Homologous Expression of Glycosylphosphatidylinositol-Anchored Glycoproteins in Trypanosoma cruzi

The surface coat of Trypanosoma cruzi is covered with glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored glycoproteins (GAGPs) that contribute to parasite protection and to the establishment of a persistent infection in both the insect vector and the mammalian host. Multiple GAGPs that vary by amino acid sequence and/or posttranslational modifications are co-expressed on the parasite surface coat, hence curtailing structural/functional analyses on these molecules. Studies in our lab have indicated that GAGP-tagged variants expressed by transfected parasites undergo analogous posttranslational processing than endogenous ones and therefore constitute suitable tools to overcome these limitations. In this chapter, we detail the entire methodological pipeline for the efficient homologous expression of GAGPs in T. cruzi: from a simple strategy for the simultaneously cloning and tagging of the gene of interest to the biochemical validation of the parasite-expressed product.Fil: Balouz, Virginia. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Mesias, Andrea Cecilia. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Centeno Camean, Camila. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Ducrey, Ivana. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Lobo, Mabel Maite. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Durante, Ignacio Miguel. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Cánepa, Gaspar E.. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Buscaglia, Carlos Andres. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Camara, Maria de Los Milagros. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

The relationship between clinical signs and dry eye symptoms

Purpose To evaluate (i) the relationship between traditional and new clinical tests (lid-wiper epitheliopathy (LWE), lid-parallel conjunctival folds (LIPCOF)) and dry eye symptoms in non-contact lens wearers, and (ii) that a combination of these tests can improve predictive ability for the development of dry eye symptoms. Methods Tear meniscus height (TMH), non-invasive break-up time (NIBUT), ocular hyperaemia, LIPCOF, phenol red thread test (PRTT), corneal and conjunctival staining, and LWE grades were observed in a cohort of 47 healthy, non-lens wearers (male=17, female=30, median age=35 years, range=19–70). Symptoms were assessed using the Ocular Surface Disease Index (OSDI). Results LWE was significantly correlated to both temporal and nasal LIPCOF (0.537−0.248, P|0.31|; P<0.05). Significant discriminators of OSDI+/− were NIBUT (area under the receiver operative characteristic curve (AUC)=0.895), TMH (0.715), PRTT (0.781), LIPCOF (temporal/nasal/Sum 0.748/0.828/0.816), and LWE (0.749). Best predictive ability was achieved by combining NIBUT with nasal LIPCOF (AUC=0.944). Conclusions The individual tests NIBUT, TMH, PRTT, LIPCOF, and LWE were significantly, but moderately, related to OSDI scores. The strongest relationship appeared by combining NIBUT with nasal LIPCOF

Corneal refractive surgery-related dry eye: Risk factors and management

10.1586/17469899.2013.851602Expert Review of Ophthalmology86561-57