Validación de un kit comercial (diagnóstico del síndrome de Gilbert) para la determinación del polimorfismo ugt1a1*28 (intolerancia al irinotecan): evaluación de su implementación en la práctica asistencial.

El irinotecán es un medicamento utilizado en primera línea del cáncer colorrectal metastásico (habitualmente en combinación con fluorouracilo). La FDA incluyó en el año 2017 como biomarcador genómico pronóstico de toxicidad las variantes en el gen UGT1A1. Los pacientes portadores en heterocigosis del alelo UGT1A1*1/*28 y en homocigosis UGT1A1*28/28 presentan una actividad reducida de la enzima. Es por ello que se recomienda la determinación de las variantes de la familia UGT1A1 en pacientes en tratamiento con irinotecán. Existe asociación entre pacientes con el alelo UGT1A1*28 y disminución de la expresión de UGT1A1 y, en consecuencia, disminución de la glucuronidación de SN-38. La disminución de UGT1A1 se asocia con riesgo elevado (aproximadamente 4 veces) de toxicidad severa con irinotecán, incluyendo diarrea y neutropenia. De ahí la necesidad de implementar la utilización de un kit comercial para su uso en la práctica clínica asistencial garantizando la veracidad de los resultados. Para ello, se ha realizado una validación-verificación de un kit comercial inicialmente destinado para el diagnóstico de Síndrome de Gilbert para su aplicación en el estudio genético del polimorfismo UGT1A1*28: intolerancia al irinotecán y sus metabolitos. Asimismo, se han evaluado estadísticamente los resultados de la implementación del uso de dicho kit en la práctica asistencial y la frecuencia del polimorfismo en heterocigosis y homocigosis en la población a estudio durante un periodo de unos 4 meses desde su uso para diagnóstico en muestras de pacientes.Los resultados obtenidos han tenido una concordancia del 100% (intra e inter-laboratorio) y permiten asegurar que el Kit EXPERTEAM está validado y verificado y puede emplearse para el estudio de la presencia del polimorfismo A(TA)7TAA en el gen UGT1A1. Además, de los 79 pacientes que han conformado el estudio, se ha concluido que el 18% presentan el polimorfismo heterocigoto, el 37% homocigotos, y el 45% eran normales. <br /

Análisis de aneuploidías por las técnicas de QF-PCR y cariotipo en los años 2012-13 en el HU Miguel Servet de Zaragoza

Objetivos: El objetivo de este estudio es poner de manifiesto si la QF-PCR, técnica de diagnóstico prenatal para las aneuploidías de reciente puesta a punto es realmente eficaz y presenta alguna ventaja a la hora de poder compararla con el cariotipo que es la técnica de rutina en nuestro laboratorio Material y métodos: Los datos provienen del Laboratorio de Genética del Hospital Universitario Miguel Servet, durante los años 2012 y 2013. Las muestras provienen de toda la Comunidad Autónoma de Aragón. Se recogen muestras desde enero del 2012 hasta el presente. Mediante el software PRISCA V4.0. El punto de corte utilizado es 1/250 para trisomía 21 y 1/100 para la trisomía 18. Se hace un análisis de las variables de la base de datos. Distribución de patología cromosómica por sexo fetal, por indicación diagnóstica. Conclusión: Cariotipo y QF-PCR detectan de la misma forma anomalías cromosómicas, por tanto los criterios de elección tienen que ser distintos de los límites de detección de aneuploidias. Sin embargo QF-PCR es más sencilla y rápida aunque más cara. Para confirmar las patologías encontradas se debe realizar un FIS

Evaluación de la implicación de los alelos premutado (55-200 CGGs) y gris (45-54 CGGs) del gen FMR1 en el autismo

