Primeiro isolamento de dengue 3 no Brasil de um caso importado

The authors report the isolation of dengue 3 virus for the first time in Brazil. The patient, resident in Limeira-SP, traveled to Nicaragua on May 16th, 1998, where he stayed for two months. Starting on August 14th he had fever, headache, myalgia, arthralgia, retro-orbital pain and diarrhea. He returned to Brazil on August 16th and was hospitalized in the next day. The patient had full recovery and was discharged on August 20th. The virus was isolated in C6/36 cell culture inoculated with serum collected on the 6th day after the onset of the symptoms. The serotype 3 was identified by indirect immunofluorescence assays performed with type-specific monoclonal antibodies. This serotype was further confirmed by polymerase chain reaction analysis. The introduction of a new dengue serotype in a susceptible population is a real threat for the occurrence of severe forms of the disease. The isolation and identification of dengue virus are important in order to monitoring the serotypes circulating in Brazil and to take the measures necessary to prevent and control an epidemic.Os autores relatam o isolamento do vírus dengue 3 pela primeira vez no Brasil. O paciente, residente em Limeira-SP, viajou em 16 de maio de 1998 para a Nicarágua, onde permaneceu por três meses. A partir de 14 de agosto, ele apresentou febre, dor de cabeça, mialgia, artralgia, dor retro-orbital e diarréia. Ele retornou ao Brasil em 16 de agosto e foi hospitalizado no dia seguinte. O paciente teve completa recuperação, recebendo alta em 20 de agosto. O vírus foi isolado em cultura de células C6/36 inoculadas com soro colhido no 6(0) dia após o início dos sintomas. O sorotipo 3 foi identificado por imunofluorescência indireta com anticorpos monoclonais tipo-específico. O sorotipo foi posteriormente confirmado por PCR. A introdução de um novo sorotipo de dengue em uma população susceptível é uma ameaça para a ocorrência de formas severas da doença. O isolamento e a identificação do vírus dengue são de grande importância a fim de monitorar a introdução de novos sorotipos e para que medidas sejam tomadas para prevenir e controlar novas epidemias

Análise molecular dos vírus dengue tipo 1 e 2 no Brasil, baseada nas seqüências da região da junção dos genes do envelope e da proteína não estrutural 1

The genomic sequences of the Envelope-Non-Structural protein 1 junction region (E/NS1) of 84 DEN-1 and 22 DEN-2 isolates from Brazil were determined. Most of these strains were isolated in the period from 1995 to 2001 in endemic and regions of recent dengue transmission in São Paulo State. Sequence data for DEN-1 and DEN-2 utilized in phylogenetic and split decomposition analyses also include sequences deposited in GenBank from different regions of Brazil and of the world. Phylogenetic analyses were done using both maximum likelihood and Bayesian approaches. Results for both DEN-1 and DEN-2 data are ambiguous, and support for most tree bipartitions are generally poor, suggesting that E/NS1 region does not contain enough information for recovering phylogenetic relationships among DEN-1 and DEN-2 sequences used in this study. The network graph generated in the split decomposition analysis of DEN-1 does not show evidence of grouping sequences according to country, region and clades. While the network for DEN-2 also shows ambiguities among DEN-2 sequences, it suggests that Brazilian sequences may belong to distinct subtypes of genotype III.Foram determinadas as seqüências nucleotídicas da junção dos genes do envelope e da proteína não estrutural 1 (E/NS1) de 84 cepas de DEN-1 e 22 cepas de DEN-2 do Brasil. A maioria dessas cepas foi isolada no período de 1995-2001, em regiões endêmicas e de transmissão recente no Estado de São Paulo. Seqüências da junção E/NS1 de DEN-1 e DEN-2 de outras regiões geográficas brasileiras e mundiais, obtidas do GenBank, foram também utilizadas neste estudo. As análises foram efetuadas utilizando-se as técnicas de Verossimilhança Máxima e Bayesiana de inferência filogenética. Os resultados das análises das seqüências de DEN-1 e DEN-2 são ambíguos e o suporte para a maioria dos grupos é baixo, sugerindo que a região E/NS1 não é filogeneticamente informativa. O gráfico gerado na análise de decomposição dos grupos de DEN-1 não mostrou evidências de agrupamento das seqüências de acordo com os países, as regiões ou clados. No entanto, para DEN-2 evidenciou a existência de ambigüidades entre as seqüências, sugerindo que as brasileiras pertencem a subtipos distintos do genotipo III

