Agravamento das doenças psiquiátricas durante o período de isolamento social: uma breve revisão de literatura / Aggravation of psychiatric diseases during the period of social isolation: a brief literary review

A Organização das Nações Unidas alerta que o mundo passará por outra forte crise, dessa vez na saúde mental, como consequência da atual pandemia pelo COVID-19. Estudos qualitativos identificaram uma série de respostas psicológicas à quarentena, como confusão, medo, raiva, luto, dormência e insônia induzida por ansiedade. Além disso, com base em evidências científicas constatadas em epidemias anteriores, estima-se que distúrbios como transtorno de ansiedade generalizada, depressão e transtorno de estresse pós-traumático sejam ampliados significativamente. Este trabalho objetiva enumerar as repercussões sobre a saúde mental derivadas de longos períodos de isolamento social e propor medidas de intervenção capazes de minimizar as consequências.

Global age-sex-specific mortality, life expectancy, and population estimates in 204 countries and territories and 811 subnational locations, 1950–2021, and the impact of the COVID-19 pandemic: a comprehensive demographic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021

BACKGROUND: Estimates of demographic metrics are crucial to assess levels and trends of population health outcomes. The profound impact of the COVID-19 pandemic on populations worldwide has underscored the need for timely estimates to understand this unprecedented event within the context of long-term population health trends. The Global Burden of Diseases, Injuries, and Risk Factors Study (GBD) 2021 provides new demographic estimates for 204 countries and territories and 811 additional subnational locations from 1950 to 2021, with a particular emphasis on changes in mortality and life expectancy that occurred during the 2020–21 COVID-19 pandemic period. METHODS: 22 223 data sources from vital registration, sample registration, surveys, censuses, and other sources were used to estimate mortality, with a subset of these sources used exclusively to estimate excess mortality due to the COVID-19 pandemic. 2026 data sources were used for population estimation. Additional sources were used to estimate migration; the effects of the HIV epidemic; and demographic discontinuities due to conflicts, famines, natural disasters, and pandemics, which are used as inputs for estimating mortality and population. Spatiotemporal Gaussian process regression (ST-GPR) was used to generate under-5 mortality rates, which synthesised 30 763 location-years of vital registration and sample registration data, 1365 surveys and censuses, and 80 other sources. ST-GPR was also used to estimate adult mortality (between ages 15 and 59 years) based on information from 31 642 location-years of vital registration and sample registration data, 355 surveys and censuses, and 24 other sources. Estimates of child and adult mortality rates were then used to generate life tables with a relational model life table system. For countries with large HIV epidemics, life tables were adjusted using independent estimates of HIV-specific mortality generated via an epidemiological analysis of HIV prevalence surveys, antenatal clinic serosurveillance, and other data sources. Excess mortality due to the COVID-19 pandemic in 2020 and 2021 was determined by subtracting observed all-cause mortality (adjusted for late registration and mortality anomalies) from the mortality expected in the absence of the pandemic. Expected mortality was calculated based on historical trends using an ensemble of models. In location-years where all-cause mortality data were unavailable, we estimated excess mortality rates using a regression model with covariates pertaining to the pandemic. Population size was computed using a Bayesian hierarchical cohort component model. Life expectancy was calculated using age-specific mortality rates and standard demographic methods. Uncertainty intervals (UIs) were calculated for every metric using the 25th and 975th ordered values from a 1000-draw posterior distribution. FINDINGS: Global all-cause mortality followed two distinct patterns over the study period: age-standardised mortality rates declined between 1950 and 2019 (a 62·8% [95% UI 60·5–65·1] decline), and increased during the COVID-19 pandemic period (2020–21; 5·1% [0·9–9·6] increase). In contrast with the overall reverse in mortality trends during the pandemic period, child mortality continued to decline, with 4·66 million (3·98–5·50) global deaths in children younger than 5 years in 2021 compared with 5·21 million (4·50–6·01) in 2019. An estimated 131 million (126–137) people died globally from all causes in 2020 and 2021 combined, of which 15·9 million (14·7–17·2) were due to the COVID-19 pandemic (measured by excess mortality, which includes deaths directly due to SARS-CoV-2 infection and those indirectly due to other social, economic, or behavioural changes associated with the pandemic). Excess mortality rates exceeded 150 deaths per 100 000 population during at least one year of the pandemic in 80 countries and territories, whereas 20 nations had a negative excess mortality rate in 2020 or 2021, indicating that all-cause mortality in these countries was lower during the pandemic than expected based on historical trends. Between 1950 and 2021, global life expectancy at birth increased by 22·7 years (20·8–24·8), from 49·0 years (46·7–51·3) to 71·7 years (70·9–72·5). Global life expectancy at birth declined by 1·6 years (1·0–2·2) between 2019 and 2021, reversing historical trends. An increase in life expectancy was only observed in 32 (15·7%) of 204 countries and territories between 2019 and 2021. The global population reached 7·89 billion (7·67–8·13) people in 2021, by which time 56 of 204 countries and territories had peaked and subsequently populations have declined. The largest proportion of population growth between 2020 and 2021 was in sub-Saharan Africa (39·5% [28·4–52·7]) and south Asia (26·3% [9·0–44·7]). From 2000 to 2021, the ratio of the population aged 65 years and older to the population aged younger than 15 years increased in 188 (92·2%) of 204 nations. INTERPRETATION: Global adult mortality rates markedly increased during the COVID-19 pandemic in 2020 and 2021, reversing past decreasing trends, while child mortality rates continued to decline, albeit more slowly than in earlier years. Although COVID-19 had a substantial impact on many demographic indicators during the first 2 years of the pandemic, overall global health progress over the 72 years evaluated has been profound, with considerable improvements in mortality and life expectancy. Additionally, we observed a deceleration of global population growth since 2017, despite steady or increasing growth in lower-income countries, combined with a continued global shift of population age structures towards older ages. These demographic changes will likely present future challenges to health systems, economies, and societies. The comprehensive demographic estimates reported here will enable researchers, policy makers, health practitioners, and other key stakeholders to better understand and address the profound changes that have occurred in the global health landscape following the first 2 years of the COVID-19 pandemic, and longer-term trends beyond the pandemic. FUNDING: Bill & Melinda Gates Foundation

