PPERFORMANCE EVALUATION OF TWO MIPS FOR THE SPE-LC-UV DETERMINATION OF p-[18F]MPPF IN PLASMA

FP6 STRP 516984 MI-lab-on-chi

DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A METHOD FOR THE LC DETERMINATION p-[18F]MPPF IN PLASMA USING A MISPE

Peer reviewe

Polymères à empreintes moléculaires pour l'extraction sélective de composés de milieux biologiques

L'analyse de composés d'intérêts présents dans les échantillons biologiques nécessite des méthodes de séparation et de détection performantes ainsi qu 'une étape préalable de traitement de l'échantillon afin de préconcentrer l'analyte et de purifier la matrice. La méthode de choix reste l'extraction sur phase solide (SPE), cependant, l'utilisation des supports conventionnels d'extraction mettent enjeu une rétention basée sur des interactions hydrophobes ce qui conduit fréquemment à la coextraction de composés de polarité similaire. Un apport en sélectivité au niveau de l'extraction peut être obtenu par des supports d'immunoaffinité basés sur l'utilisation d'anticorps spécifiques de l'analyte recherché greffés sur un support solide (immunoadsorbants). Cependant, le coût et le temps nécessaires à la production d'anticorps ont récemment conduit à l'émergence d'une technique alternative basée sur la synthèse de polymères hautement réticulés possédant des cavités spécifiques d'une molécule modèle. Ces polymères à empreintes moléculaires (MIPs) possèdent des propriétés comparables ci celles des immunoadsorbants en termes de sélectivité avec, en plus, l'avantage d'un coût de développement réduit et d'une plus grande stabilité thermique et chimique. Le mécanisme de rétention mis en jeu lors de l 'étape d'extraction repose, comme pour les immnuoadsorbants, sur un mécanisme de reconnaissance moléculaire. Les interactions mises enjeu lors de la reconnaissance sont pour la plupart des interactions non covalentes de type liaisons hydrogène, π-π ou électrostatiques. Les polymères sont synthétisés en général sous forme de monolithe et utilisés soit en cartouche d'extraction ou directement intégrés dans le système d'analyse. Les nombreuses et récentes applications des MIPs pour des extractions à partir d'échantillons biologiques tels que le plasma ou l'urine ont permis de confirmer le réel potentiel de ces nouveaux supports synthétiques pour l'extraction sélective de composés cibles

Utilisation d’outils sélectifs pour l’analyse de traces dans des échantillons complexes

Les faibles teneurs recherchées pour des composés appartenant à des classes très diversifiées reste un réel challenge analytique quel que soit le domaine d’application (clinique, agroalimentaire, environnemental,…). L’évolution de l’instrumentation en termes de séparation et de détection a permis d’améliorer la sensibilité des méthodes et de réduire le temps d’analyse. Cependant, les faibles niveaux de concentration et la complexité des matrices requièrent encore l’incorporation d’étapes de purification et de préconcentration avant l’analyse chromatographique. Parmi les approches possibles, des supports d’extraction mettant en jeu un mécanisme de reconnaissance moléculaire peuvent être développés. L’objectif est alors d’extraire sélectivement une molécule ou une famille structurale de molécules en l’isolant des autres constituants de l’échantillon de manière à rendre leur analyse quantitative plus fiable et plus sensible. Ainsi, il est possible d’utiliser des supports d’immunoaffinité (immunoadsorbants) fondés sur l’utilisation d’anticorps spécifiques des molécules d’intérêt. La grande sélectivité et la grande affinité de l’interaction antigène-anticorps permet alors l’obtention d’un extrait propre et de facteurs d’enrichissement élevés. Ce même mécanisme de rétention peut également être exploité par l’utilisation de polymères à empreintes moléculaires dont la voie de synthèse permet l’obtention de cavités mimant un site de reconnaissance antigène-anticorps. Enfin, des supports greffés par des aptamères ont très récemment montré leur grand potentiel pour de l’extraction sélective. Par comparaison de ces différentes approches, les principes, les avantages et les limites de ces outils d’extraction sélective seront exposés

Biosynthesis of Cylindrospermopsin and 7-Epicylindrospermopsin in Oscillatoria sp. Strain PCC 6506: Identification of the cyr Gene Cluster and Toxin Analysis ▿

Cylindrospermopsin is a cytotoxin produced by Cylindrospermopsis raciborskii and other cyanobacteria that has been implicated in human intoxications. We report here the complete sequence of the gene cluster responsible for the biosynthesis of this toxin in Oscillatoria sp. strain PCC 6506. This cluster of genes was found to be homologous with that of C. raciborskii but with a different gene organization. Using an enzyme-linked immunosorbent assay and an optimized liquid chromatography analytical method coupled to tandem mass spectrometry, we detected 7-epicylindrospermopsin, cylindrospermopsin, and 7-deoxycylindrospermopsin in the culture medium of axenic Oscillatoria PCC 6506 at the following relative concentrations: 68.6%, 30.2%, and 1.2%, respectively. We measured the intracellular and extracellular concentrations, per mg of dried cells of Oscillatoria PCC 6506, of 7-epicylindrospermopsin (0.18 μg/mg and 0.29 μg/mg, respectively) and cylindrospermopsin (0.10 μg/mg and 0.11 μg/mg, respectively). We showed that these two toxins accumulated in the culture medium of Oscillatoria PCC 6506 but that the ratio (2.5 ± 0.3) was constant with 7-epicylindrospermopsin being the major metabolite. We also determined the concentrations of these toxins in culture media of other Oscillatoria strains, PCC 6407, PCC 6602, PCC 7926, and PCC 10702, and found that, except for PCC 6602, they all produced 7-epicylindrospermopsin and cylindrospermopsin, with the former being the major toxin, except for PCC 7926, which produced very little 7-epicylindrospermopsin. All the cylindrospermopsin producers studied gave a PCR product using specific primers for the amplification of the cyrJ gene from genomic DNA