Enhancing frequency of regeneration of somatic embryos of avocado (Persea americana Mill.) using semi-permeable cellulose acetate membranes.

https://v2.sherpa.ac.uk/id/publication/16214En este trabajo se presenta un protocolo eficiente de regeneración de plantas de aguacate a partir de embriones somáticos utilizando membranas de acetato de celulosa en su cultivo, e incluyendo una fase de cultivo en medio líquido que incrementan la calidad de los embriones somáticos en maduración y la eficiencia de germinación del proceso.This research was funded by the Ministerio de Ciencia e Innovación of Spain and Feder European Union Funds (Grant No. AGL2011-30354-C02-01)

Olive (Olea europaea L.) Genetic Transformation: Current Status and Future Prospects

En este trabajo se hace un profundo análisis de la situación actual de la transformación genética en olivo, de vital importancia para los programas de mejora en esta especie tan importante. Se presentan los trabajos realizados con biobalística, obtención de plantas quiméricas con raíces transgénicas mediante el uso de Agrobacteriuem rhizogenes y los grandes avances alcanzados con la transformación con Agrobacterium tumefaciens y los estudios de genómica funcional realizados. Todas estas técnicas se basan en el uso de embriones somáticos de olivo y la regeneración de plantas a partir de ellos.Part of the research included in thismanuscriptwas funded by Consejería de Transformación Económica, Industria, Conocimiento y Universidades, Junta de Andalucía, grant number P18-RT-1933, and University of Malaga-Programa Operativo Feder Andalucía, UMA18-FEDERJA-096

Agrobacterium-mediated transformation of avocado (Persea americana Mill.) somatic embryos with fluorescent marker genes and optimization of transgenic plant recovery

En este trabajo se publica un estudio de diferentes proteínas de fluorescencia en la transformación genética de callo embriogénico de aguacate comprobando su eficiencia en el marcaje a lo largo de todo el proceso de regeneración de plantas de aguacates a partir de embriones somáticos.This research was funded by the Ministerio de Ciencia e Innovación of Spain and Feder European Union Funds (Grant Nos. AGL2011-30354-C02-01 and AGL2014-52518-C2-1-R

Evaluation of key factors influencing Agrobacterium-mediated transformation of somatic embryos of avocado (Persea americana Mill.).

https://v2.sherpa.ac.uk/id/publication/16214Artículo en el que se muestra el trabajo para el desarrollo de un protocolo eficiente de transformación genética de callo embriogénico de aguacate, mediada por Agrobacterium tumefaciens

Development of a high throughput system for genetic transformation of olive (Olea europaea L.) plants

En este trabajo se publicaron los primeros resultados encaminados a la obtención de un protocolo eficiente de transformación genética en olivo, haciendo hincapié en la selección del antibiótico de selección y el uso de embriones somáticos de olivo, así como de la cepa bacteriana utilizada.This research was funded by Dirección General de Investigación y Formación Agraria y Pesquera, Consejería de Agricultura y Pesca, Junta de Andalucía (project CAO00-018-C7-5) and Fundación Genoma España (Oleagen project)

Enhancing shoot recovery from transgenic avocado somatic embryos

Use of biotechnological tools in avocado (Persea americana Mill.) is hampered by difficulties in obtaining mature somatic embryos with an acceptable germination capacity. Use of semi-permeable cellulose acetate membranes on top of maturation medium has improved the quality of obtained embryos and their germination rate; however, in the case of transgenic embryos the conversion rate is still rather low. In this investigation, a protocol for recovery of transgenic plants has been developed. Mature avocado somatic embryos, over cellulose acetate membranes, were obtained and induced to germinate following the protocol described in Palomo-Ríos (2012). Some transgenic embryos developed buds ≤ 2 mm, which failed to elongate. For shoot recovery, cotyledons were partially removed and the embryonic axis cultured over 4 weeks in MS medium supplemented with either 1 mg/l BA, 1 mg/l TDZ or 1 mg/l BA and 1 mg/l TDZ. Highest shoot recovery was obtained in medium supplemented with 1 mg/l BA and 1 mg/l TDZ, 53.6±6.7% versus 23.2±5,7% and 39.6±6.4% in media supplemented with 1 mg/l BA or 1 mg/l TDZ, respectively. Afterwards, sprouted embryos were cultured over 4 additional weeks in MS medium supplemented with 1 mg/l BA. In some cases, resulting shoots could be induced to proliferate in GD medium (Gamborg et al., 1968) supplemented with 0.3 mg/l BA, while in other cases, they had to be recovered through micrografting onto in vitro germinated seedlings as described in Pliego-Alfaro and Murashige (1987). MS medium supplemented with 1mg/l BA and solidified with 6 g/l Sigma A-1296 agar, was used for micrografts. Shoots derived from micrografts were either induced to proliferate in GD medium with 0.3 mg/l BA or further grafted and cultured in liquid MS medium supplemented with 0.1 mg/l BA, using perlite as substrate. After 8-12 weeks, micrografts could be transferred to ex vitro conditions. References: Gamborg O.L., Muller, R.A., Iojima, K., (1968). Nutrient requirements of suspension cultures of soybean roots cells. Exp. Cell. Res. 50:151-158. Palomo-Ríos, E., (2012). Thesis: Regeneración y Transformación Genética de Aguacate (Persea americana Mill.). Ph.D. Dissertation, University of Málaga, Málaga Pliego-Alfaro, F., Murashige, T., (1987). Possible rejuvenation of adult avocado by graftage onto juvenile root stocks in vitro. Hort Sci. 22:1321-1324.AGL2011-30354-C02-0