Primeiro isolamento de Dengue 4 no Estado de São Paulo, Brasil, 2011

We report the first isolation of Dengue virus 4 (DENV-4) in the state of São Paulo, from two patients - one living in São José do Rio Preto and the other one in Paulo de Faria, both cities located in the Northwest region of the state. The virus isolations were accomplished in the clone C6/36 Aedes albopictus cell line, followed by indirect immunofluorescence assays, performed with type-specific monoclonal antibodies that showed positive reactions for DENV-4. The results were confirmed by Nested RT-PCR and Real-Time RT-PCR assays. The introduction of DENV-4 in a country that already has to deal with the transmission of three other serotypes increases the possibility of the occurrence of more severe cases of the disease. The importance of early detection of dengue cases, before the virus spreads and major outbreaks occur, should be emphasized.Relatamos o primeiro isolamento do vírus Dengue 4 (DENV-4) no Estado de São Paulo, de dois pacientes residentes em São José do Rio Preto e Paulo de Faria, ambos municípios localizados na região Noroeste do Estado. O isolamento do vírus foi realizado em clone C6/36, linhagem de células de Aedes albopictus seguido por imunofluorescência indireta, realizada com anticorpos monoclonais tipo específicos, que apresentou reação positiva para DENV-4. Os resultados foram confirmados por testes de Nested RT-PCR e RT-PCR em Tempo Real. A introdução do DENV-4 no país, com uma população suscetível a esse vírus e que já convive com a transmissão de outros três sorotipos, aumenta a possibilidade da ocorrência de casos mais graves da doença. Deve ser enfatizada a importância da detecção precoce de casos de dengue, antes que ocorra a propagação do vírus e que surtos importantes aconteçam

Epidemiologia da infecção pela dengue em Ribeirão Preto, SP, Brasil

OBJECTIVE: To assess dengue transmission in a correctional facility for juvenile delinquents in Ribeirão Preto, state of São Paulo, Brazil. METHODS: A serological and virology investigation was carried out among inmates and employees of a correctional facility for juvenile delinquents in Ribeirão Preto, Brazil. The study population consisted of 105 inmates and 91 employees representing 89% of the exposed. The collected blood was stored and processed using MAC-ELISA and virus isolation. A questionnaire was applied to each subject at the time of blood collection. RESULTS: Of the total of blood samples collected (n=196), 42 (21.4%) were positive for IgM antibodies and 43 (21.9%) for IgG antibodies; of which, 15 were both IgM and IgG positive and 28 (14.3%) were IgG positive only. Serotype 1 dengue virus was isolated in 5 samples. Out of 42 IgM positive samples, 14 (33.0%) subjects did not have any physical complaints. The incidence rate was 23.8% and 18.6% among inmates and employees, respectively. The first cases in the facility were reported in 1997 and the last ones in March 1997 though results are suggestive of an earlier onset of transmission. CONCLUSIONS: The high incidence rate of dengue infection can be explained by the high population density of the facility, high Aedes aegypti infestation, high numbers of asymptomatic subjects, and a higher transmission of disease in a closed setting.OBJETIVO: Avaliar a transmissão de dengue em uma instituição correcional de adolescentes localizada em Ribeirão Preto, SP, Brasil. MÉTODOS: Foi realizado um inquérito sorológico e virológico da população de internos e funcionários de uma instituição correcional de adolescentes infratores localizada em Ribeirão Preto, SP, Brasil. A população de estudo consistiu em 105 menores e 91 funcionários que representavam 89% do total de pessoas expostas. O sangue coletado da população estudada foi armazenado e processado para avaliação pelas técnicas de MAC-Elisa e de isolamento viral. Cada participante respondeu a um questionário aplicado na ocasião da coleta de sangue. RESULTADOS: Do total de amostras de sangue coletadas (n=196), 42 (21,4%) foram positivas para anticorpos da classe IgM, e 43 (21,9%), para anticorpo IgG; destes, 15 com IgM e IgG positivas e 28 (14,3%) com apenas IgG positiva. Em cinco amostras, foram isolados vírus da dengue, sorotipo 1. Dos 42 casos com IgM positiva, 14 (33,4%) não relataram sintomas característico de dengue. A incidência entre os internos foi de 23,8% e, entre funcionários, de 18,6%. Os primeiros casos foram notificados em fevereiro de 1997, e os últimos, em março do mesmo ano, embora os resultados mostrem a possibilidade de a transmissão ter se iniciado bem antes de ser detectada. CONCLUSÕES: A alta incidência observada pode ser explicada pela grande densidade populacional na instituição, alta infestação do vetor Aedes aegypti, alta taxa de assintomáticos e transmissão favorecida pelo fato de a comunidade ser fechada