Efeito da sobre-expressão da proteína translocadora (tspo) na infecção por Leishmania amazonensis

Em trabalho realizado por nosso grupo foi demonstrado que Macrófagos (MΦ) de camundongos CBA controlam a infecção por L. major e são permissivos à L. amazonensis, sugerindo um papel importante destas células na resolução da infecção. Com intuito de identificar potenciais alvos envolvidos na infecção por Leishmania, utilizou-se uma abordagem proteômica, e dentre as proteínas identificadas, foi observado que a expressão da Proteína Translocadora (TSPO), está negativamente modulada na infecção por L. amazonensis. Assim, o presente trabalho visa avaliar o papel do TSPO na infecção por Leishmania. Inicialmente, a sequência do gene do TSPO foi obtida por RT-PCR a partir de RNAm de macrófagos de camundongo CBA infectados com L. major e clonada no pcDNA6.2/CEmGFP- DEST utilizando o sistema Gateway™. A clonagem do TSPO foi confirmada por sequenciamento e alinhamento com a sequência deste gene disponível no GenBank. Para obtenção de clones sobre-expressando o TSPO, células de linhagem macrofágica J774 foram submetidas à transfecção estável com os plasmídeos pcDNA6.2-TSPO e pcDNA6.2. As células transfectadas com o pcDNA6.2-TSPO apresentaram baixa taxa de sobrevivência em comparação com o controle. A fim de avaliar a funcionlidade do plasmídeo, células CHO foram transfectadas de forma transitória com o pcDNA6.2-TSPO e com imunofluorescência foi demonstrado que as células CHO pcDNA6.2-TSPO apresentaram marcação mais intensa que as CHO pcDNA6.2. Uma vez confirmada a funcionalidade do plasmídeo, foi realizada nova tentativa de transfecção estável de células J774 com pcDNA6.2-TSPO. Apesar destas células continuarem a apresentar alta letalidade, foram obtidos dois clones: J774 pcDNA6.2-TSPO clone 1 e J774 pcDNA6.2-TSPO clone 2. A expressão do TSPO mostrou-se aumentada 2,09 vezes nas J774 pcDNA6.2-TSPO clone 2 em comparação com J774 no entanto o clone 1 apresentou uma alteração da expressão do TSPO pouco significativa em comparação ao controle, por análise quantitativa de western-blot. Em seguida, os diferentes clones foram infectados com promastigotas metacíclicas de L. amazonensis e não foi observada diferença no percentual de células infectadas nem no número de parasita por células infectadas entre J774 pcDNA6.2-TSPO clone 1 e os controles. Entretanto, o clone 2 apresentou uma redução no número de células infectadas, no tempo de 6 horas. Essa redução não foi observada no tempo de 48 horas. Nossos dados sugerem que a sobre-expresão do TSPO reduz a fase inicial da infecção de células J774 por L. amazonensis. Visto que, foi realizada apenas um experimento em triplicata faz-se necessário o desenvolvimento de estudos adicionais para elucidar o papel desempenhado pelo TSPO na infecção por Leishmania.SALVADO

