Differentiation of bovine from porcine gelatines using polyclonal anti-peptide antibodies in indirect and competitive indirect ELISA

Gelatine is a collagen derivative obtained from bones and hides/skin mainly from bovine and pigs. As a consequence of the outbreak of bovine spongiform encephalopathy (BSE), the use of bovine gelatine in feed, food and pharmaceutical products has been restricted by regulatory authorities. However, no method was presently available for its specific detection. The large similarity in amino-acid sequences of collagens from different species make their immunochemical differentiation difficult when using polyclonal antibodies raised against the whole molecule [A. Venien, D. Levieux, J. Immunoassay Immunochem., in press]. To obtain bovine-specific antibodies, we immunized rabbits against putative species-specific sequences of the bovine collagen alpha 1 (1) chain. Using these antibodies, an indirect ELISA was developed to allow a quick and easy differentiation between bovine and porcine gelatines. Moreover, a competitive indirect ELISA was found suitable to detect bovine gelatine in porcine gelatine purchased from laboratory chemicals suppliers down to a dilution of 2-4 parts per 1000 with CVs ranging from 5.7 to 7.7%. When testing mixtures of the largest possible range of industrial batches of bovine and porcine gelatines (skin/hides or bones origin, acid or alkaline processes, high or low Bloom) the detection limi

Etude immunochimique de la protéolyse de la caséine b (ciblage des sites préférentiels de coupure par la plasmine)

La qualité des fromages se construit progressivement durant leur affinage par la protéolyse du réseau de para-caséines. L'hydrolyse successive par des protéases et des peptidases variées libère de nombreux peptides qui contribuent directement ou indirectement à la flaveur. La contribution de la plasmine (EC 3.4.21.7) du lait à l'hydrolyse initiale, et surtout à celle de la caséine b, est reconnue mais mal comprise, car les méthodes analytiques sont inadaptées à la complexité du processus protéolytique. L'objectif de ce travail était donc de développer une méthode quantitative de suivi immunochimique, en mesurant l'intégrité des sites spécifiquement protéolysés dans la caséine b. Ce travail est rapporté dans quatre articles. Un variant silencieux inconnu de la caséine b, nommé H, et la plasmine bovine ont été isolés, et leur interaction analysée in vitro. Des anticorps de spécificité étroite dirigés contre la caséine b, dont 21 anticorps monoclonaux reconnaissant six déterminants, et 14 anticorps anti-peptide dirigés contre cinq déterminants ont été ensuite testés, en ELISA, en immuno-blotting et sur BIAcore, pour ne retenir que quatre anticorps anti-peptide détectant l'hydrolyse in vitro de deux liaisons majeures et deux mineures.DIJON-BU Sciences Economie (212312102) / SudocSudocFranceF

Monoclonal antibodies against bovine beta-casein : production and epitope characterization

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