Cyclic di-GMP Signaling Links Biofilm Formation and Mn(II) Oxidation in Pseudomonas resinovorans

Bioaugmentation of biological sand filters with Mn(II)-oxidizing bacteria (MOB) is used to increase the efficiency of Mn removal from groundwater. While the biofilm-forming ability of MOB is important to achieve optimal Mn filtration, the regulatory link between biofilm formation and Mn(II) oxidation remains unclear. Here, an environmental isolate of Pseudomonas resinovorans strain MOB-513 was used as a model to investigate the role of c-di-GMP, a second messenger crucially involved in the regulation of biofilm formation by Pseudomonas, in the oxidation of Mn(II). A novel role for c-di-GMP in the upregulation of Mn(II) oxidation through induction of the expression of manganese-oxidizing peroxidase enzymes was revealed. MOB-513 macrocolony biofilms showed a strikingly stratified pattern of biogenic Mn oxide (BMnOx) accumulation in a localized top layer. Remarkably, elevated cellular levels of c-di-GMP correlated not only with increased accumulation of BMnOx in the same top layer but also with the appearance of a second BMnOx stratum in the bottom region of macrocolony biofilms, and the expression of mop genes correlated with this pattern. Proteomic analysis under Mn(II) conditions revealed changes in the abundance of a PilZ domain protein. Subsequent analyses supported a model in which this protein sensed c-di-GMP and affected a regulatory cascade that ultimately inhibited mop gene expression, providing a molecular link between c-di-GMP signaling and Mn(II) oxidation. Finally, we observed that high c-di-GMP levels were correlated with higher lyophilization efficiencies and higher groundwater Mn(II) oxidation capacities of freeze-dried bacterial cells, named lyophiles, showing the biotechnological relevance of understanding the role of c-di-GMP in MOB-513. IMPORTANCE The presence of Mn(II) in groundwater, a common source of drinking water, is a cause of water quality impairment, interfering with its disinfection, causing operation problems, and affecting human health. Purification of groundwater containing Mn(II) plays an important role in environmental and social safety. The typical method for Mn(II) removal is based on bacterial oxidation of metals to form insoluble oxides that can be filtered out of the water. Evidence of reducing the start-up periods and enhancing Mn removal efficiencies through bioaugmentation with appropriate biofilm-forming and MOB has emerged. As preliminary data suggest a link between these two phenotypes in Pseudomonas strains, the need to investigate the underlying regulatory mechanisms is apparent. The significance of our research lies in determining the role of c-di-GMP for increased biofilm formation and Mn(II)-oxidizing capabilities in MOB, which will allow the generation of super-biofilm-elaborating and Mn-oxidizing strains, enabling their implementation in biotechnological applications.Fil: Piazza, Ainelén Melanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Parra, Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Ciancio Casalini, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Sisti, Federico Bernardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Fernandez, Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Malone, Jacob G.. No especifíca;Fil: Ottado, Jorgelina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Serra, Diego Omar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Gottig Schor, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

Environmental Bacteria Involved in Manganese(II) Oxidation and Removal From Groundwater

The presence of iron (Fe) and manganese (Mn) in groundwater is an important concern in populations that use it as source of drinking water. The ingestion of high concentrations of these metals may affect human health. In addition, these metals cause aesthetic and organoleptic problems that affect water quality and also induce corrosion in distribution networks, generating operational and system maintenance problems. Biological sand filter systems are widely used to remove Fe and Mn from groundwater since they are a cost-effective technology and minimize the use of chemical oxidants. In this work, the bacterial communities of two biological water treatment plants from Argentina, exposed to long term presence of Mn(II) and with a high Mn(II) removal efficiency, were characterized using 16S rRNA gene Illumina sequencing. Several selective media were used to culture Mn-oxidizing bacteria (MOB) and a large number of known MOB and several isolates that have never been reported before as MOB were cultivated. These bacteria were characterized to select those with the highest Mn(II) oxidation and biofilm formation capacities and also those that can oxidize Mn(II) at different environmental growth conditions. In addition, studies were performed to determine if the selected MOB were able to oxidize Mn(II) present in groundwater while immobilized on sand. This work allowed the isolation of several bacterial strains adequate to develop an inoculum applicable to improve Mn(II) removal efficiency of sand filter water treatment plants

