Development of an SPME-GC-MS method for the specific quantification of dimethylamine and trimethylamine: use of a new ratio for the freshness monitoring of cod fillets

International audienceBACKGROUND: Fish is a highly perishable food, so it is important to be able to estimate its freshness to ensure optimum quality for consumers. The present study describes the development of an SPME‐GC‐MS technique capable of quantifying both trimethylamine (TMA) and dimethylamine (DMA), components of what has been defined as partial volatile basic nitrogen (PVB‐N). This method was used, together with other reference methods, to monitor the storage of cod fillets (Gadus morhua) conserved under melting ice.RESULTS: Careful optimisation enabled definition of the best parameters for extracting and separating targeted amines and an internal standard. The study of cod spoilage by sensory analysis and TVB‐N assay led to the conclusion that the shelf‐life of cod fillet was between 6 and 7 days. Throughout the study, TMA and DMA were specifically quantified by SPME‐GC‐MS; the first was found to be highly correlated with the values returned by steam distillation assays. Neither TMA‐N nor DMA‐N were able to successfully characterise the decrease in early freshness, unlike dimethylamine/trimethylamine ratio (DTR), whose evolution is closely related to the results of sensory analysis until the stage where fillets need to be rejected.CONCLUSION: DTR was proposed as a reliable indicator for the early decrease of freshness until fish rejection

Gestion des risques en industrie pharmaceutique (initiation à la gestion de crise)

Le haut niveau de qualité et de sécurité atteint par l'Industrie Pharmaceutique permet de protéger les patients en diminuant le risque sanitaire de manière extrêmement importante. Néanmoins, des risques subsistent. Ces risques peuvent affecter la qualité et la sécurité des produits et par conséquent la santé des patients. Et dans certains cas, la survie de l'entreprise peut être menacée. Face à de tels enjeux, le management des risques permet de traiter les dangers potentiels qui guettent l'entreprise, et ce, afin d'assurer la maitrise de processus critiques, assurer la pérennité de l'entreprise et ainsi assurer aux patients une sécurité d'utilisation des produits. Mais le risque Zéro n'existe pas. Les crises doivent se gérer, mais cette gestion doit s'anticiper. Il existe un cadre, ou du moins une organisation générale pour tenter d'organiser le traitement de ces crises. Les principaux domaines d'anticipation et de préparation sont l'organisation quant à la mise en place d'une cellule de crise et la réflexion quant aux plans stratégiques de communication. Ces deux notions doivent être appréhendées avant la crise de façon à assurer une réactivité de l'entreprise.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocSudocFranceF

Le sang placentaire (un enjeu de santé publique en France)

Depuis leur découverte, les indications thérapeutiques des greffes allogéniques de cellules souches ne cessent d'augmenter, dans le traitement des maladies hématologiques mais aussi dans plusieurs autres types de pathologies. Ces greffes sont réalisées dans le cadre de dons anonymes, gratuits et altruistes, à partir de dons de cellules souches de donneurs vivants, avec trois sources actuelles, la moelle osseuse, le sang périphérique et le sang placentaire. Face à l'augmentation des greffes allogéniques de cellules souches, le nombre de dons s'avère insuffisant, ce qui confère aux sources de cellules souches un statut d'enjeu majeur de santé publique. Par ses caractéristiques originales, le sang placentaire est une source de cellules souches en plein essor, non seulement chez les enfants, mais aussi de plus en plus chez les adultes. La France développe une politique d'essor du don de sang placentaire, basée sur un réseau spécifique de banques de sang placentaire et de maternités collectrices, pour offrir la possibilité d'une greffe de cellules souches à tout patient dont l'état de santé le nécessite. La mise en place d'un recueil systématique du sang placentaire ne constitue pas un objectif réaliste. Il faut promouvoir le don de sang placentaire en France pour tendre vers une auto-suffisance. Le développement du réseau français de sang placentaire doit surtout garantir l'anonymat, la gratuité et l'altruisme qui caractérisent le don en France, dans un contexte international où se développent des banques commerciales à but lucratif.La circulation de dons de sang placentaire entre les pays et la mutualisation des bases de données et des registres à l'échelle internationale démontrent la nécessité d'une harmonisation du don de sang placentaire et des greffes allogéniques de cellules souches, et ce sur l'ensemble de la chaîne, du donneur jusqu'au receveur. Seule cette harmonisation peut permettre à l'avenir de garantir l'accès aux meilleurs soins pour tous. Initié dans le cadre du projet de mise en place du don de sang placentaire dans deux maternités de l'agglomération nantaise, en réseau avec la banque de sang placentaire de Rennes, ce travail m'a amenée à approfondir les problèmes liés à la communication autour du don de sang placentaire et à l'intervention des différents professionnels de santé. L'implication des pharmaciens d'officine, lors d'un entretien pharmaceutique de début de grossesse, me paraît être un aspect intéressant à développer, pour informer précocement la femme enceinte. Cet exemple pourrait entrer dans le cadre des nouveaux rôles alloués aux pharmaciens référentsNANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocSudocFranceF

La validation des systèmes informatisés dans l'industrie pharmaceutique (réglementation, méthodologie et application au laboratoire de contrôle)

L'informatique a révolutionné notre quotidien et celui des grandes organisations, au point d'être aujourd'hui indispensable pour toute opération. Pour les industries réglementées, auxquelles appartiennent les établissements pharmaceutiques, la question de la maîtrise de cet outil pose la problématique : permet-il d'assurer véritablement la qualité des médicaments produits ? Les établissements pharmaceutiques sont tenus de respecter certaines Bonnes Pratiques pour garantir la qualité du médicament et la sécurité des patients. En janvier 2011, la réglementation européenne concernant l'utilisation des systèmes informatisés dans l'industrie pharmaceutique a évoluée. Dans ce contexte, il est intéressant de déterminer l'impact de ces nouvelles dispositions réglementaires sur la mise en place d'une stratégie de validation efficace.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocSudocFranceF

Development of a qPCR method targeting torA gene and application for the freshness monitoring of modified atmosphere-packed chilled whiting (Merlangius merlangus)

International audienceIntroduction:Tracking the early decline of freshness is an important concern for the fishery industry to insure the best quality for foodstuffs highly liable to spoil. A lot of techniques have been developed like sensory, chemical and more slightly microbial analysis. Unfortunately, most of them have drawbacks of being subjective, or having the disadvantage of being either reliable once the freshness is lost or for the analysis of whole fish. The study presents the development of a qPCR method targeting a gene harboured by specific spoilage organisms (SSOs) of fish: torA. This gene encodes an enzyme responsible of the production of trimethylamine whose odour is characteristic of the spoiled fish.Material and methods:The study aimed to develop a degenerate primer pair able to amplify torA gene in a wide range of SSOs. For that, numerous software and algorithms were used for a maximal reliability of the in silico design process. A first selection of pairs where tested in vitro to further characterization. Finally a primer pair was conserved for efficiency and selectivity tests. The selected primer pair was tested for analysing MAP-chilled whiting along a 15 days storage study. Methods such as total volatile basic nitrogen (TVB-N) and trimethylamine (TMA) analysis or total viable count (TVC) analysis were performed simultaneously to evaluate fish overall quality.Results and discussion:A degenerate primer pair was selected after six steps of in silico design and selection. It amplified torA gene of both Vibrio and Photobacterium with good efficiencies, ranging from 91.6 to 93 % regarding species, on 7-log DNA dilutions. The best conditions of annealing temperature and primer concentration were found to be 62°C and 1 µM. As regards with selectivity, the degenerate primer pair allows to selectively amplify torA gene of Vibrio and Photobacterium compared with other tested species. TVC study led to inconclusive results, probably because ISO standard used was not suitable for these kinds of food and storage. However, throughout the storage of fillets, the qPCR approach allows detecting an increase of torA copies. Additionally, good correlation between qPCR results and the evolution of known spoilage markers were established, such as -0.86 (TVB-N) and -0.81 (TMA). Conclusion:This study, thanks to careful steps of primers characterization, allowed designing a primer pair able to amplify torA gene of both Vibrio and Photobacterium. A very promising, sensitive and time-effective qPCR technique is thus proposed to characterize the freshness of processed whiting