Avaliação da detecção do antígeno NS1 para diagnóstico de dengue nos Laboratórios de Saúde Pública, Estado de São Paulo, 2009

The present work evaluated the diagnostic accuracy of detection of Dengue NS1 antigen employing two NS1 assays, an immunochromatographic assay and ELISA, in the diagnostic routine of Public Health laboratories. The results obtained with NS1 assay were compared with virus isolation and, in a subpopulation of cases, they were compared with the IgM-ELISA results obtained with convalescent samples. A total of 2,321 sera samples were analyzed by one of two NS1 techniques from March to October 2009. The samples were divided into five groups: groups I, II and III included samples tested by NS1 and virus isolation, and groups IV and V included patients with a first sample tested by NS1 and a second sample tested by IgM-ELISA. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, Kappa Index and Kappa Concordance were calculated. The results showed that NS1 testing in groups I, II and III had high sensitivity (98.0%, 99.5% and 99.3%), and predictive values and Kappa index between 0.9 - 1.0. Groups IV and V only had Kappa Concordance calculated, since the samples were analyzed according to the presence of NS1 antigen or IgM antibody. Concordance of 92.1% was observed when comparing the results of NS1-negative samples with IgM-ELISA. Based on the findings, it is possible to suggest that the tests for NS1 detection may be important tools for monitoring the introduction and spread of Dengue serotypes.Esse estudo avaliou a acurácia do diagnóstico por detecção do antígeno NS1 do vírus Dengue empregando-se ensaios em dois formatos, imunocromatográfico e ELISA, na rotina diagnóstica dos laboratórios de Saúde Pública. Compararam-se os resultados de NS1 com os resultados de isolamento viral e, em parte dos casos, foi feita a comparação com os resultados de IgM-ELISA, obtidos nas segundas amostras. Um total de 2.321 amostras de soros, obtidas no período de março a outubro de 2009, foram analisadas por uma das duas técnicas NS1. As amostras foram divididas em cinco grupos: I, II e III, que incluíram amostras analisadas por testes NS1 e por isolamento de vírus. Os grupos IV e V incluíram pacientes com a primeira amostra processada por NS1 e segunda por IgM-ELISA. Foram analisadas sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo, concordância e índice Kappa. Os resultados mostraram que os grupos I, II e III apresentaram alta sensibilidade (98,0%, 99,5% e 99,3%), valores preditivos e índice Kappa entre 0,9 - 1,0. Nos grupos IV e V, apenas concordância foi calculada, dado que as amostras foram analisadas quanto à presença de antígeno NS1 ou de anticorpos IgM. Comparando-se os resultados negativos de NS1 com IgM-ELISA houve 92,1% de concordância. Com base nas constatações feitas, é possível sugerir que a detecção de NS1 pode ser importante ferramenta para monitorar a introdução e disseminação dos sorotipos de Dengue

Epizootias de febre amarela em primatas não humanos no estado de São Paulo, Brasil, 2008-2009

