Análise proteômica de tecido mamário não tumoral em pacientes com câncer de mama

Resumo: O tecido mamário é controlado por um sistema complexo, envolvendo hormônios, que atuam através de seus receptores, e diversos fatores locais. As estruturas anatômicas do tecido mamário podem ser modificadas devido a fatores como a multiparidade, idade, estado pré-menstrual e terapia de reposição hormonal. Portanto, compreender os fatores e mecanismos que regulam as mudanças dependentes de hormônios no tecido mamário é crucial, pois alterações na estrutura da mama e suas funções durante o ciclo menstrual podem predispor este tecido ao desenvolvimento de doenças mamárias, incluindo o câncer. O câncer de mama é o tipo mais comum de câncer em mulheres. É o quinto tipo de câncer em mortalidade no mundo, devido principalmente pela detecção no estágio avançado da doença. A abordagem proteômica é um campo promissor que possui diversas aplicações potenciais, incluindo a identificação de biomarcadores para o diagnóstico, o prognóstico e a terapêutica. O objetivo deste estudo foi a análise proteômica de tecido mamário não tumoral de seis pacientes acometidas pelo câncer de mama, obtendo informações para a caracterização deste tecido e fornecendo dados para a análise comparativa com tecido de carcinomas mamários. A análise dos géis bidimensionais foi realizada no programa ImageMasterTM 2D Platinum v6.0. Setenta bandas foram removidas manualmente, digeridas in gel e submetidas à identificação por PMF na plataforma MASCOT. Esta identificação resultou em 44 proteínas diferentes distribuídas em nove categorias: Citoesqueleto e proteínas associadas (29%); Proteínas com funções de ligação (27%); Enzimas metabólicas (11%); Chaperonas moleculares / proteínas heat shock (7%); Detoxificação e proteínas redox (5%); Proteínas membrana-associadas com múltiplas atividades (5%); Crescimento celular e reguladores de proliferação (5%); Degradação protéica (2%); e Proteínas com outras funções (9%). Algumas destas proteínas têm função no controle da proliferação celular e adesão, podendo atuar na tumorigênese quando sua expressão é alterada. Portanto, a análise comparativa não deve se limitar ao estudo das proteínas expressas isoladamente em um dos tecidos, mas também considerar a variação da sua expressão. Estas informações são importantes para a caracterização do proteoma do tecido mamário não tumoral e posterior análise comparativa com tecido de carcinoma mamário

Análise comparativa de expressão proteica entre amostras tumorais e não tumorais de carcinomas mamários

