Análise da presença de mutações no gene que codifica o receptor de androgênios em tumores de próstata

As doenças da próstata atingem cerca de 80% dos homens com idade superior a 50 anos, sendo que as duas formas mais comuns são a hiperplasia prostática benigna (HPB) e o câncer de próstata (CaP), ambas resultantes da proliferação celular anormal. O CaP é o segundo tipo de câncer mais incidente no Brasil, tendo o Rio Grande do Sul (RS) como o estado com a maior prevalência. É sabido que os androgênios possuem um papel crucial na glândula prostática e que suas ações são mediadas pelo receptor celular denominado receptor de androgênios (AR), um receptor nuclear que age como fator de transcrição dependente de ligante. Sendo assim, alterações no AR podem estar relacionadas com o desenvolvimento da HPB e do CaP. Visto que o crescimento de células do CaP é dependente da ação dos androgênios, a privação hormonal é a principal terapia utilizada, porém, alguns homens desenvolvem resistência e o tumor continua progredindo. Mutações do AR têm sido apontadas como fatores de resistência à terapia antiandrogênica e recidiva bioquímica em tumores avançados, mas, pouco se sabe de seu papel no tumor primário. Duas importantes mutações relacionadas à resistência terapêutica já foram descritas: NG_009014.2(AR_v001):c.2632A>G (AR-T878A) e NG_009014.2(AR_v001):c.2350C>T (AR-Q784*), porém outros fatores genéticos e ambientais também podem estar associados ao desfecho clínico desses pacientes. Objetivo: Descrever a frequência das mutações AR-T878A e AR-Q784* em uma amostra de pacientes do estado do Rio Grande do Sul e avaliar possível associação ao desenvolvimento, agressividade tumoral e recidiva bioquímica. Métodos: 237 pacientes atendidos no Serviço de Urologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) e encaminhados à cirurgia por alteração prostática foram incluídos neste estudo. Foram coletados dados clínicos, além de amostras de sangue e de tecido prostático, durante o transoperatório, para extração de DNA genômico e análises moleculares. A genotipagem das mutações estudadas foi feita por PCR em tempo real (qPCR), utilizando sondas fluorescentes específicas, e o sequenciamento pelo método de Sanger. Resultados: A idade ao diagnóstico de HPB ou CaP não diferiu significativamente e ambos grupos foram homogêneos em relação à cor ou raça dos participantes. O nível de PSA sérico foi maior no grupo CaP (n=119) comparado ao grupo HPB (n=118) e a maioria dos pacientes com CaP apresentou tumor com escore de Gleason igual a 7(3+4) e não tinham diagnóstico 11 de doença extraprostática. Nenhum dos pacientes avaliados apresentou as mutações estudadas (AR-T878A e AR-Q784*) nas amostras de DNA genômico de sangue ou de tecido prostático. Conclusão: As mutações do receptor de androgênios AR-T878A e AR-Q784* não foram identificadas na amostra avaliada de pacientes do Rio Grande do Sul. Os resultados foram concordantes entre o genótipo das amostras avaliadas em leucócitos de sangue periférico e de tecido prostático.Prostate diseases affect about 80% of men over 50 years old, being that the two most common forms are benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer (PCa), both resulting from abnormal cellular proliferation. PCa is the second highest incident type of cancer in Brazil, and Rio Grande do Sul (RS) is the state with higher prevalence. It is known that androgens have an important role in the prostatic gland and their actions are mediated by a cellular receptor denominated androgen receptor (AR), a nuclear receptor that acts as ligand-dependent transcription factor. Therefore, AR alterations could be associated with BPH and PCa. Because PCa cell growth is androgen-dependent, hormonal deprivation is the most used therapeutic approach, however, some men develop resistance to such treatment and the tumor keeps advancing. AR mutations are being pointed as antiandrogenic therapy resistance factors and biochemical recurrence in advanced tumors, but little is known about their role in primary tumors. Two important mutations related to therapeutic resistance have been described: NG_009014.2(AR_v001):c.2632A>G (AR-T878A) and NG_009014.2(AR_v001):c.2350C>T (AR-Q784*), and other genetic and environmental factors can also be associated to disease outcome in these patients. Objectives: To describe the frequency of AR-T878A and AR-Q784* mutations in a sample of patients from RS and to evaluate their associations with tumoral aggressiveness and development, with biochemical recurrence. Methods: 237 patients treated at the Urology Service of the Hospital de Clinicas de Porto Alegre (HCPA) and referred for surgery for prostate alterations were included in this study. Clinical data was obtained, and blood and prostate tissue samples were collected, during the surgery, for genomic DNA extraction and molecular analysis. Genotyping was performed by real-time PCR (qPCR) using specific fluorescent probes and sequencing was done by the Sanger method. Results: Age at diagnosis of BPH or PCa did not differ significantly between groups and both groups presented a homogeneous composition considering the color or race of participants. Serum PSA levels were higher in the PCa (n=119) group compared to the BPH (n=118) group, most patients with PCa had a Gleason score 7 (3 +4) and had no diagnosis of extraprostatic disease. None of the patients evaluated carried the mutations (AR-T878A and AR-Q784*) in blood genomic DNA or prostatic tissues samples. Conclusion: Androgen receptor mutations AR-T878A and AR-Q784* were not identified in the evaluated sample of patients from Rio Grande do Sul. The results were consistent between the genotype of the peripheral blood leukocytes sample and prostate tissue samples

