Isolamento de Toxoplasma gondii a partir de cérebro e músculo de gatos serologicamente positivos utilizando culturas celulares

O isolamento de Toxoplasma gondii é imprescindível quer para efeitos de diagnóstico definitivo da infecção, quer para estudos visando a genotipagem de estirpes circulantes, tanto nos animais como no ser humano. O bioensaio é presentemente considerado o método de eleição para isolamento de T. gondii de amostras biológicas, no entanto, para além de eticamente questionável, a inoculação em ratinho é dispendiosa e laboriosa. O ensaio in vitro utilizando culturas celulares é frequentemente mencionado como alternativa, contudo o investimento nesta área tem sido diminuto, sendo raros os trabalhos que referem o recurso a este método para isolamento de T. gondii a partir de tecidos animais. Este estudo teve como objectivo testar diferentes métodos de isolamento de T. gondii em culturas de células. Para a preparação dos inóculos, colhemos amostras de tecido cerebral e muscular (coração e membros) de 16 gatos serologicamente positivos, durante a necrópsia. O tecido cerebral foi homogeneizado com agulha e seringa em meio de cultura e o tecido muscular digerido numa solução de ácido clorídrico e pepsina. A inoculação dos homogeneizados de cérebro e músculo em culturas de células Vero resultou, respectivamente, numa taxa de isolamento de 37,5% (6/16) e 62,5% (10/16). A visualização microscópica de taquizoítos nas culturas celulares foi possível 5-14 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de cérebro e 7-32 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de tecido muscular. Todos os isolados foram confirmados por n-PCR visando a região ITS1 do rDNA de T. gondii

Besnoitia besnoiti impact on fertility of cattle exploited in Mediterranean pastures (Alentejo)

Besnoitia besnoiti impact on fertility of cattle exploited in Mediterranean pastures (Alentejo) Summary Besnoitia besnoiti is a bovine parasite endemic in many tropical and subtropical areas whose prevalence in the Mediterranean countries such as Portugal seems to be increasing. Most infections are mild or subclinical, characterized by the formation of numerous cutaneous and sub-cutaneous microcysts, lowering the quality of skins for the leather industry. Male sterility or impaired fertility is a common sequela in breeding bulls, and is one of the most negative aspects of the disease in animals that survive infection. Our objective was to investigate if asymptomatic Besnoitiosis leads to bovine infertility, by comparing seminal parameters pre and post-thawing, in vitro fertilization (IVF) and embryo rates between asymptomatic infected (n=3) and uninfected (n=5) bulls, exploited in an extensive production system in Alentejo-Portugal. Skin biopsies were submitted to histopathological analyses to identify B. besnoiti cysts in sires. Semen was collected by electroejaculation and sperm quality parameters before cryopreservation and after thawing were analyzed using ANOVA. The quality of semen collected from asymptomatic infected and uninfected bulls presented no differences before cryopreservation. From all the post-thawed sperm quality parameters (motility and hypoosmotic swelling test; post-swim-up motility, activity, concentration and agglutination; fertilization and embryo rates) evaluated, only post-thawed (51.0±36.3 vs. 42.3±10.6%, P£0.05) and post-swim-up (36.3±18.8 vs 25.1±12.0 %, P£0.009) motility were significantly different between asymptomatic infected and uninfected bulls, respectively. Semen from asymptomatic Besnoitia besnoiti infected bulls may maintain fertilization ability. However the presence of these animals in herds represents a risk of spreading the disease leading to further economic losses. Key words: Besnoitia besnoiti, bovine besnoitiosis, infertility, Portugal

Contribuição para o estudo da besnoitiose bovina em Portugal

A besnoitiose bovina é uma doença parasitária causada pelo protozoário Besnoitia besnoiti (Marotel, 1912) que, apresentando uma fase aguda (com febre e anasarca) e uma fase crónica (esclerodermia), se caracteriza por elevada morbilidade e baixa mortalidade (Ferreira, 1985). Num estudo efectuado em Outubro de 2001, quanto à presença desta doença numa exploração de bovinos de carne situada no distrito de Évora onde já tinham sido diagnosticados casos de besnoitiose, foram aleatoriamente separados 12 machos assintomáticos de raça Limousine, com idades compreendidas entre os 18 e os 24 meses, a partir dos quais se obtiveram biopsias de pele. Subsequentes exames histopatológicos destas biopsias revelaram que 5 (42%) dos animais estudados continham quistos de B. besnoiti. Estes resultados demonstram assim a imediata necessidade de se proceder à elucidação de aspectos ainda pouco conhecidos sobre a fisiopatogenia desta doença, nomeadamente quanto às suas possíveis formas de transmissão (ou seja, determinação dos seus hospedeiros intermediários e definitivos) e quanto às suas implicações na produção animal tal como por exemplo, na fertilidade bovina e no aproveitamento de peles. Por outro lado, também sugerem que, pelo menos na região de Évora, pode ser muito elevado o número de animais assintomáticos, infectados com B. besnoiti, o que de igual modo se torna imperioso esclarecer

Besnoitiosis in bulls in Portugal

BOVINE besnoitiosis is caused by Besnoitia besnoiti, a coccidial protozoan (Fayer 1981, Tadros and Laarman 1982). Animals of all ages may be affected, but clinical disease is unusual in calves younger than six months of age (Bigalke 1968). The disease usually occurs sporadically, and most infections are subclinical (Pols 1960, Bigalke 1968)

Eimeria infections in goats in Southern Portugal

Coccidiosis caused by Eimeria species is a major form of intestinal infection affecting intensively and semi-intensively reared goats. The province of Alentejo is the main goat-producing area in Portugal. Therefore, all 15 Serpentina goat farms in Alentejo were analyzed regarding the occurrence and diversity of Eimeria species. Fecal samples obtained from 144 animals (52.1% dairy goats, 47.9% pre-pubertal goats) were examined using the modified McMaster technique to determine the number of oocysts per gram of feces. Eimeria spp. oocysts were present in 98.61% of the fecal samples and, overall, nine different Eimeria species were identified. The most prevalent species were E. ninakohlyakimovae (88%) and E. arloingi (85%), followed by E. alijevi (63%) and E. caprovina(63%). The average number of oocysts shed was significantly lower in dairy goats than in pre-adult animals. Astonishingly, no clinical signs of coccidiosis were observed in any of the animals examined, even though they were shedding high numbers of oocysts and were infected with highly pathogenic species. Thus, implementation of routine diagnostic investigation of the occurrence and diversity of caprine Eimeria species may be a useful tool for determination and better understanding of their potential economic impact on goat herds in southern Portugal