Orientadora : Profª Drª Enilze Maria de Souza Fonseca RibeiroCo-orientador : Prof. Dr.Iglenir João CavalliTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 26/06 2015Inclui referências : f. 89-119Resumo: O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum entre as mulheres e cerca de 57.000 novos casos são esperados para a população brasileira em 2015. Um conhecimento sólido sobre a expressão proteica é essencial para a compreensão biológica, diagnóstico precoce e tratamento do câncer de mama. Os principais objetivos deste trabalho foram identificar proteínas diferencialmente expressas entre amostras pareadas de carcinoma ductal invasivo e tecido não tumoral de mama, e na seleção de possíveis alvos, avaliar e comparar a expressão de RNAm e proteica de STIP1 entre amostras de tecido de mama tumoral, não tumoral e de linfonodo metastático. A análise proteômica comparativa foi realizada pelo método de eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida para cinco amostras pareadas, sendo consideradas apenas as bandas com diferença de expressão acima de duas vezes (p<0,05). As proteínas foram identificadas por espectrometria de massa (MALDI-TOF). A expressão de RNAm foi avaliada por PCR quantitativa em tempo real utilizando 53 amostras de tumor e oito de linfonodos metastáticos. Oito trios de amostras de tecido não tumoral, tumoral e linfonodo metastático tiveram a expressão de STIP1 comparada por western blotting (WB). A análise proteômica gerou 35 proteínas identificadas presentes em pelo menos duas amostras e, entre estas, as dez com maior variação de expressão foram: CASPE, ENOG, TPM1, CAPG, VIME, TPM3, TRFE, PDIA6, WDR61 e PDIA3. A expressão de RNAm de STIP1 foi maior na amostra de tumor em relação ao tecido não tumoral e ao linfonodo, enquanto a análise por WB mostrou aumento significante de expressão apenas entre tecido tumoral e não tumoral. Neste trabalho, identificamos mais de uma centena de proteínas diferencialmente expressas entre o tecido mamário não tumoral e tumoral, sendo muitas delas com participação já conhecida no câncer de mama enquanto outras ainda carecem de mais estudos. Entre elas encontra-se a proteína STIP1. A expressão de RNAm de STIP1 se mostrou aumentada nas amostras de tumor e linfonodo em relação ao controle não tumoral. Também houve aumento em nos linfonodos em relação aos tumores, mas não houve diferença significativa em relação a quaisquer outros parâmetros avaliados. STIP1 apresentou um aumento de expressão significativo no tecido tumoral em relação ao tecido não tumoral, mas não houve diferença na expressão de amostras de tumor e linfonodo metastático em análise por WB. Esses dados preliminares sugerem o aumento de expressão de STIP1 já no início da tumorigênese, permanecendo no processo metastático. Em conclusão, descrevemos várias proteínas diferencialmente expressas, discutindo a função de algumas pré-selecionadas no câncer de mama e avaliando a potencial utilização das mesmas como marcadores de diagnóstico e prognóstico. Este conhecimento é útil não só na carcinogênese mamária, mas na compreensão dos mecanismos básicos dos cânceres em geral.Abstract: Breast cancer is the most common type of cancer among women worldwide, and about 57,000 new cases are expected for the Brazilian population in 2015. A solid knowledge of protein expression is essential for biological understanding, early diagnosis and therapeutics of breast cancer. The main objectives of this study were the comparisons between the proteome of paired samples of invasive ductal breast tumors and non-tumor tissues, selecting possible targets to evaluate and compare the mRNA and protein expression of STIP1 among samples from tumor, non-tumor and metastatic lymph node. The comparative proteomic analysis was performed by two-dimensional electrophoresis in polyacrilamyde gel using five paired samples and considering for analysis just the spots with an expression difference over two fold (p<0.05). The proteins were identified by mass spectrometry (MALDI-TOF). Quantitative real time PCR was used to evaluate mRNA using 53 tumor samples and eight metastatic lymph nodes. ACTB and GAPDH were used as housekeeping controls and a pool of non-tumor samples as a calibrator. Eight triplets' tumor, nontumor and lymph node tissues had the expression of STIP1 compared by Western Blotting (WB). The proteomic analysis identified 35 proteins common to at least two samples and, among them, the ten with the highest differences in expression were CASPE, ENOG, TPM1, CAPG, VIME, TPM3, TRFE, PDIA6, WDR61 and PDIA3. The STIP1 mRNA expression was higher in tumor samples than in non-tumor and lymph nodes. WB analysis showed a significant increase just between tumor and non-tumor samples. In the present work, we identified more than a hundred proteins with differential expression comparing tumor and non-tumor tissue, most of them with a recognized role in breast cancer and others needing more studies, like STIP1. The mRNA levels of STIP1 were different between tumor and normal control and between tumor and lymph node, but no difference was seen with all other parameters analyzed. STIP1 was significantly overexpressed in tumor tissue compared with nontumor but no difference was seen between tumor and metastatic lymph node in WB analysis. These preliminary data suggest the increase of STIP1 expression in early tumorigenesis, persisting during the metastatic process. In conclusion, we describe several differentially expressed proteins, discussing the function of pre-selected ones in breast cancer and evaluating their potential use as diagnosis or prognosis markers. This knowledge is useful not only to mammary carcinogenesis but also to the understanding of basic mechanisms of cancer in general

Minimally invasive surgical treatment in patients with immunological thrombocytopenic purpura: total splenectomy by a hybrid mini-laparoscopic technique

Duas pacientes, uma com 28 anos e outro com 61 anos de idade, apresentavam quadro de astenia, púrpura e trombocitopenia (ambos &lt; 15.000 plaquetas/mm3). Após a exclusão de outras etiologias e com o estabelecimento do diagnóstico de púrpura trombocitopênica imunológica (PTI), ambos iniciaram terapia com corticoides. Entretanto, ambos pacientes permaneceram com plaquetas &lt; 20.000 /mm3, caracterizando PTI refratária e com a indicação de esplenectomia. A equipe cirúrgica optou por uma abordagem minilaparoscópica híbrida. Com uma melhor visualização do campo cirúrgico, menos trauma abdominal, mais destreza nos movimentos e com alta hospitalar precoce, o uso de instrumentos minilaparoscópicos se provou uma abordagem segura e eficaz para esses pacientes.Two female patients, one 28 years-old, and the other 61 years-old, with a history of asthenia, purpura and thrombocytopenia (both &lt;15,000 platelets / mm3). Once other etiologies were excluded, and the diagnosis of immune thrombocytopenic purpura (ITP) was established, corticoid therapy was started in both cases. However, the patients remained with a platelet count &lt;20,000 / mm3, characterizing refractory ITP, and the splenectomy was indicated. The surgical team opted for a hybrid minimally invasive surgical procedure. Providing a better visualization of the surgical field, less abdominal trauma, greater technical dexterity, and early hospital discharge, the use of minilaparoscopic instruments proved to be a safe and effective approach for these patients