Efeito da sobre-expressão da proteína translocadora (tspo) na infecção por Leishmania amazonensis

Em trabalho realizado por nosso grupo foi demonstrado que Macrófagos (MΦ) de camundongos CBA controlam a infecção por L. major e são permissivos à L. amazonensis, sugerindo um papel importante destas células na resolução da infecção. Com intuito de identificar potenciais alvos envolvidos na infecção por Leishmania, utilizou-se uma abordagem proteômica, e dentre as proteínas identificadas, foi observado que a expressão da Proteína Translocadora (TSPO), está negativamente modulada na infecção por L. amazonensis. Assim, o presente trabalho visa avaliar o papel do TSPO na infecção por Leishmania. Inicialmente, a sequência do gene do TSPO foi obtida por RT-PCR a partir de RNAm de macrófagos de camundongo CBA infectados com L. major e clonada no pcDNA6.2/CEmGFP- DEST utilizando o sistema Gateway™. A clonagem do TSPO foi confirmada por sequenciamento e alinhamento com a sequência deste gene disponível no GenBank. Para obtenção de clones sobre-expressando o TSPO, células de linhagem macrofágica J774 foram submetidas à transfecção estável com os plasmídeos pcDNA6.2-TSPO e pcDNA6.2. As células transfectadas com o pcDNA6.2-TSPO apresentaram baixa taxa de sobrevivência em comparação com o controle. A fim de avaliar a funcionlidade do plasmídeo, células CHO foram transfectadas de forma transitória com o pcDNA6.2-TSPO e com imunofluorescência foi demonstrado que as células CHO pcDNA6.2-TSPO apresentaram marcação mais intensa que as CHO pcDNA6.2. Uma vez confirmada a funcionalidade do plasmídeo, foi realizada nova tentativa de transfecção estável de células J774 com pcDNA6.2-TSPO. Apesar destas células continuarem a apresentar alta letalidade, foram obtidos dois clones: J774 pcDNA6.2-TSPO clone 1 e J774 pcDNA6.2-TSPO clone 2. A expressão do TSPO mostrou-se aumentada 2,09 vezes nas J774 pcDNA6.2-TSPO clone 2 em comparação com J774 no entanto o clone 1 apresentou uma alteração da expressão do TSPO pouco significativa em comparação ao controle, por análise quantitativa de western-blot. Em seguida, os diferentes clones foram infectados com promastigotas metacíclicas de L. amazonensis e não foi observada diferença no percentual de células infectadas nem no número de parasita por células infectadas entre J774 pcDNA6.2-TSPO clone 1 e os controles. Entretanto, o clone 2 apresentou uma redução no número de células infectadas, no tempo de 6 horas. Essa redução não foi observada no tempo de 48 horas. Nossos dados sugerem que a sobre-expresão do TSPO reduz a fase inicial da infecção de células J774 por L. amazonensis. Visto que, foi realizada apenas um experimento em triplicata faz-se necessário o desenvolvimento de estudos adicionais para elucidar o papel desempenhado pelo TSPO na infecção por Leishmania.Universidade Federal da Bahi

