Estrogen regulation of TRPM8 expression in breast cancer cells

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The calcium-permeable cation channel TRPM8 (melastatin-related transient receptor potential member 8) is over-expressed in several cancers. The present study aimed at investigating the expression, function and potential regulation of TRPM8 channels by ER alpha (estrogen receptor alpha) in breast cancer.</p> <p>Methods</p> <p>RT-PCR, Western blot, immuno-histochemical, and siRNA techniques were used to investigate TRPM8 expression, its regulation by estrogen receptors, and its expression in breast tissue. To investigate the channel activity in MCF-7 cells, we used the whole cell patch clamp and the calcium imaging techniques.</p> <p>Results</p> <p>TRPM8 channels are expressed at both mRNA and protein levels in the breast cancer cell line MCF-7. Bath application of the potent TRPM8 agonist Icilin (20 μM) induced a strong outwardly rectifying current at depolarizing potentials, which is associated with an elevation of cytosolic calcium concentration, consistent with established TRPM8 channel properties. RT-PCR experiments revealed a decrease in TRPM8 mRNA expression following steroid deprivation for 48 and 72 hours. In steroid deprived medium, addition of 17-beta-estradiol (E₂, 10 nM) increased both TRPM8 mRNA expression and the number of cells which respond to Icilin, but failed to affect the Ca²⁺entry amplitude. Moreover, silencing ERα mRNA expression with small interfering RNA reduced the expression of TRPM8. Immuno-histochemical examination of the expression of TRPM8 channels in human breast tissues revealed an over-expression of TRPM8 in breast adenocarcinomas, which is correlated with estrogen receptor positive (ER⁺) status of the tumours.</p> <p>Conclusion</p> <p>Taken together, these results show that TRPM8 channels are expressed and functional in breast cancer and that their expression is regulated by ER alpha.</p

Expression of TRPC6 channels in human epithelial breast cancer cells

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>TRP channels have been shown to be involved in tumour generation and malignant growth. However, the expression of these channels in breast cancer remains unclear. Here we studied the expression and function of endogenous TRPC6 channels in a breast cancer cell line (MCF-7), a human breast cancer epithelial primary culture (hBCE) and in normal and tumour breast tissues.</p> <p>Methods</p> <p>Molecular (Western blot and RT-PCR), and immunohistochemical techniques were used to investigate TRPC6 expression. To investigate the channel activity in both MCF-7 cells and hBCE we used electrophysiological technique (whole cell patch clamp configuration).</p> <p>Results</p> <p>A non selective cationic current was activated by the oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol (OAG) in both hBCE and MCF-7 cells. OAG-inward current was inhibited by 2-APB, SK&F 96365 and La³⁺. TRPC6, but not TRPC7, was expressed both in hBCE and in MCF-7 cells. TRPC3 was only expressed in hBCE. Clinically, TRPC6 mRNA and protein were elevated in breast carcinoma specimens in comparison to normal breast tissue. Furthermore, we found that the overexpression of TRPC6 protein levels were not correlated with tumour grades, estrogen receptor expression or lymph node positive tumours.</p> <p>Conclusion</p> <p>Our results indicate that TRPC6 channels are strongly expressed and functional in breast cancer epithelial cells. Moreover, the overexpression of these channels appears without any correlation with tumour grade, ER expression and lymph node metastasis. Our findings support the idea that TRPC6 may have a role in breast carcinogenesis.</p

Recherche des papilloma virus oncogènes par technique d'hybrid capture®2 couplée au frottis cervico-utérin (résultats chez 3832 patientes)

Le lien entre le cancer du col utérin et les papilloma virus (HPV) est établi. Afin de mieux préciser les données épidémiologiques et de définir la place du typage HPV oncogènes, nous avons réalisé une étude s'intégrant dans un PHRC. 3832 patientes, âgées de 20 ans à 62 ans, ayant consulté en gynécologie pour frottis de dépistage. Le typage HPV oncogènes est réalisé par technique d'Hybrid Capture®2. 14,3 % des typages sont positifs. C'est la classe d'âge 25-29 ans qui présente le plus fort taux (19,4 %). On observe également une augmentation du nombre de typage positif chez les fumeuses et/ou celles qui ont subi des IVG. Le contrôle à 6 mois des patientes " HPV positives " et présentant un frottis normal montre que 70 % des 2èmes typages se négativent. Parmi les patientes restant " positives ", environ 70 % ont un frottis normal, 13 % un frottis d'ASCUS, 16 % un frottis de bas grade et 2 % un frottis de haut grade. L'utilisation du typage HPV oncogènes semble limitée, en dépistage primaire, par l'importance de son portage chez les patientes de moins de 30 ans et par le fait que ces infections sont le plus souvent transitoires. Cependant, l'évaluation et le triage des frottis d'ASCUS et de lésion de bas grade, et la surveillance des femmes positives à frottis normal semblent de bonnes indications du typage HPVAMIENS-BU Santé (800212102) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