El gen FMR1 codifica para la proteína FMRP, que regula la traducción proteica en las neuronas, por lo que está implicada en el desarrollo y la maduración neuronales. En su región UTR5’ contiene una repetición del triplete Citosina-Guanina-Citosina (CGG) cuya longitud permite definir cuatro alelos: normal (200 CGGs). Esta última provoca el silenciamiento génico por metilación de las citosinas de la expansión. En cambio, en los portadores del alelo gris y/o premutado se ha observado un aumento de la transcripción de este gen pero una disminución en la cantidad de proteína. Esta falta de FMRP provoca una pérdida de función y plasticidad neuronales, lo que genera una serie de fenotipos neuropsiquiátricos, entre los que se podrían encontrar los Trastornos del Espectro Autista (TEA).Por tanto, es interesante evaluar la posible implicación de ambos alelos en este contexto clínico. Para ello, se trabajará en una base de datos seudoanonimizada creada en la Sección de Genética Clínica del HUMS en el periodo del 2014 al 2022 (8 años) en la que se han recogido la longitud de las expansiones determinada por TP-PCR y electroforesis capilar de los pacientes a los que se les ha solicitado el estudio genético del gen FMR1.Los resultados obtenidos parecen apoyar la implicación sobre todo del alelo gris en la clínica de los TEA, con una frecuencia de 50,8% de esta en los portadores de los estos alelos. Todavía se desconoce el mecanismo fisiopatológico, pero probablemente se deba a una desregulación de varios sistemas neuronales a la vez. Esto demuestra la importancia de la función de la FMRP.<br /

Estudio retrospectivo de la premutación en el gen FMR1 en población residente en Aragón. Posibilidades de repercusión en la clínica.

El gen FMR1 en estado mutado provoca el síndrome X Frágil, pero en su estado premutado produce un amplio espectro de trastornos. Durante años se pensó que los portadores de la premutación no presentaban ninguna manifestación clínica, tan sólo el riesgo de transmitir el síndrome X Frágil a sus descendientes. Pero en los últimos años los estudios realizados han demostrado claros riesgos de salud asociados con las expansiones FMR1 en el rango de la premutación. Las alteraciones asociadas aceptadas actualmente y basadas en estudios científicos son: problemas emocionales y psicológicos, insuficiencia ovárica prematura (FXPOI) y síndrome de temblor-ataxia (FXTAS). Aunque todavía se siguen describiendo fenotipos asociados a la premutación. Estos trastornos existen en un subgrupo de los individuos con premutación, con trayectorias y síntomas específicos asociados. También se han descrito varias dificultades médicas, emocionales y cognitivas que ocurren con mayor frecuencia entre las personas con premutación de lo que se esperaría en la población general, aunque la asociación de la premutación con muchas de estas condiciones está peor establecida. Los objetivos que nos planteamos en este trabajo son determinar la frecuencia de la premutación entre las muestras analizadas para X Frágil en Aragón, precisar la proporción en adultos y en niños, también la distribución en hombres y mujeres, averiguar la prevalencia de fallo ovárico precoz en mujeres premutadas, así como de FXTAS en el total de pacientes premutados, y estudiar la posibilidad de otras manifestaciones clínicas asociadas. También queremos estudiar la frecuencia de la mutación C677T de MTHFR en las muestras con premutación. Y por último, determinar el número de interrupciones AGG que se localizan en las mujeres premutadas, ya que pueden intervenir en la probabilidad de expansión del alelo en la siguiente generación

Hereditary primary lateral sclerosis and progressive nonfluent aphasia

Objective: to report a kindred with an association between hereditary primary lateral sclerosis (PLS) and progressive nonfluent aphasia. Patients and methods: six members from a kindred with 15 affected individuals spanning three generations, suffered from spasticity without muscle atrophy or fasciculation, starting in the lower limbs and spreading to the upper limbs and bulbar musculature, followed by effortful speech, nonfluent language and dementia, in 5 deceased members. Disease onset was during the sixth decade of life, or later. Cerebellar ataxia was the inaugural manifestation in two patients, and parkinsonism, in another. Results: neuropathological examination in two patients demonstrated degeneration of lateral corticospinal tracts in the spinal cord, without loss of spinal, brainstem, or cerebral motor neurons. Greater loss of corticospinal fibers at sacral and lumbar, rather than at cervical or medullary levels was demonstrated, supporting a central axonal dying-back pathogenic mechanism. Marked reduction of myelin and nerve fibers in the frontal lobes was also present. Argyrophilic grain disease and primary age-related tauopathy were found in one case each, and considered incidental findings. Genetic testing, including exome sequencing aimed at PLS, ataxia, hereditary spastic paraplegia, and frontotemporal lobe dementia, triplet-repeated primed polymerase chain reaction aimed at dominant spinocerebellar ataxias, and massive sequencing of the human genome, yielded negative results. Conclusion: a central distal axonopathy affecting the corticospinal tract, exerted a pathogenic role in the dominantly inherited PLS-progressive nonfluent aphasia association, described herein. Further molecular studies are needed to identify the causative mutation in this disease