Propedêutica urológica

Os autores apresentam suscintamente os principais métodos de propedêutica urológica, abordados em 4 tópicos: métodos radiológicos, métodos endoscópicos, métodos radioisotópicos e métodos manométricos. São abordados os princípios sobre os quais se apoiam estes exames, o modo de realização, indicações sobre a utilização dos métodos e alguns exemplos clínicos

Insuficiência cardíaca grave de etiologia amiloidótica

Amyloidosis is a systemic disease caused by the extracellular deposition of insoluble fibrils of low molecular weight proteins in various tissues. It can be classified in the forms: primary, secondary, hereditary and senile systemic. We report the case of a 75-year-old male patient who was admitted to a cardiologic emergency with progressive edema in the lower limbs started four months ago. Thirty days before admission he presented dyspnea from medium to small effort, evolving to restlessness and in decubitus (cardiac failure - functional class IV). On physical examination he presented a regular, conscious, tachidispneic, no fever, hydrated, hypochromic (1 +/ 4 +), icteric (2 +/ 4 +), acyanotic and jugular stasis at 45°. The cardiac rhythm was regular in two times and normal heart sounds, with systolic murmur in the mitral focus (2 +/ 6 +) fixed unfolding of the second sound; blood pressure of 80 x 40 mmHg and heart rate of 84 bpm. The admission electrocardiogram showed regular sinus rhythm, 1st degree atrioventricular block, low voltage in frontal plane leads, electrically inactive zone in anteroseptal region and left bundle branch conduction disorder. Chest X-ray with increased cardiac area, pattern of pulmonary congestion and bilateral pleural effusion, more pronounced on the left. A transthoracic echocardiogram was performed too, showing right enlarged cardiac chambers, mildly depressed right ventricular systolic function, moderate to severe tricuspid insufficiency, moderate pulmonary hypertension, left ventricular hypertrophy, left ventricular dysfunction and bright granular echogenicity finding. Ultrasonography of abdomen showed liver and spleen with heterogeneous texture, suggestive of granulomatous disease. Subsequently, hepatic biopsy was performed, confirming the hypothesis of infiltrative disease determined by cardiovascular amyloidosis. Patient evolved with lowered level of consciousness, and acute renal failure, undergoing hemodialysis and transfer to Coronary Unit, where he presented cardiorespiratory arrest and evolution to death.A amiloidose é uma doença sistêmica causada pela deposição extracelular de fibrilas insolúveis de proteínas de baixo peso molecular em diversos tecidos. Pode ser classificada nas formas: primária, secundária, hereditária e sistêmica senil. Relatamos o caso de um paciente masculino, 75 anos, que deu entrada em emergência cardiológica com quadro progressivo de edema em membros inferiores iniciado há quatro meses. Trinta dias antes do internamento passou a apresentar dispneia de médios para pequenos esforços, evoluindo para dispneia ao repouso e em decúbito (insuficiência cardíaca – classe funcional IV). Ao exame físico apresentou-se em estado geral regular, consciente, taquidispneico, afebril, hidratado, hipocorado (1+/4+), ictérico (2+/4+), acianótico e presença de estase jugular a 45°. O ritmo cardíaco era regular em dois tempos e bulhas, normofonéticas, com sopro sistólico em foco mitral (2+/6+) desdobramento fixo da segunda bulha; pressão arterial de 80x40 mmHg e frequência cardíaca de 84 bpm. O eletrocardiograma de admissão mostrou ritmo sinusal regular, bloqueio atrioventricular de 1º grau, baixa voltagem em derivações de plano frontal, zona eletricamente inativa em região ântero-septal e distúrbio de condução pelo ramo esquerdo do feixe de His. Radiografia de tórax com área cardíaca aumentada, padrão de congestão pulmonar e derrame pleural bilateral, mais acentuado à esquerda. Também foi realizado ecocardiograma transtorácico que evidenciou câmaras cardíacas aumentadas à direita, função sistólica de ventrículo direito levemente deprimida, insuficiência tricúspide moderada a importante, hipertensão pulmonar moderada, hipertrofia de ventrículo esquerdo, disfunção de ventrículo esquerdo e achado de ecogenicidade granular brilhante. Ultrassonografia de abdome mostrou fígado e baço com textura heterogênea, sugestivo de doença granulomatosa. Posteriormente foi realizada biópsia hepática que confirmou a hipótese de doença infiltrativa determinada pela amiloidose cardiovascular. Paciente evoluiu com rebaixamento de nível de consciência e insuficiência renal aguda, sendo realizada hemodiálise e transferência para Unidade Coronariana, onde apresentou parada cardiorrespiratória e evolução para óbito.

