The presence of anti-Yersinia pseudotuberculosis immunoglobulins in equine serum

The research was conducted on clinically healthy mares (n=40) and foals (n=78) duringY. pseudotuberculosis associated enzootics. The animals were divided into groups: I to IV – mares, IA to IVA – their offsprings, IB to IVB – foals which mothers were not treated with any medicaments. The animals in group I, IA and IB were injected with PBS; in group II, IIA and IIB – with Y. pseudotuberculosis strain-based vaccine, in group III, IIIA and IIIB – with P. acnes strain-based immunostimulator; in group IV, IVA and IVB – with P. acnes strain-based immunostimulator and (5 days after the immunostimulator injection)Y. pseudotuberculosis strain-based vaccine. The presence of antibodies was determined by means of ELISA. The study revealed anti-Yersinia pseudotuberculosis IgG only in 19 mares before, and in 25 mares and 26 foals 3 weeks after vaccination. The mean extinction 3 weeks after vaccination amounted to: II-0.489, IV-2.578, IIA-0.572, IVA-0.974, IIB-0.312, IVB-0.418. The cut-off extinction value was 0.154. The presence of anti-Yersinia pseudotuberculosis IgG before vaccination in the sera of clinically healthy mares may suggest that Y. pseudotuberculosis infection occurs definitely more often than is expected. Vaccination preceded by immunostimulation appeared to be the most efficient method of treatment against yersiniosis

Molecular typing of Staphylococcus aureus based on PCR-RFLP of coa gene and RAPD analysis

The aim of this study was molecular identification of S. aureus strains isolated from mastitic milk samples and establishing the genetic relationship between strains isolated from cows belonging to the same herd. In all 43 isolated strains the gap gene (930 bp) was amplified, which enabled their affiliation to the Staphylococcus genus to be established. PCR-RFLP with AluI endonuclease of the gap gene as well as nuc (450 bp) and coa (1130 bp) gene amplification allowed precise S. aureus species identification. One hundred percent of the genetic relationship between strains was established via RAPD-PCR and coa-typing

Detection of enterotoxigenic Staphylococcus spp. strains, isolated from cows with mastitis, using multiplex-PCR

Celem podjętych badań była identyfikacja oraz analiza molekularna 35 szczepów Staphylococcus spp., wyizolowanych z mleka krów z kliniczną postacią mastitis, pod kątem ich potencjalnej zdolności do wytwarzania enterotoksyn gronkowcowych (SEs), najczęściej wywołujących zatrucia pokarmowe ludzi (SEA-SEE).Wytypowane szczepy scharakteryzowano wstępnie na podstawie wzrostu kolonii bakteryjnych na chromogennym podłożu CHROMagar Staph. aureus. Następnie wszystkie izolaty analizowano z użyciem gatunkowo specyficznej reakcji PCR, ukierunkowanej na wykrycie dwóch markerów molekularnych: nuc – specyficznego dla gatunku S. aureus i gehM – specyficznego dla S. xylosus. Dodatkowo oznaczano enterotoksynogenność wykrytych szczepów (obecność genów sea-see, w tym secv), z użyciem metody multipleks PCR. Spośród 35 analizowanych izolatów aż 18 szczepów (51,4%) stanowiło gronkowce koagulazoujemne (CNS) z gatunku S. xylosus, a tylko dwa izolaty (5,7%) należały do koagulazododatnich szczepów S. Aureus. W przypadku siedmiu szczepów S. xylosus (20%) wykryto metodą multipleks PCR geny enterotoksyn (se) zidentyfikowane jako: sea (71,4%), secv (14,3%) oraz sed (14,3%). Ponadto, w DNA pięciu spośród tych szczepów (71,4%), uzyskano amplikony specyficzne dla innych, bliżej nieokreślonych genów se lub ich wariantów, które na podstawie analizy in silico oznaczono jako: seg, seh, sei lub selu. Uzyskane wyniki wskazują na konieczność uwzględniania w diagnostyce gronkowców koagulazoujemnych ich właściwości toksynogennych, ponieważ mogą one stanowić ważną grupę mikroorganizmów obecnych w żywności. Przyczyniły się także do podkreślenia znaczącej roli enterotoksynogennych szczepów S. xylosus w etiologii mastitis.Wykonane badania potwierdziły przydatność metod molekularnych do wykrywania potencjalnie enterotoksycznych szczepów Staphylococcus spp. izolowanych od zwierząt.The aim of the study was the identification and molecular analysis of 35 Staphylococcus spp. strains, isolated from milk of cows with clinical form of mastitis, regarding to its potential ability to produce enterotoxins (SEA-SEE). All examined strains were first characterized on the basis of the image analysis of the bacterial colony growth on chromogenic medium CHROMagar Staph. aureus. In the next step all strains were analyzed using the species-specific PCR, based on detection of two molecular markers: nuc – specific for S. aureus and gehM – specific for S. xylosus. Additionally, enterotoxigenicity of identified strains (presence of seasee genes, including secv), in the multiplex-PCR was performed.Atotal of 35 isolates from milk samples of bovine clinical mastitis cases were analyzed and 18 strains (51.4%) classified as S. xylosus (CNS), where only two strains (5.7%) were coagulase-positive S. aureus. Seven isolates of S. xylosus (20%) were positive for enterotoxin genes (se), as detected by multiplex-polymerase chain reaction, with sea (71.4%), secv (14.3%) and sed (14.3%). In addition, in the case of five strains (71.4%), amplicons specific for others, indefinable se genes or their variants were detected, which on the basis of in silico analysis were identified as: seg, seh, sei or selu. The data showed that the toxigenic properties of CNS should not be ignored and further investigation of this group of microorganisms in food could be very important.Moreover the research contributed to emphasize the meaning of enterotoxigenic S. xylosus strains in the etiology of cows’ mastitis. The study also confirmed the usefulness of molecular methods in detection of potentially enterotoxic Staphylococcus spp. strains, isolated from animals