La microglie dérivée de la moëlle osseuse dans la réponse au stress chez la souris (Travail réalisé à l'Université des Sciences Médicales de Shiga, Japon)

La microglie constitue une population cellulaire du système nerveux central (SNC) particulièrement étudiée ces dernières années. Elle interviendrait en effet dans diverses pathologies du SNC en régulant la réponse inflammatoire. Lors d un stimulus, la réaction des cellules microgliales résidentes s accompagne d une migration de monocytes adoptant les caractéristiques de la microglie. Cette nouvelle population microgliale a été observée dans des conditions de traumatisme cellulaire, d infection ou de maladie neurodégénérative. Dans ce travail, nous avons voulu étudier le rôle de la population microgliale issue de la moelle osseuse dans la réponse au stress. Des souris, préalablement transplantées avec une moelle osseuse marquée par la green fluorescent protein (GFP) ont été soumises à un stress par chocs électriques selon un schéma préalablement défini. Les techniques de microscopie confocale et d immunofluorescence ont été réalisées. Nous observons une augmentation significative de cellules issues de la moelle osseuse dans l hippocampe des souris stressées pendant cinq jours par rapport au groupe control (n=5). Cette population cellulaire exprime l antigène Iba1, marqueur de la microglie. Elle n exprime pas la glial fibrillary astrocytic protein (GFAP). Il existe une expression de cytokines pro-inflammatoires dans le groupe control uniquement. Enfin, cette population cellulaire microgliale issue de la moelle osseuse diminue pour revenir à un nombre normal après un mois sans stress. Nous mettons en évidence pour la première fois une migration dans l hippocampe de cellules issues de la moelle osseuse de souris soumises à un stress de cinq jours. Ces cellules adoptent les caractéristiques de la microglie. Les mécanismes à l origine de cette migration cellulaire restent peu connus et pourraient faire intervenir des molécules chemoattractives telles que la protéine 1 chemoattractive pour les monocytes (MCP-1 ou CCL2). Le rôle de cette nouvelle population microgliale reste à déterminerAMIENS-BU Santé (800212102) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Les tumeurs de l'ovaire border-line et malignes (un atlas sur CD-Rom)

La pathologie tumorale de l'ovaire est complexe. Les différentes lignées cellulaires dont sont issues les tumeurs, ont des origines embryologiques différentes. Des rappels d'anatomie, d'embryologie et d'histologie fonctionnelle permettront de montrer les différents aspects morphologiques, macroscopiques et histologiques des tumeurs border-line et malignes. La gestion de l'image par l'outil informatique est un exercice quotidien pour tous les praticiens. La réalisation de ce CD-ROM, renfermant une iconographie extensive, a pour but de faire circuler une information textuelle et visuelle d'utilité diagnostique et pédagogique entre pathologistes, cliniciens et étudiantsAMIENS-BU Santé (800212102) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Lésions glandulaires endocervicales (étude prospective de 150 cas d'immunomarquage de la P16)

