Sero-occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies and vertical transmission in slaughtered beef cows (Bos indicus) Soro ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e transmissão vertical em vacas de corte (Bos indicus) abatidas

Abstract Toxoplasma gondii is a protozoan parasite recognized as an important public health problem. The objective of the present study was to evaluate the occurrence of anti-T. gondii antibodies in pregnant and non pregnant zebus' breed beef cows (Bos indicus), their fetuses, killed at an abattoir in northern of Paraná state. In the present study 169 cows were evaluated, 92 pregnant (in different stages of gestation) and 77 non pregnant. Sero-occurrence of anti-T. gondii antibodies was performed by Indirect uorescent antibody test (IFAT) considering positive animals with titers ≥ 50 for cows and ≥ 25 for fetuses. Blood (with EDTA) from pregnant cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart, and liver) from their fetuses were collected and used for mouse bioassay. Antibodies against T. gondii were observed in 26.0% of cows and 2.5% of fetuses. There was no statistical difference when prevalence of toxoplasmosis was compared between pregnant (23.9%), and non-pregnant (28.6%) animals, and age of gestation (p > 0.59). However, the occurrence of anti-T.gondii antibodies increased with age of animals (p=0.004). Mouse bioassay showed three fetuses positives (3.2%), however, none T. gondii strain was isolated. The present study showed that transplacental transmission of T. gondii naturally occurs in zebu beef cows from Brazil, however, in low rate (5.4%). The anti-T. gondii antibodies occurrence increase with the age of animals, which could be related to the fact that main transmission in cattle T. gondii is horizontal. Key words: Toxoplasmosis, zebu, vertical transmission Resumo Toxoplasma gondii é um protozoário reconhecido como um dos mais importantes parasitas em saúde pública. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de anticorpos contra T. gondii em vacas de corte zebuínas (Bos indicus) gestantes, e seus fetos, bem como, em vacas não gestantes abatidas em um matadouro no norte do Paraná. No presente estudo foram avaliadas 169 vacas, 92 prenhas (em diferentes fases de gestação) e 77 não prenhas. A ocorrência de anticorpos contra T. gondii foi realizada por meio da reação de imuno uorescência indireta (IFI) considerando animais positivos aqueles com títulos ≥ 50 para as vacas e ≥ 25 para os fetos. Sangue (EDTA) de vacas prenhas e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração, e fígado) de seus fetos foram coletadas e utilizadas para o bioensaio em camundongos. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 26,0% das vacas e em 2,5% dos fetos Não houve diferença quando a soropositividade de anticorpos foi comparado entre vacas gestantes (23,9%), e não gestantes (28,6%), bem como, a idade da gestação (p > 0,59). No entanto, a ocorrência de anticorpos aumentou com a idade dos animais (p = 0,004). O bioensaio mostrou três fetos positivos (3,2%), porém, nenhuma cepa foi isolada. O presente estudo mostrou que a transmissão transplacentária de T. gondii ocorre naturalmente em vacas de corte zebuínas do Brasil, no entanto, esta ocorrência foi baixa (5,4%). A maior ocorrência de anticorpos associada com a idade dos animais poderia estar relacionada a transmissão horizontal do T. gondii nestes animais

Toxoplasma gondii: abortion outbreak in a goatherd from Southern Brazil

O objetivo do presente estudo foi investigar um surto de aborto em um rebanho caprino ocorrido na região sul do Paraná, Brasil. O rebanho continha 304 caprinos, composto de 227 fêmeas e 77 machos. Sessenta e uma (44.8%) cabras prenhas, de um total de 136, abortaram. Para detecção de anticorpos contra Toxoplasma gondii foi utilizada a técnica de imunofluorescência indireta (IFI) e a positividade considerada para aqueles animais com títulos maiores que 64. Das fêmeas que abortaram 59/61 (96,7%)revelaram soropositividade na IFI, 55 (93,2%) daquelas com títulos ¡Ý 1024. Amostras de oito fetos e leite cru de suas mães foram avaliadas por bioensaio em camundongos e PCR. Amostras de tecido de dois fetos abortados foram positivos no bioensaio e PCR. Após um período de tratamento com sulfadiazine e trimetoprim por cinco dias os abortos cessaram no rebanho. Considerando os resultados do trabalho o agente causador do surto foi o T. gondii.The present study aimed to investigate an abortion outbreak in a goatherd from Southern Brazil. The herd had 304 goats, being 227 females and 77 males. Sixty-one animals (44.8%) out of 136 dams aborted. Indirect immunofluorescence assay (IFA) was performed for anti-T.gondii antibody detection and showed 59/61 (96.7%) positive females (titers ¡Ý64). Fifty-five (93.2%) out of 59 positive dams showed titers ¡Ý 1024. Tissue samples from eight aborted fetuses and raw milk from their dams were collected for mouse bioassay and PCR. Two fetuses were positive for T. gondii infection in both bioassay and PCR. The animals were treated for five days with sulfadiazine plus trimetoprim what was enough to stop the abortion cases. Considering the results from this work the abortion outbreak was caused by T. gondii infection

