoction were purified by ionic exchange chromatography and analyzed by high-performance liquid chromatography HPLC-UV, and the AChE inhibition of these extracts was evaluated by using the Ellman method. Results: Both infusion and decoction exerted strong AChE inhibitory activities (IC50 ¼ 7.2 0.4 and 22.7 5.6 mg/mL, respectively). Among nine amino acids, arginine (Arg) was identified in a concentration greater than 9 mg/100 g of dried aerial parts in both extracts. Discussion and conclusion: This high content of Arg could be considered a contributing factor to the activity on memory previously demonstrated for the H. saururus alkaloid extract, since Arg is implicated indirectly in mnemonic processes as a precursor in nitric oxide synthesis. Thus, the central effect of H. saururus could involve two different mechanisms, the cholinergic mechanism and the nitric oxide pathway.Fil: Vallejo, Mariana Guadalupe. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (p); ArgentinaFil: Dimmer, Jesica Ayelen. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (p); ArgentinaFil: Ortega, María Gabriela. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (p); ArgentinaFil: Cabrera, Jose Luis. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (p); ArgentinaFil: Agnese, Alicia Mariel. Universidad Nacional de Cordoba. Facultad de Ciencias Quimicas. Departamento de Farmacia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal (p); Argentin

Actividad leishmanicida de nuevo derivado de carvacrol

Las leishmaniasis son enfermedades complejas provocadas por parásitos protozoarios del género Leishmania e integran el grupo de enfermedades infecciosas desatendidas. Hasta el momento los tratamientos empleados presentan desventajas como alta toxicidad, altos costos, falta de eficacia, entre otras. El desarrollo de nuevos derivados semisintéticos a partir de compuestos naturales que presentan actividad leishmanicida, se postula como una estrategia para incrementar la actividad antiparasitaria. Carvacrol (CV) es un componente mayoritario presente en los aceites esenciales, que ha demostrado efectividad en diferentes especies de Leishmania spp. En el presente trabajo se evaluó la actividad de CV y su derivado, carvacrol-n-propanol (CV-nPro) sobre promastigotes de Leishmania amazonensis.El derivado se obtuvo a partir de la conjugación del grupo hidroxilo libre del CV con el alcohol alifático n-propanol. La síntesis del derivado se realizó en dos etapas consecutivas, la primera involucra la reacción de CV con N,N-carbonildiimidazol bajo atmósfera de nitrógeno en diclorometano y la segunda, la reacción del intermediario formado con el alcohol n-propanol. Se preparó una suspensión de 3x106 parásitos/mL y se realizó el tratamiento de los mismos con soluciones de concentraciones crecientes de CV y CV-nPro en un rango desde 2 μg/mL hasta 120 μg/mL. A continuación, se incubaron a 25ºC durante 72 h y luego se determinó la viabilidad celular empleando la técnica colorimétrica del MTT. Los resultados obtenidos fueron referidos al control negativo (sin tratamiento) y a partir de ellos se determinó la concentración efectiva 50 (CE50). Se incluyó como control positivo a Anfotericina B. Se determinó que la CE50 de CV-nPro 28 μg/mL, disminuyó aproximadamente un 43% respecto a la CE50 de CV 49 μg/mL, incrementando la efectividad del tratamiento. La modificación estructural sobre el CV permitió mejorar su eficacia sobre el modelo utilizado, demostrando ser un potencial candidato para continuar sus estudios en esta enfermedad.Fil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Juárez, Marco. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Departamento de Fisiología Humana y Física Biomedica; ArgentinaFil: Clemente, Camila Mara. Universidad Nacional de Villa María. Instituto Académico Pedagógico de Ciencias Básicas y Aplicadas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Inda, Ayelén. Universidad Nacional de Villa María. Instituto Académico Pedagógico de Ciencias Básicas y Aplicadas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ravetti, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones y Transferencia de Villa María. Universidad Nacional de Villa María. Centro de Investigaciones y Transferencia de Villa María; ArgentinaFil: Rivarola, Hector Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaXXV Congreso de la Federación Latinoamericana de Parasitología FLAP 2019PanamáPanamáFederación Latinoamericana de Parasitologí