Vacúolos parasitóforos induzidos porLeishmania amazonensis e Leishmania major interagem de forma distintacom a via autofágica

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2014-10-29T13:31:11Z No. of bitstreams: 1 Beatriz Rocha Simone Dias Vacúolos....pdf: 43303992 bytes, checksum: 310fce5b6b7557207067a51be3ca3c64 (MD5)Made available in DSpace on 2014-10-29T13:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Rocha Simone Dias Vacúolos....pdf: 43303992 bytes, checksum: 310fce5b6b7557207067a51be3ca3c64 (MD5) Previous issue date: 2014Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilA Leishmania é um parasito intracelular obrigatório que vive e se multiplic adentro dos vacúolos parasitóforos em macrófagos no hospedeiro vertebrado. Apesar dos vacúolos induzidos por diferentes espécies de Leishmania apresentarem semelhanças bioquímicas, esses compartimentos apresentam diferenças significativas nos seus tamanhos. Os vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania mexicana e Leishmania amazonensis apresentam grandes dimensões e contêm uma grande quantidade de amastigotas, enquanto que os induzidos por Leishmania major e Leishmania donovani são pequenos e com pouco espaço ao redor das amastigotas. Estudos recentes demonstraram que compartimentos induzidos por microrganismos intracelulares são capazes de interagir com a via autofágica e esta pode controlar ou promover o estabelecimento da infecção a depender da natureza do microrganismo. Até o momento, poucos estudos foram realizados para avaliar o papel da autofagia na biogênese e maturação dos vacúolos parasitóforos induzidos por Leishmania. Recentemente, foi demonstrado que em macrófagos de camundongos BALB/c, a indução de autofagia provoca um aumento na carga parasitária de L. amazonensis, no entanto, não é capaz de aumentar a carga parasitária de L. major. Além disso, estudos indicam que vacúolos parasitóforos de L. mexicana adquirem macromoléculas do citoplasma da célula hospedeira por meio de microautofagia. Uma vez que L. amazonensis integra o mesmo complexo que L. mexicana, nossa hipótese é que vacúolos parasitóforos induzidos por L. amazonensis interagem com a via autofágica.Assim, o presente estudo tem como bjetivo verificar e comparar a participação da autofagia na infecção por L. amazonensis ou L. major em macrófagos murinos. Para este fim, avaliamos quanto a características autofágicas, os vacúolos parasitóforos induzidos por L. amazonensis ou L. major em macrófagos de camundongo CBA e analisamos a influência da superexpressão de LC3 sobre a sobrevivência de L. amazonensis ou L. major em macrófagos infectados. Inicialmente, macrófagos de camundongos CBA foram infectados com L. amazonensis ou L. major e incubados com ysoTracker, marcador de compartimentos lisossomais, ou DQ-BSA, marcador de compartimentos degradativos. Além disso, foi avaliada a presença de LAMP, proteína lisossomal, e LC3, proteína específica de autofagossomo, na membrana destes vacúolos. Em seguida, a co- localização dos parasitos com os vacúolos parasitóforos contendo estes marcadores foi quantificada. Nossos resultados demostraram um maior percentual de co-localização tanto do LysoTracker como doDQ-BSAcom parasitos em vacúolos no interior de macrófagos infectados com L. major em comparação com aqueles infectados com L. amazonensis. No entanto, não houve diferença no percentual de co-localização de LAMP com L. major ou L. amazonensis e foi observado um maior percentual de co-localização do LC3 com parasitos em macrófagos infectados com L. amazonensis em comparação com aqueles infectados com L. major. Posteriormente, avaliamos o efeito da superexpressão da LC3 na infecção por L. amazonensis ou L. major. Células de linhagem macrofágica RAW foram transfectadas com o plasmídeo contendo a sequência codificante para a LC3 e infectadas com L. amazonensis ou L. major. Nós observamos uma reduçãono percentual de infecção por L. amazonensis e L. major nas células RAW- pmRFP-LC3 em comparação às controle. Essa diminuição na infecção se deu por inibição da fagocitose de L. amazonensis e L. major