Soro ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e transmissão vertical em vacas de corte (Bos indicus) abatidas

Toxoplasma gondii is a protozoan parasite recognized as an important public health problem. The objective of the present study was to evaluate the occurrence of anti-T. gondii antibodies in pregnant and non pregnant zebus’ breed beef cows (Bos indicus), their fetuses, killed at an abattoir in northern of Paraná state. In the present study 169 cows were evaluated, 92 pregnant (in different stages of gestation) and 77 non pregnant. Sero-occurrence of anti-T. gondii antibodies was performed by Indirect fluorescent antibody test (IFAT) considering positive animals with titers ? 50 for cows and ? 25 for fetuses. Blood (with EDTA) from pregnant cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart, and liver) from their fetuses were collected and used for mouse bioassay. Antibodies against T. gondii were observed in 26.0% of cows and 2.5% of fetuses. There was no statistical difference when prevalence of toxoplasmosis was compared between pregnant (23.9%), and non-pregnant (28.6%) animals, and age of gestation (p > 0.59). However, the occurrence of anti-T.gondii antibodies increased with age of animals (p=0.004). Mouse bioassay showed three fetuses positives (3.2%), however, none T. gondii strain was isolated. The present study showed that transplacental transmission of T. gondii naturally occurs in zebu beef cows from Brazil, however, in low rate (5.4%). The anti-T. gondii antibodies occurrence increase with the age of animals, which could be related to the fact that main transmission in cattle T. gondii is horizontal.Toxoplasma gondii é um protozoário reconhecido como um dos mais importantes parasitas em saúde pública. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de anticorpos contra T. gondii em vacas de corte zebuínas (Bos indicus) gestantes, e seus fetos, bem como, em vacas não gestantes abatidas em um matadouro no norte do Paraná. No presente estudo foram avaliadas 169 vacas, 92 prenhas (em diferentes fases de gestação) e 77 não prenhas. A ocorrência de anticorpos contra T. gondii foi realizada por meio da reação de imunofluorescência indireta (IFI) considerando animais positivos aqueles com títulos ? 50 para as vacas e ? 25 para os fetos. Sangue (EDTA) de vacas prenhas e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração, e fígado) de seus fetos foram coletadas e utilizadas para o bioensaio em camundongos. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 26,0% das vacas e em 2,5% dos fetos Não houve diferença quando a soropositividade de anticorpos foi comparado entre vacas gestantes (23,9%), e não gestantes (28,6%), bem como, a idade da gestação (p > 0,59). No entanto, a ocorrência de anticorpos aumentou com a idade dos animais (p = 0,004). O bioensaio mostrou três fetos positivos (3,2%), porém, nenhuma cepa foi isolada. O presente estudo mostrou que a transmissão transplacentária de T. gondii ocorre naturalmente em vacas de corte zebuínas do Brasil, no entanto, esta ocorrência foi baixa (5,4%). A maior ocorrência de anticorpos associada com a idade dos animais poderia estar relacionada a transmissão horizontal do T. gondii nestes animais

Occurrence of anti-Leishmania spp., Neospora caninum, and Toxoplasma gondii antibodies in dog sera from Veterinary Hospital from Universidade Estadual de Londrina<br>Ocorrência de anticorpos contra Leishmania spp., Neospora caninum E Toxoplasma gondii em soros de cães atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina-Pr

