Análise da variação somaclonal em mudas micropropagadas de Musa acuminata cultivar Grande Naine por meio de marcadores RAPD

Banana plants were regenerated using tissue culture of top buds from Cavendish plants, cultivar Grande Naine, maintained under ten successive cultivations in different culture media. The genomic DNA was extractedfrom the original matrix plant rhizoms, also from the dwarf mutant ones, variegated plants and from the plants originated from the five and ten successive in vitro cultivations. The Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) analysis was carried out using 20 primers, having two of them (10%) shown polymorphism among the dwarf and variegated plants in relation to the normal plants. The OPJ-04 primer has amplified two fragments of approximately 1.5 and 2.0kb present in the normal plants, but absent in the dwarf ones. The OPH-09 primer, however, presentedan amplification of approximately 1.7kb fragment, present in both dwarf and in the variegated plants, but absent in the normal ones. This study shows that using the RAPD molecular marker makes it is possible to detect induced somaclonal variation through micropropagation in banana plants.Plantas de banana foram regeneradas através da cultura de tecidos a partir de gemas apicais de bananeira Cavendish, cultivar Grande Naine, e mantidas por dez subcultivos em diferentes meios de cultura. O DNA genômico foi extraído a partir de rizomas das plantas matrizes originais, das plantas mutantes anãs e variegadas oriundas do cultivo in vitro e das plantas provindas de cinco e dez subcultivos. A análise, Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) foi realizada utilizando-se 20 “primers” (iniciadores – sequência conhecida de nucleotídeos3), dois dos quais (10%) revelaram polimorfismo entre as plantas anãs e variegadas em relação às plantas normais. Com a utilização do “primer” OPJ-04, foram amplificados, nas plantas normais, dois fragmentos de aproximadamente 1,5 e 2,0kb (quilobase, mil pares de bases) os quais estavam ausentes nas plantas anãs. Já o “primer” OPH-09 apresentou aamplificação de uma banda de aproximadamente 1,7kb presente tanto nas plantas anãs quanto nas variegadas, mas ausente nas plantas normais. Neste estudo, mostrou-se que através do uso de marcador molecular RAPD é possível detectar variação somaclonal surgida durante o processo de micropropagação nos mutantes

Regeneração de plântulas de Eucalyptus grandis a partir de organogênese direta in vitro

Eucalyptus grandis is one of the most cultivated forestry species in Brazil due to its fast growth andgood timber quality. With the objective of cloning E. grandis for seedling production, this study aimed to improve the micropropagation protocol by direct organogenesis. Micro cuttings from in vitro germinated seedlings wereinoculated in culture medium with different levels of growth regulators during the multiplication and rooting stages. During the multiplication stage, the addition of growth regulators did not promote significant increase inbud number and height when compared to the control. Addition of ANA and IBA to the medium promoted higher rate of rooting and growth of roots, but an increase in concentration from 0,5 to 1mg/L of these growth regulatorsreduced the root growth. The results of this study evidenced the possibility of micropropagation of Eucalyptus grandis by in vitro direct organogenesis.O Eucalyptus grandisé a espécie florestal que está entre as mais cultivadas no Brasil devido a seu rápido crescimento e por apresentar alta qualidade da madeira. Com o objetivo de clonar o E. grandis para a produção de mudas, este trabalho propôs melhorar o protocolo de micropropagação por organogênese direta. Segmentos nodais das plântulas germinadas in vitro foram inoculados em meio de cultura com diferentes níveis de reguladores de crescimento na fase de proliferação e enraizamento. Na fase de proliferação, a adição de reguladores de crescimento não promoveu aumento significativo quanto ao número e à altura de brotos em comparação ao meio de cultura ausente de reguladores. O efeito da adição de ANA e AIB ao meio de culturapromoveu elevada taxa de enraizamento e crescimento das raízes, porém o aumento da concentração de 0,5 para 1mg/L destes reguladores reduziu o crescimento das raízes. Os resultados deste trabalho evidenciam a possibilidade de micropropagação de Eucalyptus grandis a partir de organogênese direta