Primeiro bebê nascido no Brasil após diagnóstico simultâneo por PGT-A não-invasivo e convencional

Non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies (niPGT-A) aiming to assess cell-free embryonic DNA in spent culture media is promising, especially because it might overcome the diminished rates of implantation caused by the inadequate performance of trophectoderm (TE) biopsy. Our center is part of the largest study to date assessing the concordance between conventional PGT-A and niPGT-A, and we report here the delivery of the first baby born in Brazil using niPGT-A. The parents of the baby were admitted to our center in 2018. hey did not present history of infertility, and they were interested in using in vitro fertilization (IVF) and PGT-A in order to avoid congenital anomalies in the offspring. A total of 11 (3 day-5 and 8 day-6) expanded blastocysts were biopsied, and the spent culture media (culture from day-4 to day-6) from 8 day-6 blastocysts were collected for niPGT-A. Overall, 7 embryos yielded informative results for trophectoderm (TE) and media samples. Among the embryos with informative results, 5 presented concordant diagnosis between conventional PGT-A and niPGT-A, and 2 presented discordant diagnosis (1 false-positive and one false-negative). The Blastocyst 4, diagnosed as 46, XY by both niPGT-A and conventional PGT-A, was warmed up and transferred, resulting in the birth of a healthy 3.8 kg boy in February 2020. Based on our results and the recent literature, we believe that the safest current application of niPGT-A would be as a method of embryo selection for patients without an indication for conventional PGT-A. The approximate 80% of reliability of niPGT-A in the diagnosis of ploidy is superior to predictions provided by other non-invasive approaches like morphology and morphokinetics selection.Abordagens para o teste genético pré-implantacional não-invasivo para aneuploidias (non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies, niPGT-A, em inglês) com o objetivo de avaliar o DNA embrionário livre são promissoras, especialmente porque estas podem reverter as menores taxas de implantação causadas por inadequada biópsia de trofectoderma (TE). Nesse contexto, nosso centro é parte do maior estudo atual que avalia as taxas de concordância entre PGT-A convencional e niPGT-A, e relatamos aqui o nascimento do primeiro bebê brasileiro após niPGT-A. Os pais do bebê foram admitidos no nosso centro em 2018. Eles não apresentavam histórico de infertilidade, e estavam interessados em utilizar os tratamentos de fertilização in vitro (FIV) e PGT-A para evitar anomalias congênitas na progênie. Um total de 11 blastocistos expandidos (3 do dia-5 e 8 do dia-6) foram submetidos a biópsia, e os meios de cultivo condicionados (cultivo do dia-4 ao dia-6) de 8 blastocistos do dia-6 foram coletados para niPGT-A. No total, resultados informativos para as amostras de TE e dos meios foram obtidos para sete embriões. Entre os embriões com resultado informativo, 5 apresentaram diagnóstico concordante entre PGT-A convencional e niPGT-A, e 2 apresentaram diagnóstico discordante (1 falso positivo e 1 falso negativo). O Blastocisto 4, diagnosticado como 46, XY por ambos niPGT-A e PGT-A convencional, foi desvitrificado e transferido, o que resultou no nascimento de um menino saudável, que pesava 3,8 kg, em fevereiro de 2020. Com base em nossos resultados e literatura contemporânea, acreditamos que a aplicação atual mais segura do niPGT-A seria como método de seleção embrionária para pacientes sem indicação ao PGT-A convencional. A confiabilidade aproximada de 80% do niPGT-A para determinação da ploidia ainda é superior àquela obtida com abordagens não invasivas, como seleção morfológica ou morfocinética

Análise temporal dos efeitos cardiovasculares causados pela monocrotalina em modelo de hipertensão arterial pulmonar