Innate non-specific immunity in clinicaly healthy standard breed mares after Streptococcus equi infection

Fagocytoza jest podstawową funkcją neutrofilów, monocytów oraz makrofagów tkankowych. Proces fagocytozy i tym samym jej efektywność ograniczane są znacznie w przypadku zakażeń koni Streptococcus equi. Mała efektywność identyfikacji zołz oraz niska skuteczność w leczeniu koni zarażonych S. equi związana jest z trudnościami w rozpoznaniu bezobjawowych nosicieli. Celem pracy było porównanie przebiegu procesu fagocytozy neutrofilów i monocytów krwi kłusaków rasy Standard bread klinicznie zdrowych z kłusakami, które przechorowały zakażenie Streptococcus equi.Aktywność fagocytarną określano wykorzystując PhagoTest® i cytometrię przepływową. Materiałem do badań była krew pobrana na heparynę od 13 klaczy, które przechorowały streptokokozę wywołaną S. equi i od 12 klaczy, u których nigdy nie obserwowano klinicznych objawów tej choroby. Wykazano statystycznie istotnie większą koncentrację monocytów we krwi klaczy zdrowych. Nie wykazano statystycznie istotnych różnic w liczebności limfocytów i neutrofilów. Odnotowano mniejszą aktywność fagocytarną (fluorescencję) zarówno neutrofilów (P = 0,049), jak i monocytów (P = 0,006), a także odsetek eozynofilów we krwi klaczy ozdrowieńców. U tych klaczy zaobserwowano także większą koncentrację komórek E. coli wokół fagocytujących neutrofilów i monocytów. Mniejsza aktywność układu immunologicznego klaczy, które przechorowały zakażenie, może wynikać z ich bezobjawowego nosicielstwa S. equi, a badanie aktywności fagocytarnej neutrofilów i monocytów krwi koni może być pomocne w diagnozowaniu bezobjawowego nosicielstwa S. Equi.Phagocytosis is an elementary function of neutrophils,monocytes and tissuemacrophages. The process on its own as well as its efficiency is significantly limited in case of Streptococcus equi infections in horses. Strangles diagnosis and poor effectiveness of treatment is due to difficulties in identification of asymptomatic hosts. The aim of this study was to compare the course of neutrophil andmonocyte phagocytosis in clinically healthy horses after Streptococcus equi infection versus control group. The phagocytosis activity was determined by means of PhagoTest® and flow cytometry. The bloodwas obtained from13mares recovered fromstreptococcal infection caused by S. equi and 12mares which never demonstrated clinical symptoms of this disease.A statistically significant differencewas shown in bloodmonocytes concentration in control group.Therewere no statistically significant differences between the amount of lymphocytes and neutrophils. Lower phagocytosis activity (fluorescence) was observed among neutrophils (P = 0.049) andmonocytes (P = 0.006) in recovered mares. Moreover, the percentage of eosinophils was also lower in this group, while the chemotaxis was enhanced. Limited immunological response in the recoveredmaresmay be due to asymptomatic carrier state of S. equi. Therefore, the determination of neutrophil and monocyte phagocytic activity may be useful in diagnosis of asymptomatic S. equi infections