pois os parasitos continuam a interagir com a membrana das células RAW-pmRFP-LC3, mas não são internalizadas. Em conjunto, estes dados demonstram que os vacúolos parasitóforos de L. amazonensis e L. major interagem com compartimentos da via autofágica de forma distinta e que a superexpressão de LC3 reduz a fagocitose de L. amazonensis e L. major por células RAW, o que resulta na redução da infecçãoLeishmania is an intracellular parasite that lives and multiplies within parasitophorous vacuoles in macrophages in the vertebrate host. Despite the fact that vacuoles induced by different species of Leishmania present biochemical similarities, these compartments have significant differences in their sizes and composition. The parasitophorous vacuoles induced by Leishmania mexicana and Leishmania amazonensis are large and contain a large number of amastigotes, while vacuoles induced by Leishmania major and Leishmania donovani are small and tight. Recent studies have demonstrated that depending on the type of intracellular microorganism, the induced compartments can interact with the autophagic pathway and control or promote the establishment of infection. To date, few studies have been conducted to evaluate the role autophagic process plays in the biogenesis and maturation of parasitophorous vacuoles induced by Leishmania. Recently, it has been demonstrated that in macrophages of BALB/c mice, the induction of autophagic causes an increase in parasitic load of L. amazonensis, but not L. major. Furthermore, other studies indicate that L. mexicana-induced parasitophorous vacuoles acquire macromolecules from the cytoplasm of the host cell through microautophagy. Once L. amazonensis belongs to the same complex that L. mexicana, our hypothesis is that L. amazonensis-induced parasitophorous vacuoles interact with the autophagic pathway. Thus, the present study aims to evaluate and compare the role autophagic process plays in Leishmania infection. We evaluated L. amazonensis- or L. major-induced parasitophorous vacuoles regarding their autophagic characteristics and we analyzed the influence of the overexpression of LC3 on the survival of parasites in infected macrophages. Initially, macrophages of CBA mice were infected with L. amazonensis or L. major and incubated with a marker of lysosomal compartments, LysoTracker, or a marker of degrading compartments, DQ-BSA. In addition, we evaluated the presence of the lysosomal membrane protein, LAMP-1, and a protein specific of autophagossomes, LC3 in the membrane of these vacuoles. Then, the colocalization of parasites with the marker labeled-compartments was quantified. Our results demonstrated a higher percentage of colocalization of both LysoTracker and DQ-BSA with parasites in vacuoles within macrophages infected with L. major in comparison with those infected with L. amazonensis. However, there was no difference in the percentage of colocalization of LAMP with L. major or L. amazonensis. We also observed a higher percentage of LC3-co-localizing with parasites in macrophages infected with L. amazonensis in comparison with those infected with L. major. Subsequently, we evaluated the effect of overexpression of LC3 in macrophages infected with L. amazonensis or L. major. RAW cells were transfected with the plasmid containing the coding sequence for the LC3 (RAW-pmRFP-LC3) and then were infected with L. amazonensis or L. major stationary phase promastigotas. A reduction was observed in the percentage of infected RAW-pmRFP-LC3 cells with L. amazonensis and L. major compared to control cells. This decrease in the percentage of infected cells is due to the inhibition of phagocytic ability of RAW-pmRFP-LC3 cells, since the parasites continue to interact with cell membrane, but is not internalized. Together, these findings show that L. amazonensis- and L. major-induced parasitophorous vacuoles interact differently with compartments of the autophagic pathway and that the overexpression of LC3 reduces phagocytosis of both L. amazonensis and L. major by RAW-pmRFP-LC3 cells resulting in the reduction of infection