Expression analysis of Flowering related genes in olive plants transformed with the "Medicago truncatula" FT gene MtFTa1

Olive tree (Olea europaea L.) forms inflorescences in lateral buds that flower in spring. Flowering occurs due to the presence of a mobile flower-promoting factor called florigen, the product of “FLOWERING LOCUS T” (FT). In many plants, FT and TERMINAL FLOWER 1 (TFL1) genes encode related proteins with opposite functions, i.e. FT induces flowering, while TFL1 represses it. Olive flower induction seems to be mediated by an increase in FT levels in response to cold winters. Because of climate change, warmer winters are expected, which can alter flowering time. Three olive transgenic lines containing the MtFTa1 gene from Medicago truncatula were obtained (FT5, FT7 and FT15) to study the effect of FT on flowering time (Haberman et al., 2017). The embryogenic line P1 from a seed of cv. Picual was used for transformation, and also as control (CP1). FT7 flowered continuously; FT5 did not flower and showed a dwarf branching phenotype, and FT15 had a dwarf-branching habit and developed abnormal flowers. The expression of the transgene and three endogenous genes (OeFT1, OeFT2 and OeTFL1-1) was analyzed in these juvenile plants, as well as in the control (CP1), throughout the year (autumn, winter and spring).Proyecto de Excelencia P11-AGR-7992, Junta de Andalucí

Evaluación del efecto del filtrado crudo del hongo Rosellinia necatrix en el crecimiento de brotes y cultivos embriogénicos de olivo

Rosellinia necatrix es un patógeno muy extendido en plantaciones de aguacate del sur de la Península Ibérica, afectando también, ocasionalmente, a plantaciones de olivo. Nuestro grupo está abordando la obtención de variantes somaclonales de olivo y aguacate, que muestren mayor tolerancia a este patógeno. En este trabajo se presentan los resultados en olivo, tras la exposición de cultivos embriogénicos a dosis crecientes de filtrado crudo del hongo. Se utilizó callo embriogénico, obtenido a partir de radícula, cultivado en medio líquido ECO (Pérez-Barranco et al. 2009 PCTOC 97: 243-251) durante 3 semanas en agitación, y posteriormente filtrado (malla de 2 mm) para separar la fracción fina. Esta fracción fue cultivada durante otras 3 semanas en medio ECO líquido conteniendo un 20, 40, 60 u 80% de filtrado crudo de Rosellinia necatrix, tras su esterilización en frio. Finalmente, el callo embriogénico fue cultivado en placa en medio ECO sólido para su recuperación. El filtrado del hongo al 20% no afectó al crecimiento del callo embriogénico; sin embargo, a partir del 40% el crecimiento fue inhibido, salvo en algunas placas, donde se observó proliferación de callo tras 2 meses en medio de cultivo sin filtrado. Se han obtenido varias líneas que han sobrevivido tras la exposición al 40, 60 y 80% de filtrado del hongo. Estas líneas están siendo cultivadas de nuevo en presencia de la misma concentración de filtrado del hongo para evaluar su comportamiento. Posteriormente, se abordará la recuperación de plantas. Paralelamente, brotes de olivo regenerados a partir de la línea embriogénica P1 han sido cultivados en medio de multiplicación (Vidoy-Mercado et al. 2012, Acta Hort. 949: 27-30) suplementado con filtrado crudo del hongo (60%), durante varios subcultivos, para evaluar el efecto del filtrado en el crecimiento de los brotes.Universidad de Málaga, Campus de Exelencia Internac ional Andalucía Tech. Proyecto AGR-7992 (P11-Junta de Andalucía

Obtención de poliploides en Fragaria para su uso en mejora

La fresa cultivada, Fragaria × ananassa Duch., es una especie octoploide procedente de un híbrido interespecífico entre las especies silvestres F. virginiana Duch. y F. chiloensis L. Los cruces intraespecíficos de F × ananassa se utilizan extensivamente para la obtención de nuevos cultivares con características agronómicas mejoradas. A pesar de esto, esta especie muestra una alta susceptibilidad a patógenos fúngicos y bacterianos y una baja tolerancia a estreses abióticos. Especies silvestres de menor ploidía, e.g. F. vesca (2x), pueden ser una fuente genética de gran valor para la mejora de esos caracteres en la fresa cultivada, pero las diferencias en ploidía representan una barrera reproductiva para los cruzamientos interespecíficos. La duplicación del número de cromosomas mediante tratamientos con colchicina de meristemos procedentes de estolones se ha utilizado para facilitar la hibridación interespecífica entre fresas diploides y comerciales. En este trabajo, se ha puesto a punto la metodología para la obtención de poliploides en fresa mediante la aplicación de colchicina durante la regeneración de brotes in vitro.Esta investigación ha sido financiada por los fondos FEDER EU y el Ministerio de Economía y Competitividad de España (AGL2017-86531-C2-1-R