Diversity of luteoviruses infecting faba bean (Vicia faba L) in Morocco, and their detection by the polymerase chain reaction

When surveying faba bean (Vicia faba L) for viruses in Morocco, members of the luteovirus group were found to be economically important. In order to further identify them, a number of faba bean samples showing symptoms indicative of luteovirus infection were serologically tested using polyclonal antisera for bean leafroll virus (BLRV), beet western yellows virus (BWYV), and subterranean clover red leaf virus (SCRLV), and two monoclonal antibodies which discriminate between BWYV and BLRV. Several serological reaction patterns were obtained which pointed towards a large variation in the luteovirus isolates studied. None of these isolates could be clearly identified as one of the luteoviruses known to infect legumes, although a number of them behaved like BWYV serologically. The potential of the polymerase chain reaction in detecting these luteoviruses was investigated, and a set of oligonucleotide primers was designed which specifically amplified a 535 bp fragment of the coat protein gene of known luteoviruses and of all the Moroccan isolates tested. In nucleic acid hybridization tests, the field isolates showed homology in nucleotide sequence among the Moroccan isolates and with BLRV, but not wih BWYV. In polyacrylamide gel electrophoresis, a purified Moroccan isolate was found to be different from BLRV and BWYV in coat-protein migration.Diversité des lutéovirus infectant la fève (Vicia faba L) au Maroc et leur détection par la réaction d'amplification enzymatique. Un inventaire des virus de la fève au Maroc a démontré l'incidence économique des lutéovirus sur cette plante. Dans le but de mieux caractériser ces lutéovirus, des échantillons de fève, présentant des symptômes typiques des lutéovirus, ont été testés sérologiquement en utilisant des antisérums polyclonaux contre le virus de l'enroulement de la fève (BLRV), le virus de la jaunisse occidentale de la betterave (BWYV), le virus de la feuille rouge de trèfle souterrain (SCRL V) et deux anticorps monoclonaux discriminant le BLRV du BWYV. La diversité des profils de réaction sérologique obtenus montre qu'il existe une grande variabilité au sein des isolats étudiés. Aucun d'entre eux n'a pu être strictement assimilé aux lutéovirus infectant la famille des légumineuses, bien que certains isolats se soient comportés sérologiquement comme le BWYV. Le potentiel de la réaction d'amplification enzymatique (PCR) pour la détection de ces lutéovirus a été exploré. Nous avons amplifié spécifiquement un fragment de 535 pb du gène codant pour la protéine de capside, aussi bien chez des lutéovirus connus que chez les isolats marocains testés. Lors des tests d'hybridation moléculaire avec une sonde correspondant au gène de la protéine de capside de différents isolats, des homologies de séquences nucléotidiques ont été montrées, d'une part entre les isolats marocains, et d'autre part entre les isolats marocains et le BLRV. Aucune homologie n'a été trouvée entre les isolats marocains et le BWYV. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide a montré que la migration de la protéine de capside d'un isolat marocain purifié est différente de celles des protéines de capside du BLRV et du BWYV

Human proximal tubule epithelial cells cultured on hollow fibers: living membranes that actively transport organic cations

The bioartificial kidney (BAK) aims at improving dialysis by developing ‘living membranes’ for cells-aided removal of uremic metabolites. Here, unique human conditionally immortalized proximal tubule epithelial cell (ciPTEC) monolayers were cultured on biofunctionalized MicroPES (polyethersulfone) hollow fiber membranes (HFM) and functionally tested using microfluidics. Tight monolayer formation was demonstrated by abundant zonula occludens-1 (ZO-1) protein expression along the tight junctions of matured ciPTEC on HFM. A clear barrier function of the monolayer was confirmed by limited diffusion of FITC-inulin. The activity of the organic cation transporter 2 (OCT2) in ciPTEC was evaluated in real-time using a perfusion system by confocal microscopy using 4-(4-(dimethylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide (ASP+) as a fluorescent substrate. Initial ASP+ uptake was inhibited by a cationic uremic metabolites mixture and by the histamine H2-receptor antagonist, cimetidine. In conclusion, a ‘living membrane’ of renal epithelial cells on MicroPES HFM with demonstrated active organic cation transport was successfully established as a first step in BAK engineering