Confirmation of the Disulfide Connectivity and Strategies for Chemical Synthesis of the Four-Disulfide-Bond-Stabilized Aspergillus giganteus Antifungal Protein, AFP

Emerging fungal infections require new, more efficient antifungal agents and therapies. AFP, a protein from Aspergillus giganteus with four disulfide bonds, is a promising candidate because it selectively inhibits the growth of filamentous fungi. In this work, the reduced form of AFP was prepared using native chemical ligation. The native protein was synthesized via oxidative folding with uniform protection for cysteine thiols. AFP's biological activity depends heavily on the pattern of natural disulfide bonds. Enzymatic digestion and MS analysis provide proof for interlocking disulfide topology (abcdabcd) that was previously assumed. With this knowledge, a semi-orthogonal thiol protection method was designed. By following this strategy, out of a possible 105, only 6 disulfide isomers formed and 1 of them proved to be identical with the native protein. This approach allows the synthesis of analogs for examining structure-activity relationships and, thus, preparing AFP variants with higher antifungal activity

Confirmation of the Disulfide Connectivity and Strategies for Chemical Synthesis of the Four-Disulfide-Bond-Stabilized Aspergillus giganteus Antifungal Protein, AFP

Emerging fungal infections require new, more efficient antifungal agents and therapies. AFP, a protein from Aspergillus giganteus with four disulfide bonds, is a promising candidate because it selectively inhibits the growth of filamentous fungi. In this work, the reduced form of AFP was prepared using native chemical ligation. The native protein was synthesized via oxidative folding with uniform protection for cysteine thiols. AFP's biological activity depends heavily on the pattern of natural disulfide bonds. Enzymatic digestion and MS analysis provide proof for interlocking disulfide topology (abcdabcd) that was previously assumed. With this knowledge, a semi-orthogonal thiol protection method was designed. By following this strategy, out of a possible 105, only 6 disulfide isomers formed and 1 of them proved to be identical with the native protein. This approach allows the synthesis of analogs for examining structure-activity relationships and, thus, preparing AFP variants with higher antifungal activity

Az antipszichotikumok makrofágok funkcionális aktivitására gyakorolt hatása

Célom volt az atípusos antipszichotikumok hatásának vizsgálata humán monocita-makrofág differenciálódásra. Kísérleteim során használt gyógyszerek a Quetiapin, Aripiprasol, Ziprasidon, Risperidon, Clozapin és Olanzapin, a Haloperidol antipszichotikumok voltak. Vizsgáltam, hogy ezek a gyógyszerek befolyásolják-e a makrofágok fagocitózis képességét, citokin expresszióját és szuperoxid termelését. A monocitákat humán vérből izoláltam mágneses szeparálással, majd makrofág kolónia-stimuláló faktort (M-CSF) tartalmazó tápoldatban differenciáltattam, naponta ismétlődő, a klinikumban alkalmazott szérum koncentrációnak megfelelő antipszichotikum kezelés mellett. A fagocitózis képesség vizsgálatára humán vérből izolált apoptótikus neutrofil granulocitákkal végzett, áramlási citometriás meghatározáson alapuló fagocitózis mérést alkalmaztam. A makrofágok TNF-α szekrécióját, LPS stimulust követően szendvics ELISA módszerrel határoztam meg. A makrofágok PMA indukált szuperoxid termelését L-012 kemilumineszcenciás próba jelenlétében vizsgáltam. Eredményeim azt mutatják, hogy az in vivo kezelési koncentrációk mellett, az Olanzapin, Haloperidol és a Risperidon szignifikánsan csökkentette a makrofágok fagocitózis képességét apoptótikus neutrofilek iránt. Az LPS stimulust követően, a makrofág által szekretált TNF-α mennyiségét a gyógyszeres kezelés a legtöbb esetben csökkentette. Ugyanakkor a Haloperidol kivételével az antipszichotikumok fokozták a makrofágok PMA indukált szuperoxid termelését.MSc/MABiológu

Neutrofil granulociták génexpressziós mintázatának és proteom analízisének áttekintése

A neutrofil granulociták feladata a mikroorganizmusok fagocitózisa és elpusztítása,a fertőzések továbbterjedésének megakadályozásában fontos szerepet játszanak.BscBiológiag