Uterus torsion in Nellore cow : case report

A torção de útero em bovinos é um caso de emergência obstétrica que, na maioria das vezes, leva à morte do feto e da mãe. O tratamento clínico é pouco eficaz e em grande parte dos casos a operação cesariana é indicada. O trabalho descreve o caso de uma vaca Nelore de 36 meses encaminhada ao Hospital Escola de Grandes Animais da Universidade de Brasília com torção uterina e sinais de toxemia. Após tentativas improdutivas de rolamento, o animal foi submetido à cesariana e veio a morrer durante o procedimento cirúrgico. Vários casos de torção de útero em bovinos são descritos em raças europeias, porém, pouco se conhece desse tipo de patologia em animais da raça Nelore. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTUterus torsion in cows is an emergency case that usually leads to foetus and cow death. Conservative management has low efficacy and cesarian surgery is indicated in the majority of the cases. The report describes the case of a 36-year-old Nellore cow taken to Hospital Escola de Grandes Animais of Universidade de Brasíla with uterus torsion and toxemia signs. After improductive rolling procedures, the animal was lead to a cesarian surgery and died during the procedure. Uterus torsion is described in european breeds, but this patology is not well-known in Nellore cattle

TORÇÃO DE ÚTERO EM VACA NELORE - Relato de caso

A torção de útero em bovinos é um caso de emergência obstétrica que, na maioria das vezes, leva à morte do feto e da mãe. O tratamento clínico é pouco eficaz e em grande parte dos casos a operação cesariana é indicada. O trabalho descreve o caso de uma vaca Nelore de 36 meses encaminhada ao Hospital Escola de Grandes Animais da Universidade de Brasília com torção uterina e sinais de toxemia. Após tentativas improdutivas de rolamento, o animal foi submetido à cesariana e veio a morrer durante o procedimento cirúrgico. Vários casos de torção de útero em bovinos são descritos em raças europeias, porém, pouco se conhece desse tipo de patologia em animais da raça Nelore. PALAVRAS-CHAVES: Cesariana, distocia, laparotomia, Nelore, obstetrícia

Post-hacthing culture of in vitro produced bovine embryos : morphologic and molecular aspects