Les lésions glandulaires endocervicales sont des entités controversées à la présentation clinique peu spécifique. De topographie haute et d'accès colposcopique plus délicat que les lésions exocervicales, elles touchent des patientes jeunes dont la préservation des fonctions cervicales est essentielle. Leur dépistage par les méthodes habituelles se heurte donc à des difficultés à la fois liées à leur topographie et à leur aspect histologique. La protéine p16INK4a appartient à la famille de régulateurs cellulaires au rôle anto-prolifératif. Le papillomavirus (HPV) a la propriété d'inactiver le gène de la p16, d'où résulte une prolifération cellulaire anarchique et une surexpression de la p16. 83 prélèvements comportent des lésions bénignes le plus souvent non marquées, hormis les oeufs de Naboth (33) et l'hyperplasie microglandulaire (8). Dans 124 cas il existe des lésions malpighiennes de haut grade, ou de carcinome mocroinvasif ou invasif. Le marquage souligne nettement l'extension aux collets glandulaires de ces lésions dans 76 cas, dont 26 de diagnostic strictement immunohistochimique. Dans 1 cas l'immunomarquage souligne une invasion débutante du chorion par la lésion malpighienne, passée inaperçue à l'examen conventionnel. L'immunomarquage confirme le diagnostic posé sur l'HPS de lésions dysplasiques endocervicales (3), d'AIS (2) et d'un adénocarcinome endocervical. 25 cas de dysplasie endocervicale sont de plus mis en évidence par la p16. En outre, on observe un marquage nucléaire le plus souvent isolé, à proximité ou à distance des lésions de CIN, de cellules endocervicales (79), ou exocervicales d'aspect normal, ou de cellules fusiformes dispersées dans le stroma, dont l'interprétation n'a pu être vérifiée. Cette technique contribue donc au diagnostic des lésions endocervicales débutantes, invasives ou non, ainsi qu'à celui des lésions intraépithéliales d'intégration délicate. Néanmoins une de ses faiblesses demeure son manque de spécificité puisqu'elle peut marquer des éléments dont l'origine virale n'est pas démontrée (restes mésonéphriques, oeufs de Naboth...).AMIENS-BU Santé (800212102) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

QUE SONT MES AMIS DEVENUS ?

AMIENS-BU Santé (800212102) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

La tumeur glomique (diagnostic et classification)