Estudo da contribuição da autofagia para a susceptibilidade por L. Amazonensis ou resistência por L. Major na infecção de macrófagos murinos da linhagem CBA

Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2019-02-26T14:23:00Z No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-02-27T13:54:14Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Beatriz Rocha Simões Dias Estudo da contribuiçao...2018.pdf: 16338939 bytes, checksum: 06395f0af546d7dd9f3cbcd15cadf020 (MD5) Beatriz Rocha Simões Dias Estudo da contribuiçao...2018.pdf: 16338939 bytes, checksum: 06395f0af546d7dd9f3cbcd15cadf020 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2019-02-27T13:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Beatriz Rocha Simões Dias Estudo da contribuiçao...2018.pdf: 16338939 bytes, checksum: 06395f0af546d7dd9f3cbcd15cadf020 (MD5) Beatriz Rocha Simões Dias Estudo da contribuiçao...2018.pdf: 16338939 bytes, checksum: 06395f0af546d7dd9f3cbcd15cadf020 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2018CNPqUniversidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.INTRODUÇÃO: Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por Leishmania major, no entanto, são permissivos à infecção por Leishmania amazonensis. Os estudos conduzidos, até o momento, sobre o papel desempenhado pela autofagia na infecção por Leishmania levaram a dados controversos. OBJETIVO: No presente trabalho, avaliamos se a resposta autofágica de macrófagos infectados pode ser responsável pela diferença no curso da infecção por essas duas espécies de Leishmania. MATERIAL e MÉTODOS e RESULTADOS: Inicialmente, demonstramos por qPCR e por análise de dados de microarranjos públicos que um número maior de genes relacionados à autofagia é modulado positivamente em células infectadas por L.amazonensis em comparação às infectadas L. major. Ingenuity Pathway Analysis (IPA) demonstrou modulação oposta dos genes relacionados à autofagia entre os macrófagos infectados com L. amazonensis daqueles infectados com L.major. Após 24 h de infecção, a relação LC3-II/Act é aumentada tanto em macrófagos infectados por L. amazonensis quanto nos infectados por L. major em comparação com controles não infectados, mas menos do que em células tratadas com cloroquina. Embora, os vacúolos parasitóforos induzidos por L.major tenham apresentado maior positividade para o marcador degradativo, DQBSA,o recrutamento de LC3 foi maior nos vacúolos parasitóforos induzidos por L. amazonensis. Interessantemente, tanto a indução farmacológica quanto a fisiológica da autofagia aumentaram a viabilidade intracelular de L. amazonenses e L. major, enquanto a inibição da autofagia não teve efeito sobre a viabilidade intracelular desses parasitas. Também demonstramos que a indução da autofagia reduziu a produção de NO por macrófagos infectados por L.amazonensis ou L. major, mas não alterou a atividade da arginase, A análise de componentes principais e agrupamento hierárquico de clusters discriminaram completamente os macrófagos infectados por L. major de células infectadas por L. amazonensis de acordo com a intensidade da infecção e características autofágicas dos vacúolos induzidos por essas duas cepas. CONCLUSÃO: Em conclusão, a infecção por L. amazonensis ou L. major, apesar de ativar similarmente o fluxo autofágico em macrófagos infectados e os parasitos terem sua viabilidade favorecida pela indução da autofagia, promove expressão diferenciada de genes relacionados à autofagia e interação distinta dos vacúolos parasitóforos com compartimentos autofágicos. Essas diferenças são capazes de separar completamente os macrófagos infectados por L. amazonensis daqueles por L. major.INTRODUCTION: CBA mouse macrophages (MΦ) control Leishmania major infection yet are permissive to Leishmania amazonensis. The role played by autophagy in Leishmania infection needs further investigation. OBJECTIVE: Thus, we assessed whether activation of autophagic pathway may account for differences in the response of infected MΦ to these two parasite strains. MATERIAL and METHODS and RESULTS: First, we demonstrated by qPCR and by analysis of publicly available microarray data that a greater number of autophagy-related genes (Atg) are positively modulated in cells infected by L. amazonensis compared to those infected by L. major. Ingenuity Pathway Analyses (IPA) demonstrated opposite modulation in genes in L. amazonensisand L. major-infected MΦ. After 24 h of infection, the autophagic flux measured by LC3-II/Act ratio was similarly increased in either L. amazonensis- or L. majorinfected MΦ compared to uninfected cells. Although L. major-induced parasitophorous vacuoles exhibited greater positivity for the degradative marker, DQ-BSA, LC3 recruitment was increased in L. amazonensis-induced parasitophorous vacuoles. Interestingly, autophagy induction enhanced intracellular L. amazonensis and L. major viability, although autophagy inhibition caused no effect on infection profile. We also demonstrated that autophagy induction reduced NO production by Leishmania-infected MΦ, yet did not alter arginase activity. Moreover, principal component analysis completely discriminated L. major-infected MΦ from L. amazonensis-infected cells regarding infection intensity and autophagic features of parasite-induced PV. CONCLUSION: In conclusion, infection by L. amazonensis or L. major, although similarly activates the autophagic flux in infected MΦ and the parasites have their viability favored by autophagy induction, these Leishmania species cause differentiated expression of Atg and distinct interaction of their parasitophorous vacuoles with autophagic vacuoles. These differences are capable to discriminate MΦ infected by L. amazonensis from those infected by L. major

