Influence of HMB (β\beta-hydroxy-β\beta-methylbutyrate) on antibody secreting cells (ASC) after in vitro and in vivo immunization with the anti-Yersinia ruckeri vaccine of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)

In practice, protection of fish against disease by immunization is of limited effectiveness. Therefore, research is concentrated on how to improve the potency and efficacy of vaccines and how to optimally activate the cell-mediated immunity and the specific antibody response. In the present study, the influence of HMB ($\beta$-Hydroxy-$\beta$-methylbutyrate) on the antibody secreting cells (ASC) after both in vitro and in vivo immunization of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) with the anti-Yersiniose vaccine was studied. For in vitro immunization, the spleens from 160 fish were sampled and placed each in 35 mm sterile wells with medium containing HMB at concentrations of 0, 0.1, 1, 5, 10, 25, 50 or 100 $\mu$g/mL of medium. The spleens from 80 fish were injected with the vaccine and incubated at 14 °C for 10 days. For the in vivo study, fish were fed pellets containing HMB at doses of 0, 10, 25 and 50 mg/kg bw per day. After 2 weeks of HMB supplementation, the fish were immunized by intraperitoneal injection of the vaccine. At 7, 14, 18, 21, 28 and 35 days after immunization, pronephros were taken from 10 fish in each group for testing. When analyzed by the ELISPOT assay, HMB increased the number of splenic ASC after in vitro immunization at concentrations between 10 and 100 $\mu$g/mL ($P < 0.05$). Dietary HMB also increased the number of total and specific ASC when the fish were vaccinated in vivo. In conclusion, the results of the present study showed that HMB increases the levels of specific ASC after both in vitro and in vivo immunization of rainbow trout with the anti-Yersinia ruckeri vaccine.Influence du HMB sur les cellules productrices d'anticorps après vaccination in vitro et in vivo de la truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss) avec le vaccin Anti-Yersiniose. En pisciculture, la vaccination contre les maladies infectieuses ne présente qu'une efficacité limitée. En conséquence, la recherche est orientée vers les moyens d'augmenter l'efficacité des vaccins et de stimuler l'immunité cellulaire et la réponse en anticorps. La présente étude démontre l'influence du $\beta$-hydroxy-$\beta$-méthylbutyrate (HMB) sur les cellules productrices d'anticorps après immunisation in vitro et in vivo de la truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss) avec le vaccin "Anti-Yersiniose " . Pour l'étude in vitro, les rates de 160 poissons ont été prélevées et incubées dans du milieu contenant du HMB aux concentrations 0, 0,1, 1, 5, 10, 25, 50 ou 100 $\mu$g/mL de milieu. Les rates de 80 poissons ont été injectées avec le vaccin et incubées à 14 °C pendant 10 jours. Pour l'étude in vivo, des poissons (40-50 g) ont été nourris avec des granulés supplémentés en HMB à raison de 0, 10, 25 et 50 mg/kg de poisson par jour. Au bout de 2 semaines de supplémentation, les poissons ont été vaccinés par injection intra-péritonéale de vaccin. Aux jours 7, 14, 18, 21, 28 et 35 après vaccination, les pronephros ont été prélevés sur 10 poissons par groupe. In vitro, l'analyse ELISPOT a démontré que HMB augmentait le nombre de cellules produisant les anticorps spécifiques aux concentrations comprises entre 10 et 100 $\mu$g/$\mu$L ($P < 0,005$). In vivo, HMB distribué dans l'aliment a augmenté le nombre des cellules productrices d'anticorps spécifiques et non spécifiques après vaccination. En conclusion, in vitro et in vivo, HMB associé à la vaccination augmente, chez la truite arc-en-ciel, le nombre de cellules produisant les anticorps spécifiques