Episodic Vestibulocerebellar Ataxia Associated with a CACNA1G Missense Variant

Episodic vestibulocerebellar ataxias are rare diseases, frequently linked to mutations in different ion channels. Our objective in this work was to describe a kindred with episodic vestibular dysfunction and ataxia, associated with a novel CACNA1G variant. Two individuals from successive generations developed episodes of transient dizziness, gait unsteadiness, a sensation of fall triggered by head movements, headache, and cheek numbness. These were suppressed by carbamazepine (CBZ) administration in the proband, although acetazolamide and topiramate worsened instability, and amitriptyline and flunarizine did not prevent headache spells. On examination, the horizontal head impulse test (HIT) yielded saccadic responses bilaterally and was accompanied by cerebellar signs. Two additional family members were asymptomatic, with normal neurological examinations. Reduced vestibulo-ocular reflex gain values, overt and covert saccades were shown by video-assisted HIT in affected subjects. Hearing acuity was normal. Whole-exome sequencing demonstrated the heterozygous CACNA1G missense variant c.6958G&#x3e;T (p.Gly2320Cys) in symptomatic individuals. It was absent in 1 unaffected member (not tested in the other asymptomatic individual) and should be considered likely pathogenic. CACNA1G encodes for the pore-forming, α1G subunit of the T-type voltage-gated calcium channel (VGCC), in which currents are transient owing to fast inactivation, and tiny, due to small conductance. Mutations in CACNA1G cause generalized absence epilepsy and adult-onset, dominantly inherited, spinocerebellar ataxia type 42. In this kindred, the aforementioned CACNA1G variant segregated with disease, which was consistent with episodic vestibulocerebellar ataxia. CBZ proved successful in bout prevention and provided symptomatic benefit in the proband, probably as a result of interaction of this drug with VGCC. Further studies are needed to fully determine the vestibular and neurological manifestations of this form of episodic vestibulocerebellar ataxia. This novel disease variant could be designated episodic vestibulocerebellar ataxia type 10

Rapid and sustained B-cell depletion with subcutaneous ofatumumab in relapsing multiple sclerosis : APLIOS, a randomized phase-2 study

Background: Ofatumumab, the first fully human anti-CD20 monoclonal antibody, is approved in several countries for relapsing multiple sclerosis (RMS). Objective: To demonstrate the bioequivalence of ofatumumab administered by an autoinjector versus a pre-filled syringe (PFS) and to explore the effect of ofatumumab on B-cell depletion. Methods: APLIOS (NCT03560739) is a 12-week, open-label, parallel-group, phase-2 study in patients with RMS receiving subcutaneous ofatumumab 20 mg every 4 weeks (q4w) (from Week 4, after initial doses on Days 1, 7, and 14). Patients were randomized 10:10:1:1 to autoinjector or PFS in the abdomen, or autoinjector or PFS in the thigh, respectively. Bioequivalence was determined by area under the curve (AUCτ) and maximum plasma concentration (Cmax) for Weeks 8-12. B-cell depletion and safety/tolerability were assessed. Results: A total of 256 patients contributed to the bioequivalence analyses (autoinjector-abdomen, n = 128; PFS-abdomen, n = 128). Abdominal ofatumumab pharmacokinetic exposure was bioequivalent for autoinjector and PFS (geometric mean AUCτ, 487.7 vs 474.1 h × µg/mL (ratio 1.03); Cmax, 1.409 vs 1.409 µg/mL (ratio 1.00)). B-cell counts (median cells/µL) depleted rapidly in all groups from 214.0 (baseline) to 2.0 (Day 14). Ofatumumab was well tolerated. Conclusion: Ofatumumab 20 mg q4w self-administered subcutaneously via autoinjector is bioequivalent to PFS administration and provides rapid B-cell depletion

Famílies botàniques de plantes medicinals

Facultat de Farmàcia, Universitat de Barcelona. Ensenyament: Grau de Farmàcia, Assignatura: Botànica Farmacèutica, Curs: 2013-2014, Coordinadors: Joan Simon, Cèsar Blanché i Maria Bosch.Els materials que aquí es presenten són els recull de 175 treballs d’una família botànica d’interès medicinal realitzats de manera individual. Els treballs han estat realitzat per la totalitat dels estudiants dels grups M-2 i M-3 de l’assignatura Botànica Farmacèutica durant els mesos d’abril i maig del curs 2013-14. Tots els treballs s’han dut a terme a través de la plataforma de GoogleDocs i han estat tutoritzats pel professor de l’assignatura i revisats i finalment co-avaluats entre els propis estudiants. L’objectiu principal de l’activitat ha estat fomentar l’aprenentatge autònom i col·laboratiu en Botànica farmacèutica