Desde 2000, vem sendo observada a expansão da febre amarela (FA) no Sudeste do Brasil, sendo detectados casos em áreas consideradas silenciosas por décadas. Epizootias em primatas não humanos (NHPs) são considerados eventos sentinela para a detecção de casos humanos. É importante relatar eventos epizoóticos que podem ter impacto sobre o estado de conservação de espécies sensíveis. Descrevemos as epizootias, notificadas em NHPs no estado de São Paulo, Brasil, entre setembro de 2008 a agosto de 2009. Noventa e um eventos epizoóticos, envolvendo 147 animais, foram notificados em 36 municípios. As amostras foram obtidas a partir de 65 animais (44,2%). A maioria das epizootias (46,6%) foram registradas entre março e abril, no mesmo período no qual YF em que casos humanos ocorreram no estado. As amostras biológicas foram coletadas de animais encontrados mortos e enviadas ao Instituto Adolfo Lutz, em São Paulo. Duas amostras, coletadas em dois municípios, sem indicação para a vacinação de febre amarela, foram positivos para o vírus. Outros 48 animais foram associados com FA por vínculo clínico-epidemiológico com casos confirmados laboratorialmente. Devido a doença em humanos e NHPs terem ocorrido no mesmo período, a detecção do vírus em NHPs não funcionou como sentinela, mas ajudou no processo de delimitação de novas áreas de risco.Since 2000, the expansion of Sylvatic Yellow Fever (YF) has been observed in the southeast of Brazil, being detected in areas considered silent for decades. Epizootics in non-human primates (NHPs) are considered sentinel events for the detection of human cases. It is important to report epizootic events that could have impact on the conservation status of susceptible species. We describe the epizootics in NHPs, notified in state of São Paulo, Brazil, between September 2008 to August 2009. Ninety-one epizootic events, involving 147 animals, were reported in 36 counties. Samples were obtained from 65 animals (44.2%). Most of the epizootics (46.6%) were reported between March and April, the same period during which human cases of YF occurred in the state. Biological samples were collected from animals found dead and were sent to Instituto Adolfo Lutz, in São Paulo. Two samples, collected in two counties without an indication for YF vaccination, were positive for the virus. Another 48 animals were associated with YF by clinical-epidemiological linkage with laboratory confirmed cases. Because the disease in human and NHPs occurred in the same period, the detection of the virus in NHPs did not work as sentinel, but aided in the delineation of new areas of risk

First isolation of dengue 4 in the state of São Paulo, Brazil, 2011

We report the first isolation of Dengue virus 4 (DENV-4) in the state of São Paulo, from two patients - one living in São José do Rio Preto and the other one in Paulo de Faria, both cities located in the Northwest region of the state. The virus isolations were accomplished in the clone C6/36 Aedes albopictus cell line, followed by indirect immunofluorescence assays, performed with type-specific monoclonal antibodies that showed positive reactions for DENV-4. The results were confirmed by Nested RT-PCR and Real-Time RT-PCR assays. The introduction of DENV-4 in a country that already has to deal with the transmission of three other serotypes increases the possibility of the occurrence of more severe cases of the disease. The importance of early detection of dengue cases, before the virus spreads and major outbreaks occur, should be emphasized

Dengue Virus Type 4 Phylogenetics in Brazil 2011: Looking beyond the Veil

Dengue Fever and Dengue Hemorrhagic Fever are diseases affecting approximately 100 million people/year and are a major concern in developing countries. In the present study, the phylogenetic relationship of six strains of the first autochthonous cases of DENV-4 infection occurred in Sao Paulo State, Parana State and Rio Grande do Sul State, Brazil, 2011 were studied. Nucleotide sequences of the envelope gene were determined and compared with sequences representative of the genotypes I, II, III and Sylvatic for DEN4 retrieved from GenBank. We employed a Bayesian phylogenetic approach to reconstruct the phylogenetic relationships of Brazilian DENV-4 and we estimated evolutionary rates and dates of divergence for DENV-4 found in Brazil in 2011. All samples sequenced in this study were located in Genotype II. The studied strains are monophyletic and our data suggest that they have been evolving separately for at least 4 to 6 years. Our data suggest that the virus might have been present in the region for some time, without being noticed by Health Surveillance Services due to a low level of circulation and a higher prevalence of DENV-1 and DENV- 2

Yellow fever epizootics in non-human primates, São Paulo state, Brazil, 2008-2009

Since 2000, the expansion of Sylvatic Yellow Fever (YF) has been observed in the southeast of Brazil, being detected in areas considered silent for decades. Epizootics in non-human primates (NHPs) are considered sentinel events for the detection of human cases. It is important to report epizootic events that could have impact on the conservation status of susceptible species. We describe the epizootics in NHPs, notified in state of São Paulo, Brazil, between September 2008 to August 2009. Ninety-one epizootic events, involving 147 animals, were reported in 36 counties. Samples were obtained from 65 animals (44.2%). Most of the epizootics (46.6%) were reported between March and April, the same period during which human cases of YF occurred in the state. Biological samples were collected from animals found dead and were sent to Instituto Adolfo Lutz, in São Paulo. Two samples, collected in two counties without an indication for YF vaccination, were positive for the virus. Another 48 animals were associated with YF by clinical-epidemiological linkage with laboratory confirmed cases. Because the disease in human and NHPs occurred in the same period, the detection of the virus in NHPs did not work as sentinel, but aided in the delineation of new areas of risk