The aim of this study was to detect the presence of IgG antibodies anti-Leishmania spp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from a Veterinary Hospital from Universidade Estadual de Londrina. Blood samples from 112 animals were obtained by jugular venipuncture to obtain sera. The samples were tested by indirect immunofluorescence to detect antibodies anti-Leishmania spp., anti-N. caninum and anti-T. gondii. Thirteen (11.61%), 25 (22.32%), and 57 (50.89%) samples were positive for Leishmania spp., N. caninum, and T. gondii, respectively. The co-presence of anti-Leishmania spp. and N. caninum was observed in 6 (5.36%), anti-Leishmania spp. and anti-T. gondii in 8 (14.7%), and anti-N. caninum and anti-T. gondii in 18 (16.07%) samples. The co-presence of anti-Leishmania spp., anti-N. caninum and anti-T. gondii was observed in 5 (4.46%) dogs. There was a higher prevalence of Leishmania in Toxoplasma and Neospora positive animals, however, these results were not statistically significant (range p = 0.052 p = 0.06). The dogs have an important role in the epidemiological cycle of these diseases, which are important in animal and public health. The northern state of Paraná is an endemic area for human cutaneous leishmaniasis, therefore, studies should be conducted to uncover the real role of dogs as reservoirs of Leishmania to humans in the state.<p><p> O objetivo do presente trabalho foi detectar a presença de anticorpos contra Leishmania spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em cães atendidos no Hospital Veterinário, da Universidade Estadual de Londrina. Amostras de 112 animais foram obtidas por venopunção jugular ou cefálica com posterior obtenção dos soros. Estas foram submetidas à técnica de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos da classe IgG anti-Leishmania spp, anti-N. caninum e anti-T. gondii. Dos 112 soros examinados, 13 (11,61%), 25 (22,32%) e 57 (50,89%) foram positivos para Leishmania spp., N. caninum e T. gondii, respectivamente. A co-presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e N. caninum foi observada em 6 (5,36%) amostras, anticorpos anti-Leishmania spp. e anti-T. gondii em 8 (7,14%), e anticorpos anti-N. caninum e anti-T. gondii em 18 (16,07%) amostras. A co-presença de anticorpos anti- Leishmania spp., anti-N. caninum e anti-T. gondii foi observada em 5 (4,46%) cães. Verificou-se uma maior prevalência de Leishmania nos animais positivos para Toxoplasma e Neospora, embora estes resultados não tenham sido estatisticamente significativos (p?0.06). Os cães são importantes no ciclo epidemiológico das enfermidades em estudo, sendo estas doenças importantes do ponto de vista de saúde animal, ou de saúde pública. A região norte do estado do Paraná é uma área endêmica para leishmaniose tegumentar humana, portanto, estudos devem ser realizados para desvendar o real papel dos cães como reservatórios da Leishmania para seres humanos no estado

Ocorrência de anticorpos contra Leishmania spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em soros de cães atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina-Pr

The aim of this study was to detect the presence of IgG antibodies anti-Leishmania spp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from a Veterinary Hospital from Universidade Estadual de Londrina. Blood samples from 112 animals were obtained by jugular venipuncture to obtain sera. The samples were tested by indirect immunofluorescence to detect antibodies anti-Leishmania spp., anti-N. caninum and anti-T. gondii. Thirteen (11.61%), 25 (22.32%), and 57 (50.89%) samples were positive for Leishmania spp., N. caninum, and T. gondii, respectively. The co-presence of anti-Leishmania spp. and N. caninum was observed in 6 (5.36%), anti-Leishmania spp. and anti-T. gondii in 8 (14.7%), and anti-N. caninum and anti-T. gondii in 18 (16.07%) samples. The co-presence of anti-Leishmania spp., anti-N. caninum and anti-T. gondii was observed in 5 (4.46%) dogs. There was a higher prevalence of Leishmania in Toxoplasma and Neospora positive animals, however, these results were not statistically significant (range p = 0.052 p = 0.06). The dogs have an important role in the epidemiological cycle of these diseases, which are important in animal and public health. The northern state of Paraná is an endemic area for human cutaneous leishmaniasis, therefore, studies should be conducted to uncover the real role of dogs as reservoirs of Leishmania to humans in the state

Neospora caninum: evaluation of vertical transmission in slaughtered dairy cows (Bos taurus) Neospora caninum: avalia&#231;&#227;o da transmiss&#227;o vertical em vacas leiteiras (Bos taurus)