Genetic landscape of 6089 inherited retinal dystrophies affected cases in Spain and their therapeutic and extended epidemiological implications

Inherited retinal diseases (IRDs), defined by dysfunction or progressive loss of photoreceptors, are disorders characterized by elevated heterogeneity, both at the clinical and genetic levels. Our main goal was to address the genetic landscape of IRD in the largest cohort of Spanish patients reported to date. A retrospective hospital-based cross-sectional study was carried out on 6089 IRD affected individuals (from 4403 unrelated families), referred for genetic testing from all the Spanish autonomous communities. Clinical, demographic and familiar data were collected from each patient, including family pedigree, age of appearance of visual symptoms, presence of any systemic findings and geographical origin. Genetic studies were performed to the 3951 families with available DNA using different molecular techniques. Overall, 53.2% (2100/3951) of the studied families were genetically characterized, and 1549 different likely causative variants in 142 genes were identified. The most common phenotype encountered is retinitis pigmentosa (RP) (55.6% of families, 2447/4403). The most recurrently mutated genes were PRPH2, ABCA4 and RS1 in autosomal dominant (AD), autosomal recessive (AR) and X-linked (XL) NON-RP cases, respectively; RHO, USH2A and RPGR in AD, AR and XL for non-syndromic RP; and USH2A and MYO7A in syndromic IRD. Pathogenic variants c.3386G > T (p.Arg1129Leu) in ABCA4 and c.2276G > T (p.Cys759Phe) in USH2A were the most frequent variants identified. Our study provides the general landscape for IRD in Spain, reporting the largest cohort ever presented. Our results have important implications for genetic diagnosis, counselling and new therapeutic strategies to both the Spanish population and other related populations.This work was supported by the Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) of the Spanish Ministry of Health (FIS; PI16/00425 and PI19/00321), Centro de Investigación Biomédica en Red Enfermedades Raras (CIBERER, 06/07/0036), IIS-FJD BioBank (PT13/0010/0012), Comunidad de Madrid (CAM, RAREGenomics Project, B2017/BMD-3721), European Regional Development Fund (FEDER), the Organización Nacional de Ciegos Españoles (ONCE), Fundación Ramón Areces, Fundación Conchita Rábago and the University Chair UAM-IIS-FJD of Genomic Medicine. Irene Perea-Romero is supported by a PhD fellowship from the predoctoral Program from ISCIII (FI17/00192). Ionut F. Iancu is supported by a grant from the Comunidad de Madrid (CAM, PEJ-2017-AI/BMD7256). Marta del Pozo-Valero is supported by a PhD grant from the Fundación Conchita Rábago. Berta Almoguera is supported by a Juan Rodes program from ISCIII (JR17/00020). Pablo Minguez is supported by a Miguel Servet program from ISCIII (CP16/00116). Marta Corton is supported by a Miguel Servet program from ISCIII (CPII17/00006). The funders played no role in study design, data collection, data analysis, manuscript preparation and/or publication decisions

Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches

Extracellular vesicles (EVs), through their complex cargo, can reflect the state of their cell of origin and change the functions and phenotypes of other cells. These features indicate strong biomarker and therapeutic potential and have generated broad interest, as evidenced by the steady year-on-year increase in the numbers of scientific publications about EVs. Important advances have been made in EV metrology and in understanding and applying EV biology. However, hurdles remain to realising the potential of EVs in domains ranging from basic biology to clinical applications due to challenges in EV nomenclature, separation from non-vesicular extracellular particles, characterisation and functional studies. To address the challenges and opportunities in this rapidly evolving field, the International Society for Extracellular Vesicles (ISEV) updates its 'Minimal Information for Studies of Extracellular Vesicles', which was first published in 2014 and then in 2018 as MISEV2014 and MISEV2018, respectively. The goal of the current document, MISEV2023, is to provide researchers with an updated snapshot of available approaches and their advantages and limitations for production, separation and characterisation of EVs from multiple sources, including cell culture, body fluids and solid tissues. In addition to presenting the latest state of the art in basic principles of EV research, this document also covers advanced techniques and approaches that are currently expanding the boundaries of the field. MISEV2023 also includes new sections on EV release and uptake and a brief discussion of in vivo approaches to study EVs. Compiling feedback from ISEV expert task forces and more than 1000 researchers, this document conveys the current state of EV research to facilitate robust scientific discoveries and move the field forward even more rapidly