AS IDENTIDADES NEGRAS E OS GOVERNOS DAS CONDUTAS: UMA REFLEXÃO EDUCACIONAL ANTE TENSÕES

Este texto mostra uma possibilidade de reflexão educacional nas articulações entre a governamentalidade e as relações étnico-raciais em torno das tensões históricas das identidades negras com os governos das condutas. A governamentalidade caracteriza-se como a prática refletida de governo correlativa às práticas de poder e aos processos de subjetivação. No que se refere ao panorama das relações étnico-raciais, a governamentalidade apresenta-se como uma estratégia que procura modular práticas de controle sobre as condutas a partir dos dispositivos ligados ao racismo e à neutralização das resistências e insurgências negras. Podemos rastrear como as identidades negras, historicamente marginalizadas, estão em processos contínuos de diferenciação e ressignificação pelos quais outras condutas surgem. Esses processos sinalizam as experiências educadoras das identidades e diferenças negras em políticas produtoras de condutas insurgentes e resistentes, encarando o racismo

Neonatal Atrial Flutter Approach: A Case Series

Objective: This study set out to analyze the therapeutic options of patients with neonatal atrial flutter (AFL), considering the diagnostic methods available and the prognosis of these patients. Methodology: A retrospective study was performed by reviewing the medical records of a series of seven patients with atrial fibrillation (AF) diagnosed during fetal or neonatal period. The follow-up time of these patients ranged from 7 months to 3 years and 8 months (mean: 1 year). The clinical data for the diagnosis included sustained heart rate greater than 180 bpm, which was confirmed in all patients by a 12-lead electrocardiogram. Results: Four (57.1%) of the 7 patients studied were male. Most of the patients revealed cardiac arrhythmia during the intrauterine period when screened by fetal ultrasound in the third trimester of gestation (5 patients, i.e. 71.2%). Only the mother of Patient 2 was administered digoxin before childbirth. The atrial rate of the tachyarrhythmia revealed a mean of 375 bpm, with an increase of up to 500 bpm. Atrioventricular conduction presented a 2:1 ratio in all patients, with variations of 3:1 and 4:1 observed in Patients 1, 3 and 6. The ventricular rate ranged from 188 to 250 bpm. All patients revealed typical and counter-clockwise electrocardiogram characteristics. Synchronized electrical cardioversion was the treatment of choice in 6 patients (85.7%), with a dose of 1 J/kg. Conclusion: Early diagnosis, prior treatment, and synchronized electrical cardioversion indicate an excellent prognosis, and prolonged maintenance treatment may be unnecessary

Neonatal Atrial Flutter Approach: A Case Series

Objective: This study set out to analyze the therapeutic options of patients with neonatal atrial flutter (AFL), considering the diagnostic methods available and the prognosis of these patients. Methodology: A retrospective study was performed by reviewing the medical records of a series of seven patients with atrial fibrillation (AF) diagnosed during fetal or neonatal period. The follow-up time of these patients ranged from 7 months to 3 years and 8 months (mean: 1 year). The clinical data for the diagnosis included sustained heart rate greater than 180 bpm, which was confirmed in all patients by a 12-lead electrocardiogram. Results: Four (57.1%) of the 7 patients studied were male. Most of the patients revealed cardiac arrhythmia during the intrauterine period when screened by fetal ultrasound in the third trimester of gestation (5 patients, i.e. 71.2%). Only the mother of Patient 2 was administered digoxin before childbirth. The atrial rate of the tachyarrhythmia revealed a mean of 375 bpm, with an increase of up to 500 bpm. Atrioventricular conduction presented a 2:1 ratio in all patients, with variations of 3:1 and 4:1 observed in Patients 1, 3 and 6. The ventricular rate ranged from 188 to 250 bpm. All patients revealed typical and counter-clockwise electrocardiogram characteristics. Synchronized electrical cardioversion was the treatment of choice in 6 patients (85.7%), with a dose of 1 J/kg. Conclusion: Early diagnosis, prior treatment, and synchronized electrical cardioversion indicate an excellent prognosis, and prolonged maintenance treatment may be unnecessary