Deciphering the Role Played by Autophagy in Leishmania Infection

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-12-10T16:35:25Z No. of bitstreams: 1 Veras, P.S.T. Deciphering....pdf: 2656851 bytes, checksum: 47e32a3b983116aac9bbbfd38a5df64f (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-12-10T16:54:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Veras, P.S.T. Deciphering....pdf: 2656851 bytes, checksum: 47e32a3b983116aac9bbbfd38a5df64f (MD5)Made available in DSpace on 2019-12-10T16:54:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Veras, P.S.T. Deciphering....pdf: 2656851 bytes, checksum: 47e32a3b983116aac9bbbfd38a5df64f (MD5) Previous issue date: 2019Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (PV, http://www.fapesb.ba.gov.br), Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico (PV, http://www.cnpq.br). This study was financed in part by the Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal deNível Superior— Brasil (CAPES)—Finance Code 001. PV holds a grant fromCNPq for productivity in research (307832/2015-5).Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório Parasito-Hospedeiro e Epidemiologia. Salvador, BA, Brasil / National Institute of Science and Technology of Tropical Diseases. Salvador, BA, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Parasito-Hospedeiro e Epidemiologia. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Parasito-Hospedeiro e Epidemiologia. Salvador, BA, Brasil.In recent decades, studies have shown that, depending on parasite species and host background, autophagy can either favor infection or promote parasite clearance. To date, relatively few studies have attempted to assess the role played by autophagy in Leishmania infection. While it has been consistently shown that Leishmania spp. induce autophagy in a variety of cell types, published results regarding the effects of autophagic modulation on Leishmania survival are contradictory. The present review, after a short overview of the general aspects of autophagy, aims to summarize the current body of knowledge surrounding how Leishmania spp. adaptively interact with macrophages, the host cells mainly involved in controlling leishmaniasis. We then explore the scarce studies that have investigated interactions between these parasite species and the autophagic pathway, and finally present a critical perspective on how autophagy influences infection outcome

A docking-based structural analysis of geldanamycin-derived inhibitor binding to human or Leishmania Hsp90