Tese (Doutorado)—Universidade Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012.A avaliação de embriões produzidos in vitro (PIV) no estágio pós-eclosão é uma importante ferramenta para verificar a qualidade de embriões PIV. É justamente nessa fase, em que ocorre a maior perda embrionária. Para avaliar os embriões nesse estágio, esse trabalho propõe a utilização do sistema de cultivo pós-eclosão (PHD). Esse sistema é um método alternativo que pode auxiliar na avaliação do potencial de desenvolvimento dos embriões sem a necessidade de transferi-los para receptoras. Mas, para utilizar esse sistema na rotina é necessário verificar sua eficiência. Portanto, esse trabalho teve por objetivo avaliar a viabilidade do sistema PHD através de avaliações morfológicas e moleculares de embriões produzidos nesse sistema. Esse trabalho foi composto de três estudos. O primeiro visou validar o sistema PHD no laboratório e verificar o melhor protocolo para realizar esse sistema. Para isso, túneis de agarose foram construídos com água Milli-Q ou com solução fosfato salina (PBS) foram utilizados para o desenvolvimento dos embriões PIV. O segundo trabalho, após a escolha do melhor protocolo, objetivou avaliar o comportamento de embriões produzidos in vivo e in vitro de D7 cultivados no sistema PHD até D14. E finalmente, o último trabalho, verificou a eficiência do sistema PHD para o cultivo de embriões PIV até D14 comparado à transferência múltipla para o útero de receptoras. Durante o período de cultivo, os embriões foram mensurados e avaliados quanto à qualidade morfológica do trofoblasto e botão embrionário. Além disso, o perfil molecular foi avaliado pela quantificação da expressão de genes relacionado com qualidade do embrião, SLC2A1, SLC2A3, G6PD, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD , HSP70, IFNT, nos embriões de D7 e D14. Quanto ao primeiro trabalho observou-se que o melhor protocolo para o sistema PHD foi quando se utilizou a água Milli-Q para a construção dos túneis, pois nesse os embriões tiveram um maior crescimento durante o cultivo. No segundo, trabalho verificouse que apesar da baixa taxa de crescimento os embriões in vivo tiveram desenvolvimento semelhante no sistema PHD do que os in vitro. E quando se comparou os embriões totalmente in vitro com os totalmente in vivo, verificou-se que os in vitro eram menores, mas a maioria da expressão dos genes foi semelhante entre os grupos (SLC2A3, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSO , IFNT). E, no último trabalho, o principal resultado foi que os embriões in vitro cultivados até D14 no útero de receptoras foram semelhantes ao grupo controle (totalmente in vivo), mas esses dois tipos de embriões foram diferentes dos cultivados no sistema PHD, principalmente, em relação à porcentagem de embriões crescidos/recuperados, ao tamanho e a expressão gênica. Porém, verificou-se a possibilidade de embriões PIV se desenvolverem nos túneis de agarose. Concluiu-se que o sistema PHD ainda não está apto para se utilizado na rotina, principalmente, devido à baixa porcentagem de embriões que se desenvolvem. Portanto, investimentos em métodos para que ele se torne menos seletivo e dê condições para o desenvolvimento de embriões de boa qualidade que se desenvolveria normalmente em ambiente uterino seriam de grande valia. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThe evaluation of in vitro-produced embryos (IVP) in the post hatching stage is an important tool to verify the quality of IVP embryos, as is in this phase that most embryonic loss occurs. In the order to evaluate the embryos at this developemental stage, the present study proposes the use of the post-hatching development (PHD) system. This system is an alternative method which may help to evaluate the developmental potential of embryos without transfering them to a recipient’s uterus. However, to use this system routinely in the laboratory, it is necessary to verify its efficiency. Therefore, this study aimed to evaluate the viability of the PHD system using morphological and molecular evaluations of embryos produced in this system. This study was conducted in three different studies. The first was designed to validate the PHD system in the laboratory and to determine the best testing protocol. Agarose tunnels were subsequently constructed either with Milli-Q water or with phosphate buffer saline (PBS) and IVP embryo development was evaluated. Sencondly, after selecting the best protocol, we aimed to evaluate the behavior of in vivo and in vitro embryos in the PHD system from Day (D)7 through D14. Finally, in the third study, we verified the efficiency of the PHD system and multiple transfer protocol for culture IVP embryos until D14. During the culture period, embryos were measured and evaluated for morphological quality of the embryonic trophoblast and embryonic disc. The molecular profile was determined by quantification of the expression of genes related to embryo quality, such as SLC2A1, SLC2A3, G6PD, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD, HSP70, IFNT, in D7 and D14 embryos, using qPCR. In the first study, we concluded that the best protocol was when agarose tunnels were constructed with Milli-Q water, as embryos demonstrade a greater increase in size. In the second study, we found in vivo embryos presented a lower development rate in the PHD system, when compared morphologically to the in vitro embryos. On comparison of the completely in vitro embryos with completely in vivo embryos, it was found that in vitro embryos were smaller than the in vivo embryos, but most of the genes had similar expression between the groups (SLC2A3, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD, IFNT). In the last study, we concluded that IVP embryos cultured until D14 in a recipients uterus were similar to control group (completely in vivo), and both were different from embryos cultured in the PHD system. Although the PHD system is inefficient we demonstrated that it can be used to develop IVP embryos. It was concluded that the PHD system is not yet able to be routinely used, especially due to the low percentage of embryos that develop in it. Therefore, an investment into this method, it can become less selective and provide conditions for the develop of good quality embryos that would normally development in uterine conditions, would be of great value

Effect of different percoll procedures on sperm quality and in vitro production of bovine embryos

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009.Técnicas de preparação de sêmen são usualmente utilizadas na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos visando melhorar a qualidade espermática após o descongelamento. Dentre estas técnicas, a centrifugação em gradiente de Percoll tem sido a mais utilizada. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll nas características espermáticas, na produção e sexo de embriões bovinos. Foram descongeladas amostras de sêmen de quatro touros, que foram submetidas a três diferentes procedimentos no gradiente de Percoll : T1 – 4 mL (volume final) de Percoll 45%:90%, centrifugados por 20 minutos a 700 g; T2 – 800 μL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por 20 minutos a 700 g e T3 – 800 μL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por por 5 minutos a 5000 g. A avaliação espermática da motilidade, morfologia, integridade de acrossoma, membrana e cromatina, foi realizada antes e após a passagem pelo Percoll. Para a PIV foram utilizados 1194 ovócitos maturados in vitro, sendo a taxa de clivagem avaliada em D2 (48h) e a taxa de blastocisto avaliada no dia 7 após fecundação (D7). Os blastocistos em D7 (n=360) foram congelados para determinação do sexo. Os dados do desenvolvimento embrionário e avaliação espermática foram analisados pela ANOVA considerando o efeito de touro, tratamento e interação touro x tratamento (P0,05), entretanto, observou-se efeito de touro. A taxa de clivagem e blastocito também não foi afetada pelos tratamentos com o Percoll. Entretanto, foi observado diferenças entre touros (P0.05), however bull-related differences were observed in all parameters tested. Similarly, cleavage and blastocyst rate were not affected by Percoll procedure (P>0.05). However, there was a difference among bulls (P<0.05). Sire 4 had very low embryos production (n=5), and was eliminated from the analysis. Higher rates of cleavage and blastocyst were observed for bull 1 (86 ± 1.6 a % and 47 ± 2.6 c%) and bull 2 (86 ± 2.1a % and 39 ± 6.6c %) showed than for bull 3 (65 ± 5.9b % and 17 ± 4.1d %). The proportion of male:female embryos was similar in all treatments for bulls 2 and 3. Only bull 1 in the T1 presented a greater percentage of male (61%) than female embryos (39%). When only treatments were considered, independent of bulls, no difference was found in proportion male:female (%) among T1 (55:45), T2 (45:55) and T3 (44:56). The results showed that the use of different speed, time of centrifuge and volume of Percoll gradient did not influence the rate of blastocyst and the male:female ratio. However, for bull 1 it was observed a higher production of male embryos when T1 was used. These results suggest the possibility of using a lower volume of Percoll for a shorter period of time, thus reducing the cost and time to perform the in vitro fertilization