Biotecnología aplicada a procesos de biorremediación de Mn(II)

La presencia de altas concentraciones de Mn(II) en aguas subterráneas utilizadas para el consumo humano es un problema ampliamente distribuido en Argentina, ya que afecta su calidad desde el punto de vista de aceptabilidad, operativo y sanitario. Desde hace algunos años, los métodos fisicoquímicos usualmente empleados para el tratamiento de aguas contaminadas con Mn comenzaron a ser sustituidos por procesos de remoción biológica debido a que éstos son eficientes, económicos y no presentan impacto ambiental negativo. Dichos procesos se basan principalmente en el uso de filtros de grava y arena sobre los cuales las bacterias indígenas del agua desarrollan biofilms y llevan a cabo la oxidación del metal con gran eficiencia. Sin embargo, en la mayoría de los casos, los tiempos requeridos para que estos biofilms maduren son demasiados extensos, haciendo que se retrase el inicio de la remoción del metal. Para mejorar dicha situación, a menudo, se recurre a técnicas de bioaumentación. En este trabajo, se estudió el efecto de la bioaumentación de filtros de arena con dos cepas ambientales oxidantes de Mn(II), Pseudomonas sagittaria MOB-181 y Pseudomonas resinovorans MOB-449, a través de distintas metodologías de inoculación. Los ensayos se realizaron en distintas épocas del año para evaluar, además, cómo impacta la temperatura del ambiente sobre la eficiencia de remoción de Mn de los filtros y sobre la comunidad bacteriana establecida en el interior de los mismos. Los resultados obtenidos demostraron que tanto a escala banco como a escala piloto, la presencia de la bacteria Pseudomonas sagittaria MOB- 181 permitió acelerar los tiempos requeridos para la remoción del Mn presente en aguas naturales, independientemente de la metodología de inoculación empleada. Por otro lado, se pudo determinar que la inoculación de los filtros con las bacterias Pseudomonas sagitaria MOB-181 y Pseudomonas resinovorans MOB-449 en simultáneo, no conduce a mejorías en las eficiencias de remoción del metal respecto a la inoculación de los filtros únicamente con la bacteria Pseudomonas sagittaria MOB-181, indicando que la presencia de la bacteria Pseudomonas resinovorans MOB-449 no confiere ventajas significativas al proceso. Con respecto al efecto de la temperatura, se comprobó que la misma interfiere directamente en el establecimiento de los consorcios bacterianos en el interior de los filtros y en el rendimiento de los mismos. Las bacterias que oxidan Mn(II) son muy diversas, y se cree que la mayoría de ellas oxidan el metal por medio de dos enzimas: las Multicobre Oxidasas (MCO) y las Hemoperoxidasas (HP). Sin embargo, no se conoce con certeza cómo es el mecanismo utilizado. La bacteria Pseudomonas resinovorans MOB-449 posee la capacidad de oxidar Mn(II) con mayor eficiencia a temperaturas más bajas (18 °C) de lo que lo hacen las demás bacterias oxidantes de Mn(II) (28 °C). Por este motivo, se consideró enriquecedor utilizar a la misma como un modelo de estudio para poder ampliar los conocimientos acerca de la oxidación biológica del metal. Se analizaron distintas condiciones de crecimiento de la bacteria y su capacidad de oxidar Mn(II) en cada una de ellas, pudiéndose determinar que la misma es capaz de oxidar el metal únicamente en condiciones de crecimiento estático. En esta misma condición, se observó que el crecimiento de la bacteria a 18 °C es estimulado por la presencia de Mn(II), lo cual pudo ser comprobado también mediante técnicas de microscopía confocal. Además, a dicha temperatura la bacteria no sólo presenta una mayor capacidad de oxidar el metal, sino que también el proceso comienza antes que a 28 °C. Estos resultados sugirieron una estrecha conexión entre el proceso de oxidación de Mn(II) con la movilidad celular y con la temperatura de crecimiento de la bacteria. Por otro lado, se realizó un análisis de proteómica a través del cual se pudo demostrar que el crecimiento a 18 °C tiene, en general, un efecto negativo sobre el proteoma de la cepa MOB-449, afectando diversos procesos celulares tales como, el metabolismo de la energía y la movilidad celular. Además, se determinó que la presencia de Mn(II) conduce a un incremento en los niveles de abundancia de diversas proteínas a 18 °C, entre las cuales se destacan los citocromos y citocromos c oxidasas. Estas observaciones sugirieron que, a 18 °C, la bacteria Pseudomonas resinovorans MOB-449 podría recurrir a la oxidación de Mn(II) como fuente de energía para su crecimiento, mediante un mecanismo en el que podrían intervenir citocromos o citocromos c oxidasas. Por último, mediante técnicas de qPCR se determinó que la expresión de genes que codifican para enzimas MCO, se encuentra inducida cuando la bacteria se crece en presencia de Mn(II), indicando que la misma también podría llevar a cabo la oxidación del metal por medio de dichas enzimas.Fil: Ciancio Casalini, Lucila. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina

Manganese oxidation counteracts the deleterious effect of low temperatures on biofilm formation in Pseudomonas sp. MOB-449

Mn removal from groundwater by biological sand filter technology is negatively impacted by low temperatures in winter periods. Therefore, the need to study Mn(II)-oxidizing bacteria (MOB) having the potential to oxidize Mn(II) and form biofilms at low temperatures is imperative. These MOB can have potential as inocula for sand filter bioaugmentation strategies to optimize Mn removal during winter periods. We previously showed that a Pseudomonas sp. MOB-449 (MOB-449), isolated from a Mn biofilter, oxidizes Mn(II) in a biofilm-dependent way at low temperatures. In this work, MOB-449 Mn(II) oxidation and growth capacities were evaluated under planktonic and biofilm conditions at different temperatures. At 18°C, MOB-449 showed enhanced biofilm formation due to the addition of Mn(II) to the medium correlating with Mn(II) oxidation, compared to biofilms grown in control medium. Moreover, this enhancement on biofilm formation due to the addition of Mn(II) was only observed at 18°C. At this temperature, Mn(II) oxidation in membrane fractions collected from biofilms was induced by uncoupling oxidative phosphorylation from the electron transport chain with 2,4-Dinitrophenol. In Pseudomonas, a role for c-type cytochrome in Mn(II) oxidation has been demonstrated. Accordingly, transcriptional profiles of all terminal oxidases genes found in MOB-449 showed an induction of cytochrome c terminal oxidases expression mediated by Mn(II) oxidation at 18°C. Finally, heme peroxidase activity assays and MS analysis revealed that PetC, a cytochrome c5, and also CcmE, involved in the cytochrome c biogenesis machinery, are induced at 18°C only in the presence of Mn(II). These results present evidence supporting that cytochromes c and also the cytochrome c terminal oxidases are activated at low temperatures in the presence of Mn(II). Overall, this work demonstrate that in MOB-449 Mn(II) oxidation is activated at low temperatures to gain energy, suggesting that this process is important for survival under adverse environmental conditions and contributing to the understanding of the physiological role of bacterial Mn(II) oxidation.Fil: Ciancio Casalini, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Piazza, Ainelén Melanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Masotti, Fiorella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Garavaglia, Betiana Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Ottado, Jorgelina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Gottig Schor, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

Manganese removal efficiencies and bacterial community profiles in non-bioaugmented and in bioaugmented sand filters exposed to different temperatures