Quantification de l’azote basique volatil partiel par SPME-GC-MS : Application au suivi de l’évolution de la fraîcheur de filets de cabillaud (Gadus morhua)

National audienceLa fraîcheur est un paramètre clé pour l’évaluation de la qualité du poisson. Cette matrice étant extrêmement périssable, l’utilisation d’outils objectifs est nécessaire. Par le passé de nombreuses méthodes incluant les analyses sensorielles, chimiques, microbiologiques et physiques ont été développées pour suivre l’évolution de paramètres olfactifs visuels et tex-turaux tout au long du processus d’altération.L’altération du poisson est un processus complexe combinant des dégradations autolytiques et exogènes. Un exemple connu concernant l’altération de la chair des Gadidés est la dégra-dation de l’oxyde de triméthylamine (OTMA) selon deux voies cataboliques: la première fait intervenir l’OTMA réductase synthétisée par la flore spécifique d’altération et la seconde est le résultat de l’activité d’une enzyme endogène du poisson l’OTMA déméthylase. Ces réac-tions conduisent respectivement à la production de triméthylamine (TMA) et la diméthyla-mine (DMA).Jusqu’à présent la TMA et la DMA sont mesurées en routine de façon non-spécifique avec d’autres amines volatiles grâce l’analyse des amines basiques volatiles totales (ABVT) ; la TMA pouvant néanmoins être analysée plus spécifiquement avec l’ajout de formaldéhyde lors du processus analytique de l’ABVT. Le concept d’azote basique volatil partiel a été déve-loppé pour quantifier spécifiquement la DMA et la TMA à l’aide d’une SPME-GC-MS.La méthode développée a fait l’objet d’une phase d’optimisation puis de sélection d’un étalon interne avant de s’intéresser à la plage de quantification. Suite à ce développement un suivi d’altération a été réalisé sur des filets de cabillaud stockés sous glace fondante. Aux diffé-rents jours de conservation, trois filets ont été analysés à l’aide de différentes techniques : analyse sensorielle réalisée avec la méthode du Quality Index Method (QIM), analyses chi-miques par les méthodes d’ABVT et ABVP. Les concentrations en TMA mesurées par la méthode d’ABVT et celle d’ABVP sont très bien corrélées (r=0,98). Au regard des résultats de l’ABVT et de ceux du QIM, il apparait que la limite d’acceptation/rejet des filets est située au voisinage du 7ème jour de conservation. La production de TMA en cours d’altération a pu être modélisée, néanmoins son utilisation seule n’apparait pas comme un bon indicateur du déclin de la fraîcheur lors des premiers jours d’altération. Afin de surmonter cette limite, l’utilisation d’un nouvel indicateur issu des résultats de l’ABVP, le ratio DMA sur TMA (DTR), a montré des résultats encourageants avec une anti-corrélation significative (r = - 0,87 ; p-value < 0.001) lors de la phase précoce de déclin de la fraîcheur du poisson

Quantification of partial volatile basic nitrogen by SPME-GC-MS : Application to the monitoring of the evolution of cod fillets (Gadus morhua) freshness

