O impacto da sinalização astrocítica nos efeitos terapêuticos do secretoma de células mesenquimais estaminais no sistema nervoso central

The central nervous system (CNS) has a limited auto-regeneration capacity, which makes it challenging for the development of new therapies. Previous studies from our lab have demonstrated the applicability of mesenchymal stem cells (MSCs) as a possible therapeutic too for CNS, in which their secretome (e.g. the secretion of trophic factors and vesicles) has been described as the most probable mechanism of their therapeutic action, due to its ability to stimulate/modulate neurogenesis. Glial cells as astrocytes are important players in neural activity and in the modulation of neurotransmission, thereby being crucial elements in neurogenesis. Thus, in the present project, we aimed to evaluate the impact of astrocytes on the effects promoted by the application of MSCs secretome as a therapeutic tool for the modulation and generation of new neurons. For this, MSCs secretome was injected into the dentate gyrus (DG) of the hippocampus of a transgenic animal model (with the SNARE complex blocked) without astrocytic transmission, and therefore with their function partially depleted. Additionally, morphological features of astrocytes were assessed. As controls wild type Black 6 mice, in which the astrocytic function has not been depleted were used. One week after secretome treatment, animals were sacrificed, and brains collected for molecular and histological analysis. Pre-frontal cortex tissue was used to perform a transgene analysis in order to divide the experimental groups in wild type (Wt), Snare high and Snare low (animals presenting different patterns of gene expression). Brains were immuno-stained for GFAP and Ki-67 and assessed under a confocal microscope for proliferations levels at the SGZ of the hippocampus, at the hilus, for counting of radial glial cells at the SGZ and for GFAP+ densities at the DG. Confocal images were also employed for morphological analysis. Results demonstrated increased levels of proliferation for Wt and Snare high animals at the SGZ when compared to Snare low when treated with secretome, furthermore, secretome increased levels of proliferating radial glial cell in Snare high animals. Morphological assessments revealed increased process hypertrophy and complexity in snare animals treated with secretome. The results could be attributed to trophic factors present in the secretome, previously shown to increase proliferation at the DG and also to alter astrocyte morphology. The impact of transgene expression is harder to explain, nevertheless, impaired exocytosis from astrocytes could have implications for the response to a proliferative stimulus given the established autocrine signaling trough this mechanism.A capacidade de regenereação do sistema nervoso (SNC) central é limitada, gerando um desafio para a produção de novas terapias. Estudos recentes do nosso laboratório evidenciaram um potencial interessante para a aplicação de células estaminais mesenquimatosas (MSC) como um potencial agente terapêutico para o SNC no qual o seu secretoma (secreção de fatores tróficos e vesiculas) tem sido descrito como o principal mecanismo de ação, capaz de estimular neurogénese e a sobrevivência de células gliais. Neste contexto, astrócitos tem grande importância na homeostase do SNC modulando importantes funcões como neurotransmissão, fluxo sanguíneo e neurogénesis. Portanto, este projeto teve o objetivo de investigar o papel dos astroócitos nos efeitos modulatórios promovidos pelo secretoma de MSC’s nomeadamente nos seus níveis de proliferação e nas densidades gliais. Para isso, foi utilizado um modelo animal transgénico que possui o complexo SNARE bloqueado, reduzindo desta forma a transmissão astrocítica. Adicionalmente, a morfologia destes astrócitos foi estudada. Como controlos, foram usados murganhos C57BL/6. Uma semana após a injeção com o secretoma, procedeu-se a avaliações histológicas, os tecidos foram marcados para Ki-67 e GFAP e contramarcados para DAPI. O secretoma apresentou um papel estimulatório sob os níveis de proliferação evidenicados pelo maior número de células positivas para Ki-67 na zona sub-granular do hipocampo nos animais wild type e nos SNARE high, sendo a transmissão astrocitica importante para tal processo tendo em vista que, em comparação com animais SNARE low, os níveis de proliferação foram reduzidos, adicionalmente, o secretoma elevou a proliferação de celulas gliais radiais (RGC) apenas nos animais Snare High, mostrando um possível efeito compansatório sob a redução da transmissão glial. Adicionalmente, os animais tratados com secretoma que possuiam expressão do transgene, apresentaram morfologia hipertrófica e mais complexa quando comparados com animais wild type. Os resultados encontrados devem ser considerados com parcimónia pela natureza exploratória do presente estudo, vale a pena reasaltar que é a primeira vez que este tipo de abordagns experimentais e análises é desenvolvido neste modelo animal