Biological sand filtration systems are widely used to remove Manganese (Mn) from groundwater. Different experiences have demonstrated that low environmental temperatures decrease the performance of these systems. In order to overcome this problem, in a previous work, a Pseudomonas sagittaria strain named MOB-181, that showed high Mn(II) oxidation and biofilm formation capacities when grown at low temperatures, was isolated. Here, the impact of summer and winter temperatures on Mn removal efficiencies and on bacterial community profiles of both, non-bioaugmented and MOB-181 bioaugmented sand filters, was analyzed. Under summer conditions, MOB-181 inoculated columns showed the best Mn removal performance, removing Mn from the first day of system operation with an efficiency of 27%; also these columns reached an optimum Mn removal efficiency (95%) earlier than control columns (23 days and 29 days, respectively). Under winter conditions, the 27% efficiency was reached earlier for the inoculated columns than for control columns (20 days and 42 days, respectively); and the maximum efficiency (95%) was also reached faster than for the controls (39 days and 54 days, respectively). Bacterial communities profiles were more influenced by temperature changes than by the bioaugmentation process. This work demonstrated the importance of bioaugmentation with the MOB-181 strain to improve Mn removal, by shortening start-up periods, mainly at lower temperatures. Moreover, the obtained data will improve the knowledge on bacterial communities ecosystem involved in Mn removal at different temperatures and should help in developing novel bioaugmentation strategies for the optimization of biological groundwater treatment plants.Fil: Ciancio Casalini, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Piazza, Ainelén Melanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Masotti, Fiorella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Pacini, Virginia Alejandra. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas Ingeniería y Agrimensura. Centro de Ingeniería Sanitaria; ArgentinaFil: Sanguinetti, Graciela Susana. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas Ingeniería y Agrimensura. Centro de Ingeniería Sanitaria; ArgentinaFil: Ottado, Jorgelina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Gottig Schor, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

Optimization of bacterial bioaugmentation for groundwater Mn removal using a waste-based culture medium and lyophilization

Water Impact StatementBioaugmentation for groundwater Mn removal has been performed with fresh bacterialinoculums. Lyophilized inoculums will solve the problems of keeping bacteria viableand transporting large culture volumes. Growing the inoculum in organic waste offersthe possibility to replace expensive culture media and to re-use industrial waste. Thesenew technologies will optimize bioaugmentation processes applicable to Mngroundwater full-scale biofiltration.Fil: Ciancio Casalini, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Vidoz, Micaela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Piazza, Ainelén Melanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Labanca, Cintia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas Ingeniería y Agrimensura. Centro de Ingeniería Sanitaria; ArgentinaFil: Pacini, Virginia Alejandra. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Exactas Ingeniería y Agrimensura. Centro de Ingeniería Sanitaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ottado, Jorgelina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Gottig Schor, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentin

Metabolic profiles of soybean roots during early stages of Fusarium tucumaniae infection

Soybean germplasm exhibits various levels of resistance to Fusarium tucumaniae, the main causal agent of sudden death syndrome (SDS) of soybean in Argentina. In this study, two soybean genotypes, one susceptible (NA 4613) and one partially resistant (DM 4670) to SDS infection, were inoculated with F. tucumaniae. Disease symptoms were scored at 7, 10, 14, and 25 days post-inoculation (dpi). The greatest difference in the area under the disease progress curve (AUDPC) values among genotypes was observed at 25 dpi. In order to detect early metabolic markers that could potentially discriminate between susceptible and resistant genotypes, gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS) analyses of root samples were performed. These analyses show higher levels of several amino acids and the polyamine cadaverine in the inoculated than in the uninoculated susceptible cultivar at 7 dpi. Principal component analysis (PCA) revealed that the metabolic profile of roots harvested at the earliest time points from the inoculated susceptible genotype was clearly differentiated from the rest of the samples. Furthermore, variables associated with the first principal component were mainly amino acids. Taken together, the results indicate that the pathogen induced the susceptible plant to accumulate amino acids in roots at early time points after infection, suggesting that GC-MS-based metabolomics could be used for the rapid characterization of cultivar response to SDS.Fil: Scandiani, María M.. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Luque, Alicia G.. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; ArgentinaFil: Razori, María V.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); ArgentinaFil: Ciancio Casalini, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); ArgentinaFil: Aoki, Takayuki. Genetic Resources Center; JapónFil: O´Donnell, Kerry. United States Department Of Agriculture; Estados UnidosFil: Cervigni, Gerardo Domingo Lucio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); ArgentinaFil: Spampinato, Claudia Patricia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); Argentin