Otimização do protocolo de micropropagação por organogênese indireta de Eucalyptus grandis

The present work had the objective of improving the micro propagation protocol by indirect organogenesis Otimização do protocolo de micropropagação por organogênese indireta de Eucalyptus grandis Optimization of micro propagation protocol by indirect organogenesis of Eucalyptus grandis Rafael Augusto Arenhart1, Gilmar Roberto Zaffari2 Recebido em 08/03/2007; aprovado em 11/07/2008. of Eucalyptus grandis. This species has high agronomic and biotechnological interest, triggering gene insertion studies to obtain better quality plants. Exogenous genes can be inserted in callus tissues that must be regenerated to obtain modified plants. Leaf explants and micro cuttings obtained from germinated seedling of E. grandis were inoculated in culture medium with different levels of growth regulators in the callus induction and bud regeneration stages. Callus induction and formation in leaf explants occurred in 100 % of samples when cultured in medium with 2,4- D and in medium with combined TDZ and ANA. The absence of Fe-EDTA did not influence the intensity of callus formation in the explants. Induction and callus formation from micro cuttings occurred in 100 % of explants when cultured in medium with TDZ alone and combined with AIA. Bud regeneration of E. grandis has been induced in the presence of BAP alone and or combined with ANA and GA3 in culture medium.O presente trabalho objetivou aprimorar o protocolo de micropropagação por organogênese indireta de Eucalyptus grandis. Esta espécie é de grande interesse agronômico e biotecnologico, onde se estuda a inserção de genes exógenos para obtenção de plantas com maior qualidade. A inserção de genes pode ser realizada em tecidos desdiferenciados que devem ser regenerados para a obtenção das plantas modificadas. Explantes foliares e segmentos nodais, obtidos a partir de plântulas de E. grandis germinadas in vitro, foram inoculados em meios de cultura com diferentes níveis de fitoreguladores na fase de indução de calo e regeneração de brotos. A indução e formação de calo a partir de folhas ocorreram em 100% dos explantes quando cultivados em meio com 2,4-D e meio com TDZ e ANA combinados. A ausência de Fe-EDTA ao meio não influenciou a intensidade de formação de calo nos explantes. A indução e formação de calo a partir de segmento nodal ocorreram em 100% dos explantes quando cultivados em meio com TDZ isolado e combinado com AIA. A regeneração de brotos de E. grandis a partir de calo foi induzida quando da presença de BAP isolado e ou combinado com ANA e GA3 no meio de cultura

Propagação clonal de cultivares de Citrus sp. pelo cultivo direto de meristemas in vitro

In order to increase the effectiveness of in vitro production of virus-free citrus seedlings, we assessed the effect of composition of different culture media on the development of shoot Apex meristem. The meristem were extracted, disinfected and inoculated in MS medium added with different combinations and concentrations of growth regulators. The best genotypeculture medium interaction was considered when the meristem obtained probability of developing greater than 0.75. The media culture that promoted best response had in its composition the presence of at least two (ANA and GA3; BAP and GA3; BAP and ANA) or the three growth regulators at low concentrations. Callus formation from the meristem was observed in all cultivars. The highest survival rate of meristem occurred in culture media with 0.5mg/L of ANA and 0.25 and 0.50mg/L of GA3. Direct cultivation of citrus did not prove to be promising. However, a suitable signal in the culture medium was settled to induce the early development of the shoots and callus differentiation in meristematic cells.Com objetivo de aumentar a eficácia da produção in vitro de mudas de citros livres de vírus, avaliou-se o efeito da composição de diferentes meios de cultura sobre o desenvolvimento de meristemas de ápices caulinares. Os meristemas foram extraídos, desinfestados e inoculados em meio MS adicionado de diferentes combinações e concentrações de reguladores de crescimento. A melhor interação genótpo-meio de cultura foi considerada quando os meristemas obtveram probabilidade dedesenvolvimento maior que 0,75. Os meios de cultura que promoveram melhor resposta tinham em sua composição a presença de pelo menos dois (ANA e GA3; BAP e GA3; BAP e ANA) ou os três reguladores de crescimento em baixas concentrações. A formação de calos a partr dos meristemas foi observada em todos os cultvares. A maior taxa de sobrevivência de meristemas ocorreu nos meios de cultura com 0,5mg/L de ANA e 0,25 e 0,50mg/L de GA3. O cultivo direto de meristemas de citros não mostrou ser promissor. Entretanto, estabeleceu-se uma sinalização adequada no meio de cultura para induzir o início dodesenvolvimento da parte aérea e a diferenciação de calos nas células meristemátcas