Influence of examiners’ experience on the reproducibility of different gold standard techniques and histological criteria for validation of the diagnosis of occlusal caries lesions

The aims of this study were to evaluate the influence (1) of the examiner experience and (2) three histological classification criteria on the reproducibility of two gold standard techniques (non-dye or dye) for validation of the diagnosis of occlusal caries. This study comprised a sample of 210 digital images of 105 permanent teeth (105 rhodamine B dyed and 105 dyefree hemisections) and six examiners. Images were evaluated on a laptop computer and categorised according to three different histological classification criteria (proposed by Ekstrand, Lussi or Downer) and repeated in order to allow reproducibility calculation. For data analysis, the six participants were divided into two groups: G1: examiners with previous experience in histological evaluation and G2: examiners with no experience in histological evaluation. Statistical significance was set at 0.05. Results. The mean intraexaminer reproducibility values in G1 were higher than G2 in all variables. Intra-examiner reproducibility was lower for the dye-free technique in both groups. The mean values of inter-examiner reproducibility in G1 ranged from 0.60 to 0.68, and in G2 values ranged from 0.34 to 0.69. Conclusion. It can be concluded that: (1) the examiners’ experience seems to influence the reproducibility of the two gold standard techniques studied and reproducibility tends to be lower when the dye-free technique is used, and (2) the histological classification criterion does not appear to influence the reproducibility for validation of the diagnosis of occlusal caries

Treinamento em reprodução de peixes: uma troca de experiências com piscicultores / Fish reproduction training: an exchange of experiences with fishers

 O estado do Pará apresenta elevado potencial aquícola pela abundância de recursos hídricos e pela quantidade de espécies nativas de interesse econômico para piscicultura. Entretanto, apesar desse potencial, a produção aquícola não desponta em relação aos outros estados da região Norte. Percebe-se que a informação sobre técnicas de manejo e cuidados em diversos processos na criação de peixes é considerada baixa para os piscicultores da região, principalmente no que se refere sobre a reprodução. Por isso, o objetivo deste trabalho é apresentar as práticas de continuas sobre o processo de capacitação de discentes e piscicultores referentes a reprodução de peixes visando a transferência de tecnologia para escala produtiva local, aprimorar   material didático e promover a interação do discente com os piscicultores, através da troca de informações e uso de técnicas em reprodução. Durante o primeiro período de desenvolvimento deste trabalho, foi realizado um levantamento bibliográfico sobre a temática, para embasar o desenvolvimento das atividades práticas de reprodução. E essas práticas foram realizadas em parceria com o LAMPOA-UFOPA e UAGRO- Santa Rosa –SEDAP- Santarém-PA. No decorrer do estudo foi realizado a coleta de matrizes, observando-se o manejo correto de seleção dos reprodutores, processo técnico de indução hormonal e extrusão. Com os conhecimentos obtidos durante a capacitação, realizou-se uma roda de conversa, um minicurso e a produção de um folder com informações sobre técnicas de reprodução de peixes, onde foi repassado para os piscicultores no III Encontro para Produtores sobre Técnicas Alternativas em Aquicultura (EPAQUI), realizado na Cidade de Monte Alegre nos dias 16 e 17 de agosto de 2019. Este evento é idealizado pelo grupo de pesquisa Aquicultura no Baixo Amazonas e pelo Projeto de Extensão Multiplicadores em Aquicultura na Região Oeste do Pará, que ocorre anualmente visando a integração da academia junto a sociedade, de forma a contribuir com o desenvolvimento da piscicultura na região. A transferência de técnicas de reprodução para os piscicultores pode vir a ser um dos elos mais rentáveis na piscicultura além da integração necessária da academia e o setor produtivo, pois quando capacitado tecnicamente o piscicultor poderá reconhecer os caminhos para gerar a demanda por alevinos com boa qualidade, garantindo assim maior crescimento e produção no setor aquícola da região Oeste do Pará.