Preclinical investigation of Methylene Blue-mediated Antimicrobial Photodynamic Therapy on Leishmania parasites using Real-Time Bioluminescence

Cutaneous leishmaniasis (CL) is a neglected disease that promotes destructive lesions. Difficulties in treatment are related to accessibility of drugs, resistance and toxicity. Antimicrobial photodynamic therapy (APDT) has been emerging as a promising treatment for CL. In this work, we evaluated methylene blue (MB)-mediated APDT (MB-APDT) on Leishmania amazonensis in vitro and in vivo by bioluminescence technique. In vitro, MB-APDT was performed using a red LED (λ = 660 ± 11 nm, 100 mW cm−2) and MB (100 µm) at different light doses. In vivo, mice were infected and 4 weeks later, randomly divided into three groups: control, APDT 1 (single session) and APDT 2 (two sessions of MB-APDT). MB was used at 100 µm and energy dose was established at 150 J cm−2. Parasite burden, lesion size and pain were evaluated weekly for 4 weeks. In vitro, lethal dose for 90% parasite inactivation was achieved at 48.8 J cm−2. In vivo, although APDT 1 and APDT 2 groups have showed similar parasite burden after 4 weeks, two sessions were clinically better, especially considering the inflammatory process associated to CL. Our findings reinforce MB-APDT as a cost-effective treatment to combat CL.Fil: Cabral, Fernanda V.. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; BrasilFil: Sabino, Caetano P.. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; BrasilFil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Sauter, Ismael P.. Universidade do Sao Paulo. Instituto de Ciencias Biomedicas; BrasilFil: Cortez, Mauro J.. Universidade do Sao Paulo. Instituto de Ciencias Biomedicas; BrasilFil: Simoes Ribeiro, Martha. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; Brasi

Natural anthraquinones as novel photosentizers for antiparasitic photodynamic inactivation

Cutaneous leishmaniasis (CL) is a vector-borne disease caused by obligate protist parasites from the genus Leishmania. The potential toxicity as well as the increased resistance of standard treatments has encouraged the development of new therapeutical strategies. Photodynamic inactivation (PDI) combines the use of a photosensitizer and light to generate reactive oxygen species and kill cells, including microorganisms. Vegetal kingdom constitutes an important source of bioactive compounds that deserve to be investigated in the search of naturally occurring drugs with leishmanicidal activity. The purpose of this study was to test the antiparasitic activity of PDI (ApPDI) of five natural anthraquinones (AQs) obtained from Heterophyllaea lycioides (Rusby) Sandwith (Rubiacae). To support our results, effect of AQ mediated-PDI on parasite´s morphology and AQ uptake were studied. Cytotoxicity on fibroblasts was also evaluated. Two monomers, soranjidiol (Sor) and 5-chlorosoranjidiol (5-ClSor) plus three bi-anthraquinones (bi-AQs), bisoranjidiol (Bisor), 7-chlorobisoranjidiol (7-ClBisor) and Lycionine (Lyc) were selected for this study. Recombinant L. amazonensis promastigote strain expressing luciferase was subjected to AQs and LED treatment. Following irradiation with variable light parameters, cell viability was quantified by bioluminescence. Alteration on parasite´s morphology was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). In addition, we verified the AQ uptake in Leishmania cells by fluorescence and their toxicity on fibroblasts by using MTT assay. Bisor, Sor and 5-ClSor exhibited photodynamic effect on L. amazonensis. SEM showed that promastigotes treated with Bisor-mediated PDI exhibited a significant alteration in shape and size. Sor and 5-ClSor presented higher uptake levels than bi-AQs (Bisor, Lyc and 7-ClBisor). Finally, Sor and Bisor presented the lowest toxic activity against fibroblasts. Conclusion: Taking together, our results indicate that Sor presents the highest specificity towards Leishmania cells with no toxicity on fibroblasts.Fil: Dimmer, Jesica Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Cabral, Fernanda V.. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; BrasilFil: Sabino, Caetano Padial. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; Brasil. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Silva, Camila Ramos. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; BrasilFil: Núñez Montoya, Susana Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Cabrera, Jose Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; ArgentinaFil: Ribeiro, Martha S.. Comissao Nacional de Energia Nuclear. Centro de Lasers e Aplicacoes. Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares; Brasi