Neospora caninum is a worldwide parasite recognized as one of the main parasites responsible for abortion in cattle. The objective of this study was to evaluate vertical transmission of N. caninum in dairy cows (Bos taurus) that were slaughtered at an abattoir in the state of Santa Catarina, southern Brazil. Blood samples (with and without EDTA) from 60 pregnant dairy cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart and liver) from their fetuses were collected and used for PCR and serological evaluation. Blood samples from 60 non-pregnant cows were collected and used to detect antibodies. Anti-N. caninum antibodies were detected by indirect ELISA. Antibodies against N. caninum were observed in 41.6% (25&#8725;60) of the pregnant cows and in 43.3% (26&#8725;60) of the non-pregnant cows. Antibodies against the parasite were detected in sera from three fetuses (5.5%). PCR analysis revealed that 3.3% (2&#8725;60) of the cows and 6.6% (4&#8725;60) of the fetuses evaluated were positive for specific N. caninum primers. These positive fetuses were between 4-6 months of age. Therefore, considering PCR and serological tests to be indicative of vertical transmission in fetuses, 11.6% (7&#8725;60) of the fetuses were infected by N. caninum during gestation. Neospora caninum &#233; um parasita de distribui&#231;&#227;o mundial reconhecido como um dentre os principais parasitas, respons&#225;vel por abortamento em bovinos. O objetivo deste estudo foi avaliar a transmiss&#227;o vertical de N. caninum em vacas leiteiras (Bos taurus) que foram submetidas ao abate em matadouro no Estado de Santa Catarina, sul do Brasil. Sangue (com e sem EDTA) de 60 vacas leiteiras prenhas e amostras de sangue e tecidos (c&#233;rebro, pulm&#227;o, cora&#231;&#227;o e f&#237;gado) de seus fetos foram coletados e utilizados para PCR e avalia&#231;&#227;o sorol&#243;gica. Amostras de sangue de 60 vacas n&#227;o-gestantes foram obtidas e utilizadas para detec&#231;&#227;o de anticorpos. A detec&#231;&#227;o de anticorpos s&#233;ricos anti-N. caninum foi avaliada pelo ELISA-teste indireto. Anticorpos anti-N. caninum foram observados em 41,6% (25&#8725;60) das vacas prenhas e em 43,3% (26&#8725;60) das vacas n&#227;o-gestantes. Tr&#234;s fetos (5,5%) foram soros positivos para N. caninum. An&#225;lise pela PCR revelou que 3,3% (2&#8725;60) das vacas e 6,6% (4&#8725;60) dos fetos avaliados foram positivos para N. caninum. As idades dos fetos positivos eram de 4 a 6 meses. Portanto, considerando a PCR e a sorologia como indicativo de transmiss&#227;o vertical em fetos, 11,6% (7&#8725;60) dos fetos foram infectados por N. caninum durante a gesta&#231;&#227;o

Occurrence of gastrointestinal and renal helminths inZenaida auriculata (Des Murs, 1847) trap-captured from Brazil

This study aimed to determine the prevalence of gastrointestinal and renal helminths from naturally infected Zenaida auriculatacaptured in Londrina, Paraná State. Two hundred and one Eared doves were trapped and the gastrointestinal and renal helminths were collected and identified according to morphological structures. One hundred and sixteen (57.71%) doves were parasitized by helminths with specific prevalences forOrnithostrongylus quadriradiatus in 50 doves (24.88%),Ascaridia columbae in 47 (23.38%), Paratanaisia bragai and P. confusa in 34 (16.92%),Tetrameres fissispina in 17 (8.46%), Synhimantus nasuta in 14 (6.47%), Brachylaima mazzantii in 4 (1.99%) and Raillietina allomyodes in 2 doves (1.00%). Seventy four/201 (37.00%) birds were infected with only one species, and 96/201 (48.00%) pigeons were infected with nematodes. The association between different classes of helminths occurred in 40/201 (20.00%) animals. The results showed statistically differences between the presence of nematode (p = 0.00001) and trematode species (p ≤ 0.05) in the doves, and there was an association between the local of capture and the presence of trematodes and A. columbae (p ≤ 0.05). This study is the first to report the infection of Z. auriculata from Brazil with O. quadriradiatus, A. columbae, T. fissispina, S. nasuta, R. allomyodes, P. bragai and P. confusa