Cultivo in vitro de folículos pré-antrais isolados a partir de ovários de vacas zebuínas (Bos taurus indicus)

Dentre as biotecnologias da reprodução, a manipulação de folículos pré-antrais tem sido vista como uma alternativa para a preservação de gametas femininos, uma vez que possibilita o isolamento e o cultivo de um grande número de ovócitos. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar o crescimento in vitro de folículos isolados a partir de ovários de vacas zebuínas. Os folículos foram isolados mecanicamente e cultivados por 4 dias utilizando-se o meio Waymouth MB 752/1 suplementado com piruvato, l-glutamina, hipoxantina, insulina, transferrina, selênio, ácido ascórbico, soro fetal bovino e eCG. Após o período de cultivo, os folículos passaram de 61,0 ± 18,5 (D0) para 86,2 ± 29,6 mm (D4) de diâmetro. Dos 78 folículos pré-antrais analisados 83,5% apresentavam-se morfologicamente normais no último dia de cultivo, enquanto 11,5% mostravam-se degenerados e 5% rompidos. Um total de 23 folículos foi processado para análise por microscopia de luz. Pela observação de figuras mitóticas constatou-se que 47,8% dos folículos apresentavam proliferação das células da granulosa. Em conclusão, este estudo mostrou que folículos pré-antrais isolados a partir de ovários de vacas zebuínas podem crescer in vitro.Dentre as biotecnologias da reprodução, a manipulação de folículos pré-antrais tem sido vista como uma alternativa para a preservação de gametas femininos, uma vez que possibilita o isolamento e o cultivo de um grande número de ovócitos. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar o crescimento in vitro de folículos isolados a partir de ovários de vacas zebuínas. Os folículos foram isolados mecanicamente e cultivados por 4 dias utilizando-se o meio Waymouth MB 752/1 suplementado com piruvato, l-glutamina, hipoxantina, insulina, transferrina, selênio, ácido ascórbico, soro fetal bovino e eCG. Após o período de cultivo, os folículos passaram de 61,0 ± 18,5 (D0) para 86,2 ± 29,6 mm (D4) de diâmetro. Dos 78 folículos pré-antrais analisados 83,5% apresentavam-se morfologicamente normais no último dia de cultivo, enquanto 11,5% mostravam-se degenerados e 5% rompidos. Um total de 23 folículos foi processado para análise por microscopia de luz. Pela observação de figuras mitóticas constatou-se que 47,8% dos folículos apresentavam proliferação das células da granulosa. Em conclusão, este estudo mostrou que folículos pré-antrais isolados a partir de ovários de vacas zebuínas podem crescer in vitro

Characterisation of the methylation pattern in the intragenic CpG island of the IGF2 gene in Bos taurus indicus cumulus cells during in vitro maturation

The aim of this study was to characterise the methylation pattern in a CpG island of the IGF2 gene in cumulus cells from 1-3 mm and a parts per thousand yenaEuro parts per thousand 8.0 mm follicles and to evaluate the effects of in vitro maturation on this pattern.Genomic DNA was treatment with sodium bisulphite. Nested PCR using bisulphite-treated DNA was performed, and DNA methylation patterns have been characterised.There were no differences in the methylation pattern among groups (P > 0.05). Cells of pre-IVM and post-IVM from small follicles showed methylation levels of 78.17 +/- 14.11 % and 82.93 +/- 5.86 %, respectively, and those from large follicles showed methylation levels of 81.81 +/- 10.40 % and 79.64 +/- 13.04 %, respectively. Evaluating only the effect of in vitro maturation, cells of pre-IVM and post-IVM COCs showed methylation levels of 80.17 +/- 12.01 % and 81.19 +/- 10.15 %.In conclusion, the methylation levels of the cumulus cells of all groups were higher than that expected from the imprinted pattern of somatic cells. As the cumulus cells from the pre-IVM follicles were not subjected to any in vitro manipulation, the hypermethylated pattern that was observed may be the actual physiological methylation pattern for this particular locus in these cells. Due the importance of DNA methylation in oogenesis, and to be a non-invasive method for determining oocyte quality, the identification of new epigenetic markers in cumulus cells has great potential to be used to support reproductive biotechniques in humans and other mammals