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é definida pela elevação da pressão média da artéria pulmonar (PAPm) igual, ou superior, a 25 mmHg em repouso. É uma doença crônica e progressiva, marcada pelo remodelamento vascular e altos índices de morbidade e mortalidade. Ocorre de forma idiopática e é diagnosticada principalmente em pacientes em torno dos 50 anos de idade. Caracteriza-se pela anormalidade circulatória derivada do desequilíbrio de substâncias vasodilatadoras e vasoconstritoras e da proliferação de células musculares e endoteliais, o que resulta em lesões vaso-oclusivas. Ainda, a vasculatura pulmonar apresenta certo grau de disfunção endotelial, resultando em exacerbado tônus vasoconstritor. Essas alterações resultam no aumento da resistência vascular pulmonar, com elevação inapropriada dos níveis pressóricos. Para superar o aumento na pós-carga que é imposta, o ventrículo direito (VD) desenvolve uma hipertrofia concêntrica. No desenvolvimento da HAP, o estresse oxidativo desempenha importante papel, pois a acentuada produção de espécies reativas de oxigênio na vasculatura pulmonar está associada ao remodelamento e disfunção vascular. As alterações vistas na HAP causam, também, importantes alterações hemodinâmicas e funcionais no sistema cardiovascular. A administração de monocrotalina (MCT) gera mudanças estruturais e funcionais similares às dos pacientes com HAP, que se desenvolvem de acordo com a dose de MCT administrada e são tempo-dependentes. Visto que ainda são escassos estudos que apontem as principais alterações aos 7 e 14 dias de desenvolvimento da HAP, esse estudo teve como objetivo realizar uma análise tempo-dependente dos mecanismos de progressão da HAP, com base em alterações morfométricas, funcionais, de estado oxidativo e da regulação dos componentes do sistema nervoso autônomo (SNA). Ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos: controle 7 e 14 dias (CTR7 e CTR14); monocrotalina 7 e 14 dias (MCT7 e MCT14). Os grupos MCT7 e MCT14 receberam uma única injeção intraperitoneal de MCT (60 mg/Kg) e os grupos CTR7 e CTR14, o mesmo volume de solução salina. Ao final do protocolo, realizou-se o cateterismo do VD e artéria femoral e os animais foram decapitados. Após a morte, houve a retirada de órgãos para análises posteriores e a artéria pulmonar foi retirada e submetida ao teste de reatividade vascular. Os animais que receberam MCT (MCT7 e MCT14) apresentaram importantes diferenças morfométricas, em relação aos animais controle. A administração de MCT resultou na diminuição da reatividade da artéria pulmonar dos grupos MCT7 e MCT14, assim como no aumento da PAPm, na pressão sistólica do VD e na atividade da enzima NADPH oxidase no grupo MCT14. Não houve diferenças significativas na frequência cardíaca e nos parâmetros do SNA entre os quatro grupos. As alterações induzidas pela MCT envolvem, inicialmente, a responsividade e estrutura da vasculatura pulmonar, exigindo certas adaptações do VD, porém, grandes mudanças funcionais dessa câmara não são vistas nessa janela temporal, indicando que o VD ainda se encontra em estágio de hipertrofia compensatória e funcional. As principais alterações morfométricas, funcionais e hemodinâmicas estão mais evidentes a partir dos 14 dias após a aplicação da MCT, apesar de o quadro de HAP já estar bem estabelecido no sétimo.Pulmonary arterial hypertension (PAH) is defined by increase in mean pulmonary artery pressure (PAPm) ≥ 25mmHg in rest. It’s a chronic and progressive disease, marked by vascular remodeling and high rates of morbidity and mortality. It occurs idiopathically and is diagnosed mainly in patients around 50 years old. PAH is characterized by circulatory abnormality resultant from the imbalance between vasodilators and vasoconstrictors substances and the proliferation of muscular and endothelial cells, resulting in vaso-occlusive lesions. Moreover, the pulmonary vasculature shows some degree of endothelial dysfunction, which results in exacerbated vasoconstrictor tone. These changes cause increased pulmonary vascular resistance, with an inappropriate rise in pressure levels. To overcome the increased post-load imposed, the right ventricle (RV) develops a concentric hypertrophy. In PAH development, the oxidative stress plays an important role, because the reactive oxygen species production is associated with vascular remodeling and dysfunction. The changes seen in PAH also cause important hemodynamic and functional variations at cardiovascular system. Monocrotaline (MCT) administration generates structural and functional changes like those of PAH patients, which develops according to the MCT dose and are time-dependents. Since there are few studies that shows the major changes at 7th and 14th day of PAH development, the objective of this study was to accomplish a time-dependent PAH progression analysis, through morphometric, functional, oxidative state and autonomic nervous system (ANS) regulation changes. Male Wistar rats were divided into four groups: control 7 and 14 days (CTR7 and CTR14); monocrotaline 7 and 14 days (MCT7 and MCT14). The groups MCT7 and MCT14 received a single intraperitoneal injection of MCT (60 mg/Kg) and the groups CTR7 and CTR14, the same volume of saline. At the end of the protocol, the animals underwent RV and femoral catheterism and were decapitated. After this, some organs were collected for posterior analysis and the pulmonary artery were removed and submitted to vascular reactivity test. The animals that received MCT (MCT7 and MCT14) showed important morphometric differences in relation to control animals. MCT administration resulted in decreased pulmonary arterial reactivity in groups MCT7 and MCT14, as well increased PAPm, right ventricle systolic pressure and NADPH oxidase activity at group MCT14. There were no significant differences for heart rate and ANS parameters between the experimental groups. The changes induced by MCT involves, initially, the pulmonary vasculature responsiveness and structure, leading to some RV adaptations, but, large functional changes of this ventricle aren’t present in this time window, indicating that the RV still is at compensatory hypertrophy stage and functional. The major morphometric, functional and hemodynamics changes are more evident at 14th day after MCT administration, although PAH is already well established in the 7th day