Pesquisa de anticorpos anti-Rickettsia rickettsii em eqüinos do Centro de Controle de Zoonoses do município de São Paulo (CCZ/SP)

Brazilian Spotter Fever (BSF) is a tick-borne zoonosis transmitted by at least two tick species: Amblyomma cajennense and Amblyomma aureolatum. In areas where the tick vector is A. cajennense, equines are important for being considered primary hosts of this tick species. A. aureolatum, whose primary hosts include birds, some rodent species, and dogs, is incriminated as vector in the metropolitan region of São Paulo city. This work aimed to detect antibodies reactive to Rickettsia rickettsii in equines sent to the Zoonosis Control Center of São Paulo Municipality (CCZ/SP) during the period from 2003 to 2005. After blood collection, sera were obtained by centrifugation and tested by the indirect immunofluorescence assay (IFA) and animals were considered positive if sera presented titers >; 64. During three years, 363 equine sera sent to CCZ/SP, were tested by IFA, and 64 showed reactive: 6 (2003), 16 (2004) and 42 (2005). The end-point titers varied from 64 to 1.024. The results demonstrate a low percentage (17.6%) of reactive animals, when compared with literature data from BSF-endemic areas where A. cajennense is the vector, suggesting that this tick is not a main vector in the study areaA Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma zoonose transmitida por pelo menos duas espécies de carrapatos: Amblyomma cajennense e Amblyomma aureolatum. Os eqüinos assumem um importante papel de sentinela da FMB em áreas onde o carrapato vetor é o A. cajennense, por ser considerado hospedeiro primário dessa espécie de carrapato. O A. aureolatum, cujos hospedeiros primários são aves, alguns roedores silvestres e canídeos, é incriminado como vetor da doença na região da Grande São Paulo. Este trabalho objetivou pesquisar a presença de anticorpos contra Rickettsia rickettsii, agente da FMB, em eqüinos encaminhados ao Centro de Controle de Zoonoses do município de São Paulo (CCZ/SP) no período de 2003 a 2005. Após coleta de sangue, o soro obtido pela centrifugação foi submetido à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e os animais foram considerados positivos quando as amostras de soro apresentaram títulos >; 64. Durante os três anos, foram testados 363 amostras pela RIFI, sendo que 64 se mostraram reagentes: 6 (2003), 16 (2004) e 42 (2005). Os títulos finais variaram de 64 a 1.024. Os resultados obtidos demonstram uma baixa porcentagem de animais reagentes (17,6%) quando comparados com dados de literatura de áreas endêmicas para FMB onde o vetor é o A. cajennense, sugerindo não ser essa espécie responsável pela transmissão da doença na área de estud

Neurodifferentiation and neuroprotection potential of mesenchymal stromal cell-derived secretome produced in different dynamic systems

Parkinson’s disease (PD) is the second most common neurodegenerative disorder and is characterized by the degeneration of the dopamine (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta, leading to a loss of DA in the basal ganglia. The presence of aggregates of alpha-synuclein (α-synuclein) is seen as the main contributor to the pathogenesis and progression of PD. Evidence suggests that the secretome of mesenchymal stromal cells (MSC) could be a potential cell-free therapy for PD. However, to accelerate the integration of this therapy in the clinical setting, there is still the need to develop a protocol for the large-scale production of secretome under good manufacturing practices (GMP) guidelines. Bioreactors have the capacity to produce large quantities of secretomes in a scalable manner, surpassing the limitations of planar static culture systems. However, few studies focused on the influence of the culture system used to expand MSC, on the secretome composition. In this work, we studied the capacity of the secretome produced by bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BMSC) expanded in a spinner flask (SP) and in a Vertical-Wheel™ bioreactor (VWBR) system, to induce neurodifferentiation of human neural progenitor cells (hNPCs) and to prevent dopaminergic neuron degeneration caused by the overexpression of α-synuclein in one Caenorhabditis elegans model of PD. Results showed that secretomes from both systems were able to induce neurodifferentiation, though the secretome produced in the SP system had a greater effect. Additionally, in the conditions of our study, only the secretome produced in SP had a neuroprotective potential. Lastly, the secretomes had different profiles regarding the presence and/or specific intensity of different molecules, namely, interleukin (IL)-6, IL-4, matrix metalloproteinase-2 (MMP2), and 3 (MMP3), tumor necrosis factor-beta (TNF-β), osteopontin, nerve growth factor beta (NGFβ), granulocyte colony-stimulating factor (GCSF), heparin-binding (HB) epithelial growth factor (EGF)-like growth factor (HB-EGF), and IL-13. Overall, our results suggest that the culture conditions might have influenced the secretory profiles of cultured cells and, consequently, the observed effects. Additional studies should further explore the effects that different culture systems have on the secretome potential of PD.This work has been funded by la Caixa Foundation and Portuguese Foundation for Science and Technology (FCT) under the agreement LCF/PR/HP20/52300001; ICVS Scientific Microscopy Platform, member of the national infrastructure PPBI—Portuguese Platform of Bioimaging (PPBI-POCI-01-0145-FEDER-022122); by National funds, through the Foundation for Science and Technology (FCT)—project UIDB/50026/2020 and UIDP/50026/2020. CRM was supported by a Ph.D. scholarship from FCT and the company Stemmatters, Biotecnologia e Medicina Regenerativa SA (PD/BDE/127833/2016). Funding received by iBB-Institute for Bioengineering and Biosciences from FCT (UID/BIO/04565/2020) and through the project PTDC/EQU-EQU/31651/2017 is acknowledged. MAF was supported by a Ph.D. scholarship from FCT (SFRH/PD/BD/128328/2017). RC was supported by the EXOpro project (PTDC/EQU-QUE/31651/2017). JPS was supported by a Ph.D. scholarship from FCT and the company Bn’ML—Behavioral & Molecular Lab (PD/BDE/127834/2016). DS was supported by a Ph.D. scholarship from FCT and the company Stemmatters, Biotecnologia e Medicina Regenerativa S.A. (PD/BDE/135567/2018) JC was supported by a Ph.D. scholarship from FCT (SFRH/BD/5813/2020)