Isolation and genotyping of Toxoplasma gondii from pregnant dairy cows (Bos taurus) slaughtered Isolamento e genotipagem de Toxoplasma gondii em vacas de leite (Bos taurus) prenhas abatidas

The current study aimed to evaluate serology, and isolate and genotype Toxoplasma gondii strains from pregnant dairy cows, slaughtered in an abattoir for human consumption, and their fetuses. Blood from 60 pregnant dairy cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart, and liver) from their fetuses were collected and analyzed in a mouse bioassay. Antibodies against T. gondii were observed in 48.3% of cows and 3.7% of fetuses (IFAT, titers &#8805; 50 for cows and 25 for fetuses were considered positive). Fourteen fetuses (23.3%) and six cows (10.0%) were identified as positive in the bioassay. T. gondii was isolated from a blood sample of a cow older than 4 years old in the 6th month of pregnancy, and from a blood sample of a fetus in the 6th month of gestation. These isolates were identified by polymerase chain reaction (PCR) as being of T. gondii and both strains showed type II alleles for all PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) markers tested. T. gondii type II strain from cattle was isolated for the first time in Brazil. The current study also showed that transplacental transmission of T. gondii naturally occurs in dairy cows (23.3%) from Southern Brazil.O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos, isolar e genotipar Toxoplasma gondii de vacas prenhas abatidas em um matadouro para consumo humano e de seus respectivos fetos. Sangue de 60 vacas gestantes e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração e fígado) de seus fetos foram coletados e utilizados para bioensaio em camundongos. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 48,3% das vacas e em 3,7% dos fetos (foram considerados positivos títulos &#8805;50 para as vacas e &#8805;25 para os fetos). Quatorze fetos (23,3%) e seis vacas (10,0%) apresentaram-se positivas para T. gondii ao bioensaio. T. gondii foi isolado de amostra de sangue de uma vaca com mais de quatro anos no 6º mês de gestação e de amostra de sangue de um feto no 6º mês de gestação. Por PCR esses isolados foram identificados como sendo de T. gondii e ambas as cepas apresentaram o alelo tipo II em todos os marcadores de PCR-RFLP testados. Esta é a primeira identificação de genótipo tipo II de T. gondii em bovinos do Brasil. Além disso, este estudo mostrou que a transmissão transplacentária de T. gondii ocorre naturalmente em bovinos de leite (23,3%)

Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária Toxoplasma gondii: humoral and cellular immune response of BALB/c mice immunized via intranasal route with rTgROP2

Abstract TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL -1 ) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 μg of rROP2 protein + 10 μg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cell-ular immune response on day 62. Five (50%) and two (20%) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 μg.mL -1 of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice. Keywords: Cloning, expression, recombinant protein, rhoptry, rROP2. Resumo TgROP2 é uma proteína localizada nas roptrias do Toxoplasma gondii, sendo um antígeno candidato a componente de uma vacina contra a toxoplasmose. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da TgROP2 recombinante em estimular a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c após estímulo intranasal. A sequência da TgROP2 foi amplificada pela PCR a partir da cepa RH e clonada em vetor de expressão pTrc-His. Após a transformação em Escherichia coli-Rosetta 2, a pTrcHis-TgROP2 exibiu alto nível de expressão após 4 horas de indução com IPTG. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 54 kDa. Para avaliar a imunogenicidade dessa proteína recombinante, 10 camundongos receberam, pela via intranasal, 10 μg da rROP2 associado a 10 μg de Quil-A. Três doses foram realizadas nos dias 0, 21 e 42. No dia 62 do experimento, três animais foram eutanasiados para avaliar as respostas imune celular e humoral. Cinco (50%) e dois (20%) dos 10 animais apresentaram níveis de IgG (DO média = 0,307; ponto de corte = 0,240) e IgA (DO média = 0,133; ponto de corte = 0,101) acima do ponto de corte no ELISA no dia 62. A proliferação de esplenócitos revelou altos Índices de Estimulação (SI), quando as células foram cultivadas com 5, 10 e 15 μg.mL -1 de rTgROP2. Os resultados obtidos indicam que a via nasal pode estimular tanto a resposta imune celular como a humoral. Palavras-chave: Clonagem, expressão, proteína recombinante, roptrias, rROP2