Objectif : Clarifier le diagnostic et la classification des tumeurs glomiques à partir d une série continue mono-centrique, après avoir montré et explicité les difficultés de leur diagnostic. Matériel et méthode : Il s agit d une étude rétrospective réalisée au Centre Hospitalier Universitaire d Amiens, dans le service d Anatomie et de Cytologie Pathologique (ACP) en 2010, à partir d une relecture des coupes histologiques et d une étude des dossiers cliniques et des comptes-rendus histopathologiques. Nous avons identifiés à partir de la classification diagnostique ADICAP utilisée par les services d ACP français 27 patients chez lesquels a été porté le diagnostic de tumeur glomique. Les mots clés utilisés pour rechercher les diagnostics dans ADICAP sont Tumeur glomique et Glomangiome qui sont les deux termes les plus employés dans la littérature. Nous avons exclu de l étude cinq patients (quatre femmes et un homme), soit que le dossier clinique n ait pas été retrouvé (un patient), soit qu il ne contenait pas d informations cliniques pertinentes (deux patients) ou encore que les coupes histologiques reçues pour demande d avis n étaient plus en notre possession (deux patients). La période d inclusion des patients s échelonne de mai 2000 à avril 2010. Résultats : Sur les 22 dossiers étudiés, 16 seulement sont des tumeurs glomiques soit 72,7%. Parmi ces 16 tumeurs glomiques, 13 sont des tumeurs glomiques solides (81,25%), deux sont des malformations glomuveineuses (12,5%) et une est un glomangiomyome (6,25%). Les 6 autres dossiers ne correspondent pas à des tumeurs glomiques (27,2%). Deux sont des tumeurs hemangiopericytoma-like des fosses nasales, un correspond à un angioléiomyome, un à un chémodectome, un à un bourgeon charnu et un à un naevus sous-unguéal situé à coté d un glomus neuro-vasculaire. Il existe deux types principaux de tumeur glomique, la tumeur glomique solide qui se présente sous la forme d un nodule douloureux unique, de taille inférieure à 1 cm et siégeant surtout au niveau des extrémités, en particulier dans la région péri-unguéale. Le sex-ratio est de 1 et son apparition est sporadique, en moyenne dans la quatrième décennie. Le traitement est toujours chirurgical avec un succès thérapeutique quasi constant (taux d échec de 5% dans la littérature) qui se manifeste par la disparition de la douleur. La malformation glomuveineuse, qui se présente sous la forme de multiples nodules bleu pourpre pouvant confluer pour former des bouquets lésionnels de plusieurs centimètres de diamètre est de siége variable. On note un caractère familial dans les deux tiers des cas et les lésions sont présentes à la naissance ou apparaissent dans la petite enfance, avec une tendance à croître en même temps que le patient. Le sex-ratio est de 1. Le traitement des plus grandes lésions est souvent chirurgical, les plus petites peuvent bénéficier d une sclérothérapie. Il existe dans notre étude deux cas classés tumeur glomique solide qui présentent un aspect histologique atypique où l on note la présence de nombreux vaisseaux dilatés et d un nombre plus faible de cellules glomiques. La lésion est superficielle, dans le derme réticulaire et profond. Cet aspect histologique concorde avec une présentation clinique elle aussi atypique, les lésions étant uniques, nodulaires mais molles et d apparition plus précoce que dans les autres cas. L ensemble de ces données évoque une tumeur mixte ou une forme de passage, associant des critères de tumeur glomique solide et de malformation glomuveineuse. Conclusions : Les critères diagnostiques des tumeurs glomiques sont connus depuis 1924 grâce aux travaux de Pierre Masson. Cependant, l identification de différents types de tumeur glomique est plus récente et a engendré une multitude de dénominations plus ou moins judicieuses et souvent facteur de confusion pour le praticien. Notre étude montre bien la confusion qui règne. Sur nos 22 dossiers, six diagnostics initiaux de tumeur glomique ont été infirmés après relecture des coupes histologiques et sur les seize dossiers de tumeurs glomiques restant, cinq utilisaient des termes non conformes à la classification actuelle, qui date de 2002. Quant au terme de malformation glomuveineuse, il a été introduit en 1996 dans la classification des malformations artério-veineuses de la Société Internationale pour l Etude des Anomalies Vasculaires (ISSVA). S il existe un temps de latence entre l apparition de nouveaux termes ou classifications et leur application par les médecins, cette phase d adaptation semble toujours en cours. Il convient d améliorer la qualité et la précision des diagnostics histologiques afin d assurer une prise en charge optimale.Objective: To clarify the diagnosis and classification of glomus tumors from a continuous mono-centric series, having shown and explained the difficulties of their diagnosis. Patients and Methods: This retrospective study was conducted at the Amiens s hospital, in the service of Pathological Anatomy and Cytology in 2010, from a rereading of histology and a study of clinical records and histopathological reports. We have identified from the diagnostic classification ADICAP used by the french pathological Anatomy ans cytology services 27 patients in whom the diagnosis of glomus tumor was increased. Keywords used to search for diagnostics in ADICAP are 'glomus tumor' and 'Glomangioma' which are the two words most used in the literature. We excluded from the study five patients (four women and one man), or that the clinical record was not found (one patient) or that did not contain relevant clinical information (two patients) or although histological application received for review were not in our possession (two patients). The period of inclusion of patients range from May 2000 to April 2010. Results: Of the 22 cases studied, only 16 are glomus tumors (72.7%). Among the 16 glomus tumors, solid glomus tumors are 13 (81.25%), glomuvenous malformation are two (12.5%) and one is a glomangiomyoma (6.25%). The other six files did not correspond to glomus tumors (27.2%). Two are hemangiopericytoma-like tumor of nasal passages, one corresponds to a angioleiomyoma, one to a chemodectoma , one to granulation tissue and one to a subungual naevus located next to a neuro-vascular glomus. There are two main types of glomus tumor, solid glomus tumor appears as a single painful nodule, smaller than 1 cm and serving mainly the extremities, especially in the periungual region. The sex ratio is 1 and its occurrence is sporadic, on average in the fourth decade. Treatment is always surgical with a virtually constant success (failure rate of 5% in the literature) which is manifested by the disappearance of pain. The glomuveinous malformation, which comes in the form of multiple blue nodules which may coalesce to form clumps lesion of several centimeters in diameter in variable seat. There is a family character in two-thirds of cases and the lesions are present at birth or appear during infancy, with a tendency to grow with the patient. The sex ratio is 1. Treatment of larger lesions is often surgery, the smallest can benefit from sclerotherapy. There are two cases in our study classified as solid glomus tumor, which are atypical histological where we note the presence of dilated vessels and a smaller number of glomus cells. The lesion is superficial, in the reticular and deep dermis. The histological appearance consistent with a clinical presentation also atypical. Lesions are unique, nodular, but soft and appear earlier than in other cases. All these data suggests a mixed tumor or a transitional form, combining criteria of solid glomus tumor and glomuveinous malformation. Conclusions: The diagnostic criteria of glomus tumors are known since 1924 thanks to the work of Pierre Masson. However, the identification of different types of glomus tumor is newer and has generated a multitude of names more or less relevant and often causes confusion for the practitioner. Our study demonstrates the confusion. Of our 22 cases, six initial diagnosis of glomus tumor have been overturned after review of histological sections and on the sixteen remaining cases of glomus tumors, five used of terms do not conform to the current classification, which dates from 2002. The term of Glomuveinous Malformation was introduced in 1996 in the classification of arteriovenous malformations of the International Society for the Study of Vascular Anomalies (ISSVA). If there is a lag time between the appearance of new terms or classifications and their use by physicians, this phase of adaptation seems ongoing. It should improve the quality and accuracy of histologic diagnosis to ensure optimal care.AMIENS-BU Santé (800212102) / SudocSudocFranceF

