PCR with Paracoccidioides brasiliensis specific primers: potential use in ecological studies PCR com «primers» específicos de Paracoccidioides brasiliensis: uso potencial em estudos ecológicos

The precise microenvironment of Paracoccidioides brasiliensis has not yet been discovered perhaps because the methods used are not sensitive enough. We applied to this purpose the polymerase chain reaction (PCR) using three sets of specific primers corresponding to two P. brasiliensis genes. This fungus as well as several other fungi, were grown and their DNA obtained by mechanical disruption and a phenol chloroform isoamylalcohol-based purification method. The DNA served for a PCR reaction that employed specific primers from two P. brasiliensis genes that codify for antigenic proteins, namely, the 27 kDa and the 43 kDa. The lowest detection range for the 27 kDa gene was 3 pg. The amplification for both genes was positive only with DNA from P. brasiliensis; additionally, the mRNA for the 27 kDa gene was present only in P. brasiliensis, as indicated by the Northern analysis. The standardization of PCR technology permitted the amplification of P. brasiliensis DNA in artificially contaminated soils and in tissues of armadillos naturally infected with the fungus. These results indicate that PCR technology could play an important role in the search for P. brasiliensis’ habitat and could also be used in other ecological studies.<br>O microambiente adequado do Paracoccidioides brasiliensis não foi ainda bem esclarecido, talvez porque os métodos utilizados não sejam suficientemente sensíveis. Aplicamos com este propósito, a reação em cadeia da polimerase (PCR) usando três jogos de primers específicos do P. brasiliensis, correspondendo a dois dos genes do P. brasiliensis. Este fungo, assim como outros fungos, foram cultivados e seus DNAs obtidos por ruptura mecânica e purificados com mistura de fenol-clorofórmio com álcool isoamílico. Os DNAs serviram para a reação de PCR utilizando-se primers específicos para dois dos genes do P. brasiliensis que codificam para as proteínas antigênicas, denominadas, 27 kDa e 43 kDa. O limite mínimo de detecção para o gene 27 kDa foi de 3 pg. A amplificação para os dois genes foi positiva só com o DNA do P. brasiliensis; além disso, o mRNA para o gene de 27kDa estava presente apenas no material do P. brasiliensis, como mostrado pela análise por Northern-blot. A padronização da técnica do PCR permitiu a amplificação do DNA do P. brasiliensis em solos contaminados artificialmente com o fungo e em tecidos de tatus infectados na natureza. Estes resultados indicam que a técnica do PCR podería ter um papel muito importante na pesquisa do habitat do P. brasiliensis e, além disso, podería ser utilizada em outros estudos ecológicos

Efeito da densidade de povoamento na produtividade final em carpas (Cyprinus carpio var specularis) em fase de engorda, durante o verão Effect of population density on the productivity of carp (Cyprinus carpio var specularis), in the fattening stage, during the summer

O objetivo desta pesquisa foi estudar o efeito da densidade de povoamento na produtividade final, em carpas na fase de engorda, no período de verão. O delineamento foi inteiramente casualizado com três tratamentos (1; 0,5; e 0,33 peixes/m²) e três repetições. Os peixes foram estocados com peso e comprimento médios de 2,40 g e 5,35; 5,40 e 5,39 cm, respectivamente, nos tratamentos 1, 2 e 3, com 45 dias de idade. As dietas foram formuladas com 27% PB e 2925 kcal/kg de ração, sendo fornecidas diariamente, na quantidade de 3% do peso vivo. O comportamento dos tratamentos foi estudado por intermédio da análise de regressão. Os resultados para o comprimento e peso dos peixes foram 25,68; 28,66; e 31,21 cm e 255,00; 424,00; e 519,66 g, respectivamente. Os tratamentos 1 e 3 apresentaram modelo de regressão linear diferente do tratamento 2, que apresentou modelo quadrático. Na biomassa total, os resultados foram 1881; 1512; e 1302 kg/ha/período e os modelos de regressão significativos para os tratamentos 1e 3 foram lineares e para o tratamento 2 quadrático. A conversão alimentar apresentou modelo de regressão linear para todos tratamentos. Em condições similares, podem-se recomendar todas densidades sugeridas, com base na produção final e sobrevivência.<br>This study aimed to evaluate impact of stocking density on final productivity in the production of mirror common carp in fattening stage, during the summer. A completely randomized design with three treatments (1, .5, .33 fishes/m²) and three replicates was used. The fish were stocked with an average weight of 2.40 g and average length of 5.35, 5.40 and 5.39 cm, respectively, in the treatments 1, 2 and 3, with 45 days of age. The diets were formulated with 27% CP and 2925 kcal/kg of diet and supplied daily at a rate of 3% of body weight. Regression analysis was used to evaluate the behavior of each treatment. For the fish lengths, the results were 25.68, 28.66 and 31.21 cm, respectively. For the fish weights, the results were 255.00, 424.00, and 519.66 g. The treatments 1 and 3 showed a linear regression model, different from the treatment 2, that showed quadratic model. In the total biomass, the results were 1881, 1512 and 1302 kg/ha•period and the significant regression model were linear for treatments 1 and 3 and quadratic for treatment 2. The feed: gain showed a linear regression model for all treatments. In similar condition, it could be recommended all suggested densities, based on the final production and survival