Identification of Leukotoxin and other vaccine candidate proteins in a Mannheimia haemolytica commercial antigen

AbstractBovine Respiratory Disease is the most costly disease that affects beef and dairy cattle industry. Its etiology is multifactorial, arising from predisposing environmental stress conditions as well as the action of several different respiratory pathogens. This situation has hindered the development of effective control strategies. Although different type of vaccines are available, many currently marketed vaccines are based on inactivated cultures of the main viral and bacterial agents involved in this pathology. The molecular composition of commercial veterinary vaccines is a critical issue. The present work aims to define at the proteomic level the most relevant valence of a line of commercial respiratory vaccines widely used in Central and South America. Since Mannheimia haemolytica is responsible for most of the disease associated morbid-mortality, we focused on the main proteins secreted by this pathogen, in particular Leukotoxin A, its main virulence factor. By Western blot analysis and mass spectrometry, Leukotoxin A was identified as a major component of M. haemolytica culture supernatants. We also identified other ten M. haemolytica proteins, including outer membrane proteins, periplasmic transmembrane solute transporters and iron binding proteins, which are relevant to achieve protective immunity against the pathogen. This work allowed a detailed molecular characterization of this vaccine component, providing evidence of its quality and efficacy. Furthermore, our results contributed to the identification of several proteins of interest as subunit vaccine candidates

Primer aislamiento en Uruguay de Escherichia coli productora de toxina Shiga del serotipo O157:H7 en una niña con síndrome urémico hemolítico

En mayo de 2002 se aisló por primera vez en Uruguay Escherichia coli O157:H7, productora de toxina Shiga a partir del coprocultivo de una niña de 16 meses procedente de Melo, con diagnóstico de síndrome urémico hemolítico. La cepa, productora de toxinas Shiga tipo 2 y tipo 2 variante humana a, era genéticamente distinta de las cepas circulantes en Argentina

Shiga Toxin: Expression, Distribution, and Its Role in the Environment

In this review, we highlight recent work that has increased our understanding of the production and distribution of Shiga toxin in the environment. Specifically, we review studies that offer an expanded view of environmental reservoirs for Shiga toxin producing microbes in terrestrial and aquatic ecosystems. We then relate the abundance of Shiga toxin in the environment to work that demonstrates that the genetic mechanisms underlying the production of Shiga toxin genes are modified and embellished beyond the classical microbial gene regulatory paradigms in a manner that apparently “fine tunes” the trigger to modulate the amount of toxin produced. Last, we highlight several recent studies examining microbe/protist interactions that postulate an answer to the outstanding question of why microbes might harbor and express Shiga toxin genes in the environment

Comparative molecular study of Mycobacterium tuberculosis strains, in times of antimicrobial drug resistance

Strains of Mycobacterium tuberculosis were compared using two DNA fingerprinting techniques: Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) and Double-Repetitive-Element-PCR (DRE-PCR). Two of these strains: IH1 (susceptible to isoniazid) and IH2 (resistant to isoniazid) were recovered from cases of pulmonary tuberculosis which occurred in two brothers who lived together. The first one was recognized on July 1999, and the second was diagnosed one year later. IH1 and IH2 showed the same pattern of bands with both molecular tests. These results suggest that single drug chemoprophylaxis may occasionally select resistant strains for that drug, which can eventually cause disease and be recognized through these tests. Strains IH3, IH4 and IH5 were obtained from sputum samples of 3 different patients, and intra-laboratory cross-contamination was suspected when it was realized that the 3 positive materials had been consecutively processed the same day by the same worker in the same biological safety cabinet. Again, the 3 strains revealed identical band patterns with RFLP and DRE-PCR, confirming the posed suspicion. The results with DRE-PCR were obtained after only 8 hours of work, without the need for subcultures. This procedure allows quick correction of treatment conducts, avoiding unnecessary exposure of people and bacteria to antimicrobial drugs.<br>Se compararon cepas de Mycobacterium tuberculosis utilizando 2 procedimientos de ADN fingerprinting: polimorfismo de los fragmentos de restricción (RFLP) y Double-Repetitive-Element-PCR (DRE-PCR). Dos de las cepas: IH1 (susceptible a isoniazida) e IH2 (resistente a isoniazida) se recuperaron a partir de casos de tuberculosis pulmonar que ocurrieron en dos hermanos convivientes. La primera fue aislada en julio de 1999 y la segunda un año después. IH1 e IH2 mostraron el mismo patrón de bandas por ambos procedimientos. Estos resultados sugieren que la quimioprofilaxis con una sola droga puede ocasionalmente seleccionar mutantes resistentes, las cuales pueden causar enfermedad y ser reconocidas por estos procedimientos. Las cepas IH3, IH4 e IH5 fueron aisladas de 3 pacientes diferentes, y examinadas por probable contaminación cruzada dentro del laboratorio ya que fueron procesadas el mismo día, por el mismo operador y en la misma cabina de seguridad biológica. Nuevamente, las 3 cepas revelaron el mismo patrón de bandas por RFLP y por DRE-PCR, confirmando la sospecha. Los resultados de la DRE-PCR se obtuvieron luego de 8 horas de trabajo, sin necesidad de subcultivos. Esta técnica permitiría la rápida correción de pautas de tratamiento, evitando la exposición innecesaria de personas y bacterias a drogas antimicrobianas

Primer aislamiento en Uruguay de Escherichia coli productora de toxina Shiga del serotipo O157:H7 en una niña con síndrome urémico hemolítico

Fil: Gadea, María del Pilar. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Varela, Gustavo. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Bernadá, Mercedes. Facultad de Medicina. Clínica Pediátrica B; Uruguay.Fil: Sirok, Alfredo. Facultad de Medicina.Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Mota, María Inés. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Sabelli, Rosana. Centro Asistencial del Sindicato Médico del Uruguay. Clínica Pediátrica B; Uruguay.Fil: Grotiuz, Germán. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Schelotto, Felipe. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Chinen, Isabel. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.Fil: Chillemi, Germán. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.Fil: Rivas, Marta.ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.En mayo de 2002 se aisló por primera vez en Uruguay Escherichia coli O157:H7, productora de toxina Shiga a partir del coprocultivo de una niña de 16 meses procedente de Melo, con diagnóstico de síndrome urémico hemolítico. La cepa, productora de toxinas Shiga tipo 2 y tipo 2 variante humana a, era genéticamente distinta de las cepas circulantes en Argentina

Primer aislamiento en Uruguay de Escherichia coli productora de toxina Shiga del serotipo O157:H7 en una niña con síndrome urémico hemolítico

Fil: Gadea, María del Pilar. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Varela, Gustavo. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Bernadá, Mercedes. Facultad de Medicina. Clínica Pediátrica B; Uruguay.Fil: Sirok, Alfredo. Facultad de Medicina.Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Mota, María Inés. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Sabelli, Rosana. Centro Asistencial del Sindicato Médico del Uruguay. Clínica Pediátrica B; Uruguay.Fil: Grotiuz, Germán. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Schelotto, Felipe. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriología y Virología; Uruguay.Fil: Chinen, Isabel. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.Fil: Chillemi, Germán. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.Fil: Rivas, Marta.ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología. Servicio Fisiopatogenia; Argentina.En mayo de 2002 se aisló por primera vez en Uruguay Escherichia coli O157:H7, productora de toxina Shiga a partir del coprocultivo de una niña de 16 meses procedente de Melo, con diagnóstico de síndrome urémico hemolítico. La cepa, productora de toxinas Shiga tipo 2 y tipo 2 variante humana a, era genéticamente distinta de las cepas circulantes en Argentina