International audienceLa fraîcheur est un paramètre clé pour l’évaluation de la qualité du poisson. Cette matrice étant extrêmement périssable, l’utilisation d’outils objectifs est nécessaire. Par le passé de nombreuses méthodes incluant les analyses sensorielles, chimiques, microbiologiques et physiques ont été développées pour suivre l’évolution de paramètres olfactifs visuels et texturaux tout au long du processus d’altération.L’altération du poisson est un processus complexe combinant des dégradations autolytiques et exogènes. Un exemple connu concernant l’altération de la chair des Gadidés est la dégradation de l’oxyde de triméthylamine (OTMA) selon deux voies cataboliques: la première fait intervenir l’OTMA réductase synthétisée par la flore spécifique d’altération et la seconde est le résultat de l’activité d’une enzyme endogène du poisson l’OTMA déméthylase. Ces réactions conduisent respectivement à la production de triméthylamine (TMA) et la diméthylamine (DMA).Jusqu’à présent la TMA et la DMA sont mesurées en routine de façon non-spécifique avec d’autres amines volatiles grâce l’analyse des amines basiques volatiles totales (ABVT) ; la TMA pouvant néanmoins être analysée plus spécifiquement avec l’ajout de formaldéhyde lors du processus analytique de l’ABVT. Le concept d’azote basique volatil partiel a été développé pour quantifier spécifiquement la DMA et la TMA à l’aide d’une SPME-GC-MS.La méthode développée a fait l’objet d’une phase d’optimisation puis de sélection d’un étalon interne avant de s’intéresser à la plage de quantification. Suite à ce développement un suivi d’altération a été réalisé sur des filets de cabillaud stockés sous glace fondante. Aux différents jours de conservation, trois filets ont été analysés à l’aide de différentes techniques : analyse sensorielle réalisée avec la méthode du Quality Index Method (QIM), analyses chimiques par les méthodes d’ABVT et ABVP. Les concentrations en TMA mesurées par la méthode d’ABVT et celle d’ABVP sont très bien corrélées (r=0,98). Au regard des résultats de l’ABVT et de ceux du QIM, il apparait que la limite d’acceptation/rejet des filets est située au voisinage du 7ème jour de conservation. La production de TMA en cours d’altération a pu être modélisée, néanmoins son utilisation seule n’apparait pas comme un bon indicateur du déclin de la fraîcheur lors des premiers jours d’altération. Afin de surmonter cette limite, l’utilisation d’un nouvel indicateur issu des résultats de l’ABVP, le ratio DMA sur TMA (DTR), a montré des résultats encourageants avec une anti-corrélation significative (r = - 0,87 ; p-value < 0.001) lors de la phase précoce de déclin de la fraîcheur du poisson

Quantification of fish partial volatile basic nitrogen by SPME-GC/MS

International audienceFreshness is a key parameter in the evaluation of the fish quality. As this matrix is highly perishable, objective tools for the freshness estimation are required. By the past, numerous methods including sensorial, chemical, microbiological and physical analysis were developed to follow evolution of odour, sight or texture throughout the spoiling process.Spoiling of fish is a complex process combining autolysis and exogenous degradations. One of the most famous examples is the degradation of trimethylamine-N-oxide (TMAO) in Gadidae by both TMAO reductases of specific spoiling organisms and TMAO demethylase, an endogenic enzyme. These reactions lead respectively to the production of trimethylamine (TMA) and dimethylamine (DMA). To date, TMA and DMA are routinely non-specifically measured among other volatile amines thanks to total volatile basic nitrogen (TVB-N) analysis; TMA can be nonetheless measured more specifically by TVB-N when formaldehyde is added. The concept of partial volatile base nitrogen (PVB-N) was implemented using SPME-GC/MS to quantify both TMA and DMA. Further, this technique allows specifically detecting and measuring TMA and DMA.Extraction (temperature, time, sample preparation) and separation (temperature, column phase, split type) parameters were optimized to obtain best chromatographic profiles. Both fresh and spoiled fish were analyzed by TVB-N and PVB-N techniques. First results show consistent conclusions. Moreover, comparison of TVB-N and PVB-N leads to the conclusion that the current TMA measurement, with addition of formaldehyde, is overestimating TMA content in the flesh of fish

Fixation de molécules chélatantes sur des polyphosphonates par modification chimique—II. Hydrolyse des polymères

International audienc