Indução e desenvolvimento de bulbos de alho in vitro por meio da vernalização de bulbilhos e da variação do fotoperíodo

In vitro morphogenesis of garlic plants (Allium sativum L.) is controlled by substances added to culture media and by environmental factors. The objective of this study was to assess the effects of vernalization of bulbils and of photoperiod on the process of in vitro induction of garlic bulbs. Shoot meristems were excised from bulbils vernalized for periods of 0, 30, 60 and 90 days and cultivated in vitro either under conditions of short photoperiod (11h) or long photoperiod (16h). Regardless of the photoperiod they were exposed to, plants micropropagated from meristems extracted from those bulbils vernalized for 30 or 60 days showed a rate of bulbing of 100%. Interaction between photoperiod and temperature was detected only in bulb fresh weight and plant height, thus showing the dependence between these environmental factors in the micropropagation of garlic. The time of exposure of plants to cold decreases the sensitivity to photoperiod for bulbing induction. Garlic plants grown in vitro present morphogenetic answers to the induction and development of thermo and photoperiod-dependent bulbils.A morfogênese de plantas de alho (Allium satvum L.) in vitro é controlada por substâncias adicionadas ao meio de cultivo e por fatores ambientais. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da vernalização de bulbilhos e do fotoperíodo no processo de indução de bulbos de alho in vitro. Meristemas caulinares foram excisados de bulbilhos vernalizados por períodos de zero, 30, 60 e 90 dias e submetdos ao cultvo in vitro sob condições de fotoperíodo curto (11h) ou longo (16h). Independentemente do fotoperíodo a que foram expostas, as plantas micropropagadas a partr de meristemas extraídos de bulbilhos vernalizados por 30 a 60 dias apresentaram 100% de taxa de bulbifcação. Detectou-se interação entre fotoperíodo e temperatura apenas para massa fresca de bulbo e para altura de plantas, indicando, portanto, que há dependência entre essesfatores ambientais na micropropagação do alho. O tempo de exposição das plantas ao frio reduz a sensibilidade ao fotoperíodo para a indução da bulbifcação. As plantas de alho cultvadas in vitro apresentam respostas morfogenétcas positvas para a indução e o desenvolvimento de bulbos do tpo dependende de termofotoperíodo