Expression des canaux potassiques (Kv1.3 et Hik1) et calciques (TRPM7 et TRPV6) au cours du cancer

Les cancers sont aujourd hui très fréquents en France et pour la plupart en constante augmentation. Ils représentent un problème majeur de santé publique. Depuis quelques années, de nombreuses études ont montré l implication des canaux ioniques potassiques (K+) et calciques (Ca2+) dans les mécanismes de prolifération, d apoptose et de cancérogénèse. Les canaux potassiques Hik1 et Kv1.3 et calciques TRPM7 et TRPV6 ont été particulièrement étudiés dans ce travail dans lequel nous avons cherché à étudier comment les cancers exprimaient ces canaux. Pour cela, la technique du tissue-micro-array nous a permis d étudier en immunohistochimie 25 cancers du sein et 25 échantillons tissulaires sains, 27 cancers de la prostate et 27 échantillons tissulaires sains, 27 cancers du poumon et 27 échantillons tissulaires sains, 27 cancers des VADS et 27 échantillons tissulaires sains, 27 cancers du colon et 31 à 36 échantillons tissulaires sains, 27 cancers du rein et 27 échantillons tissulaires sains, 35 mélanomes et 12 naevi, 19 cancers de l ovaire et 6 cystadénomes séreux , 20 glioblastomes et 19 échantillons tissulaires sains. Nos résultats mettent en évidence par rapport au tissu sain une augmentation d expression du canal TRPM7 dans les carcinomes épidermoïdes des VADS, les adénocarcinomes du poumon et de la prostate, une augmentation d expression du canal TRPV6 dans les adénocarcinomes du sein et de la prostate, une augmentation du canal Kv1.3 dans les carcinomes épidermoïdes des VADS, et une diminution d expression du canal Hik1 dans l adénocarcinome du sein. Pour les autres cancers, nous n avons pas trouvé de différence significative. Nos résultats ont permis d une part de confirmer certaines données décrites dans la littérature mais également d apporter d autre part de nouvelles données qui vont permettre d autres études complémentaires en biologie moléculaire (RT-PCR, Western-Blot ) et sur de plus grandes séries afin de conforter ces résultats et d entrevoir de nouvelles thérapeutiques telles que les thérapies ciblées.Cancers are very frequents in France today and they are for the greater part in constant increase. They represent a major problem of public health. For some years, many studies showed the implication of the potassium (k+) and calcic (Ca2+) channels in proliferation, apoptosis and carcinogenesis. The potassium and calcic channels were particularly studied in this work in which we tried to study how cancers expressed these channels. For it, the technique of the tissue- micro-array allowed us to study in immunohistochemistry 25 breast cancers and 25 healthy tissular samples, 27 prostate cancers and 27 healthy tissular samples , 27 lung cancers and 27 healthy tissular samples, 27 VADS cancers and 27 healthy tissular samples , 27 colon cancers and 31 to 36 healthy tissular samples , 27 kidney cancers and 27 healthy tissular samples, 35 melanomas and 12 naevi, 19 ovary cancers and 6 serous cystadenomas, 20 glioblastomas and 19 healthy tissular samples. Our results bring to light with regard to the healthy tissue an increase of expression of the channel TRPM7 in VADS squamous carcinoma, in lung and prostate adenocarcinomas, an increase of expression of the channel TRPV6 in breast and prostate adenocarcinomas, an increase of the channel Kv1.3 in VADS squamous carcinomas, and a decrease of expression of the channel hIK1 in breast adenocarcinomas. For other cancers, we did not find significant difference. Our results allowed to confirm certain data described in the litterature and to bring new data which are going to allow the other follow-up studies in molecular biology (RT-PCR, Western-Blot .) and on bigger series to consolidate these results and glimpse a new therapeutic as therapeutic targets .AMIENS-BU Santé (800212102) / SudocSudocFranceF