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-11-14T13:03:57Z No. of bitstreams: 1 Palma, L. C. A docking....pdf: 2316481 bytes, checksum: 4b22ab5fe091a63eb03467552d28b571 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-11-14T13:31:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Palma, L. C. A docking....pdf: 2316481 bytes, checksum: 4b22ab5fe091a63eb03467552d28b571 (MD5)Made available in DSpace on 2019-11-14T13:31:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palma, L. C. A docking....pdf: 2316481 bytes, checksum: 4b22ab5fe091a63eb03467552d28b571 (MD5) Previous issue date: 2019-01-14Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico (P.S.T.V. – Universal 422867/2016-0 http://www.cnpq.br) and Fundação de Amparo a Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (LFGRF – BFP-0063-4.03/17). P.S.T.V. holds a grant from CNPq for productivity in research (307832/2015-5).Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita Interação e Epidemiologia do Hospedeiro. Salvador, BA, Brasil.Federal University of Pernambuco. Department of Pharmaceutical Sciences. Recife, PE, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita Interação e Epidemiologia do Hospedeiro. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita Interação e Epidemiologia do Hospedeiro. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita Interação e Epidemiologia do Hospedeiro. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Engenharia de Tecidos e Imunofarmacologia. Salvador, BA, Brasil.Federal University of Pernambuco. Department of Pharmaceutical Sciences. Recife, PE, Brazil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Laboratório de Parasita Interação e Epidemiologia do Hospedeiro. Salvador, BA, Brasil.Leishmaniasis is a neglected disease that affects millions of individuals around the world. Regardless of clinical form, treatment is based primarily on the use of pentavalent antimonials. However, such treatments are prolonged and present intense side effects, which lead to patient abandonment in many cases. The search for chemotherapeutic alternatives has become a priority. Heat Shock Protein 90 (Hsp90) inhibitors have recently come under investigation due to antiparasitic activity in Plasmodium sp., Trypanosoma sp. and Leishmania sp. Some of these inhibitors, such as geldanamycin and its analogs, 17-AAG and 17-DMAG, bind directly to Hsp90, thereby inhibiting its activity. Previous studies have demonstrated that different parasite species are more susceptible to some of these inhibitors than host cells. We hypothesized that this increased susceptibility may be due to differences in binding of Hsp90 inhibitors to Leishmania protein compared to host protein. Based on the results of the in silico approach used in the present study, we propose that geldanamycin, 17-AAG and 17-DMAG present an increased tendency to bind to the N-terminal domain of Leishmania amazonensis Hsp83 in comparison to human Hsp90. This could be partially explained by differences in intermolecular interactions between each of these inhibitors and Hsp83 or Hsp90. The present findings demonstrate potential for the use of these inhibitors in the context of anti-Leishmania therapy

In vitro evaluation of the anti-leishmanial activity and toxicity of PK11195

<div><p> BACKGROUND Leishmaniasis, one of the most neglected diseases, is a serious public health problem in many countries, including Brazil. Currently available treatments require long-term use and have serious side effects, necessitating the development of new therapeutic interventions. Because translocator protein (TSPO) levels are reduced in Leishmania amazonensis-infected cells and because this protein participates in apoptosis and immunomodulation, TSPO represents a potential target for Leishmania chemotherapy. The present study evaluated PK11195, a ligand of this protein, as an anti-leishmanial agent. OBJECTIVE To evaluate the leishmanicidal activity of PK11195 against L. amazonensis in infected CBA mouse macrophages in vitro. METHODS The viability of axenic L. amazonensis, Leishmania major, and Leishmania braziliensis promastigotes was assessed after 48 h treatment with PK11195 (0.2-400 µM). Additionally, intracellular parasite viability was evaluated to determine IC50 values and the number of viable parasites in infected macrophages treated with PK11195 (50-100 µM). Infected macrophages were then treated with PK11195 (25-100 µM) to determine the percentage of L. amazonensis-infected cells and the number of parasites per infected cell. Electron microscopy was used to investigate morphological changes caused by PK11195. The production of free oxygen radicals, nitric oxide, and pro-inflammatory cytokines was also evaluated in infected macrophages treated with PK11195 and primed or not primed with IFN-γ. FINDINGS Median IC50 values for PK11195 were 14.2 µM for L. amazonensis, 8.2 µM for L. major, and 3.5 µM for L. braziliensis. The selective index value for L. amazonensis was 13.7, indicating the safety of PK11195 for future testing in mammals. Time- and dose-dependent reductions in the percentage of infected macrophages, the number of parasites per infected macrophage, and the number of viable intracellular parasites were observed. Electron microscopy revealed some morphological alterations suggestive of autophagy. Interestingly, MCP-1 and superoxide levels were reduced in L. amazonensis-infected macrophages treated with PK11195. MAIN CONCLUSIONS PK11195 causes the killing of amastigotes in vitro by mechanisms independent of inflammatory mediators and causes morphological alterations within Leishmania parasites, suggestive of autophagy, at doses that are non-toxic to macrophages. Thus, this molecule has demonstrated potential as an anti-leishmanial agent.</p></div