Search for alkaloids on callus culture of Passiflora alata

Preliminary work on Passiflora alata leaves failed to detect harmane alkaloids using LC. The aim of this work was to investigate the production of harmane alkaloids through the cell culture of P. alata, inducing its precursor (L-tryptophan). The leaf explants presented satisfactory results after disinfection, and the callus formation was initiated in MS media with adequate quantities of phytohormones. Sixty days after inoculation, calli were inoculated in the optimized semi-solid MS media, with and without the addition of L-tryptophan (50, 100, 200 mg/L) and kept in standard conditions for 90 days. Calli were collected on days 6, 16, 26, 36, and 90, followed by acid-base extraction, and analysed by LC. The results showed an absence of harmane, harmin, harmol, harmalol, and harmaline. With L-tryptophan feeding, two peaks were detected, collected and analysed through positive mode electrospray [ESI(+)-MS] and sequential analysis in tandem ESI(+)-MS/MS. The spectra obtained were very similar, with a repetition of the more intense ions, and consecutive loss of 68 Da units, attributed to the heterocycle pyrazole. It appeared that this transformation was not related to any enzymatic pathway previously described for the plant from L-tryptophan, and the biosynthesis of β-carboline alkaloids in callus culture of P. alata were not observed in this work.As folhas de varias espécies de Passiflora são utilizadas como ansioliticas e sedativas. Passiflora alata Curtis, Passifloraceae consta em três edições da farmacopéia brasileira, porem não há muitos estudos sobre sua composição química. No passado, enfatizava-se a ação conjunta de alcalóides e flavonóides. Em trabalho anterior, não foi detectada a presença de alcalóides harmanicos através de CLAE. Assim, decidiu-se investigar a produção dos mesmos através de cultivo celular, introduzindo seu precursor metabólico L-triptofano. Os explantes foliares apresentaram resultados satisfatorios para germinação apos assepsia, e a formação de calo foi iniciada em meio MS com quantidades adequadas de fitohormonios, previamente determinadas. Sessenta dias após a inoculação os calos foram repicados para meio semi-solido com e sem L-triptofano (50, 100, 200 mg/L), mantidos por 90 dias em condições padrão. Amostras foram coletadas com 6, 16, 26, 36, e 90 dias, realizada extração acido-base e o extrato analisado por CLAE. Os resultados mostraram a ausência de harmana, harmina, harmol, harmalol e harmalina. Dois picos presentes nas amostras com L-triptofano foram coletados e analisados através de espectrometria de massas, electrospray modo positiva [ESI(+)-MS] e analise em tandem ESI(+)-MS/MS. Os espectros correspondentes foram similares, mostrando a perda consecutiva de 68 Da, atribuídos ao pirazol. Este fato aponta para uma transformação não enzimática, não relacionada a uma biossintese previamente descrita para alcalóides β-carbolínicos.90191

Novos cultivares de batata: SCS376 Joaquina para cultivo orgânico e SCS377 Paulina para cultivo convencional

Resumo – Os principais cultvares de batata plantados em Santa Catarina e no Brasil foram desenvolvidos na Europa em condições climátcas diferentes das encontradas no Sul do Brasil. O mercado brasileiro de batata in natura valoriza muito a aparência dos tubérculos com formato alongado, graúdos, casca lisa, gemas raras e polpa amarela ou creme. Os novos cultvares de batata precisam manter este padrão, associado à alta produtvidade, boa qualidade culinária e comercial e com resistência às principais doenças. Os cultvares SCS376 Joaquina e SCS377 Paulina foram selecionados na Epagri/Estação Experimental de São Joaquim e avaliados em São Joaquim, SC e Ituporanga, SC, nos testes de VCU/MAPA (valor de cultivo euso), sob diferentes condições edafoclimátcas e épocas de cultvo. Com base nas característcas apresentadas e nos resultados obtidos, o cultvar SCS376 Joaquina é indicado para cultivo em sistemas orgânicos e o cultvar SCS377 Paulina para cultvo em sistemas convencionais.Abstract– The main potato cultivars planted in Santa Catarina State and Brazil were developed in Europe under different climatic conditions from those found in southern Brazil. The Brazilian table potato market highly values the appearance of tubers with elongation, large shape, smooth skin, shallow eyes and yellow or cream flesh. The new potato cultivars need tomaintain this pattern, associated with high yields, good culinary and commercial qualities and resistant to major diseases. The objective of this work is to present the new potato cultivars SCS376 Joaquina and SCS377 Paulina. These cultvars were selected at the Epagri/São Joaquim Experimental Station and evaluated in São Joaquim and Ituporanga, SC, Brazil, in the VCU/MAPA tests (official tests), under different soil and climate conditions and growing seasons. Based on the characteristics presentedand results obtained, the cultvar SCS376 Joaquina is indicated for cultivation in organic systems and the cultvar SCS377 Paulina for cultivation in conventional systems