Dificuldades na atuação docente e os saberes essenciais à prática: concepções dos egressos do curso de licenciatura em química do ifgoiano, campus Iporá / Difficulties in teaching and the knowledge essential to the practice: conceptions of graduates of the undergraduate course in chemistry of ifgoiano, campus Iporá

As dificuldades encontradas na prática docente e os saberes necessários à formação inicial, não são desconhecidos. Os saberes adquiridos durante a formação inicial, são a base fundamental para uma melhor formação ética, social, cultural e histórica do futuro professor. Nesse contexto, o presente trabalho buscou verificar quais são as principais dificuldades enfrentadas na atuação docente dos egressos do curso de Licenciatura em Química do Instituto Federal de Educação, Ciências e Tecnologia, Campus Iporá, bem como os saberes essenciais à prática docente. O trabalho que apresenta uma abordagem qualitativa, contou com a participação de 10 egressos do curso de Licenciatura em Química do IFGoiano, Campus Iporá, que concluíram a graduação entre os anos de 2014 e 2017 e que atuam como professores na Educação Básica e no Ensino Superior no município de Iporá-GO e região. A coleta de dados, deu-se medidante preenchimento de questionário online, elaborado na Plataforma Google. Para a análise dos dados, adotou-se a análise do discurso dos participantes. Os resultados indicaram como principais dificuldades enfrentadas pelos egressos, a falta de tempo, planejamento de atividades curriculares, desinteresse dos alunos e a falta de relação entre a formação teórica e a prática docente. Sobre os saberes docentes, os resultados evidenciaram a importância dos saberes exeperiencial e cultural na prática docente dos egressos, sendo reforçado ainda, na fala de alguns participantes a importância dos saberes como um todo

APLICAÇÃO DE MÉTODOS MATEMÁTICOS PARA ANALISAR A AÇÃO RADIOPROTETORA DO Ginkgo biloba A NÍVEL CEREBRAL

Introduction: The protective effect of Ginkgo biloba (Gb), a natural antioxidant, against toxicity induced by chemical and physical agents has been the subject of studies. Objective: To propose quantitative methods associated with histological techniques to analyze the effectiveness of Gb as a cerebral radioprotector. Method: 35 rats were used, grouped into: group 1: control; group 2: exposed to ionizing radiation (IR); group 3: treated with Gb; group 4: exposed to IR and subsequently treated with Gb; group 5: treated with Gb and subsequently exposed to IR. The recordings obtained by the electrocorticogram were evaluated using the Fourier Transform, Approximate Entropy and Lempel-Ziv Complexity. Finally, the hippocampus was collected and analyzed using histological techniques. Results: The analysis of the experiments shows that IR interferes with cortical electrical activity, increasing the frequency of delta and beta waves and decreasing theta and alpha. While groups 4 and 5 were similar to 1, demonstrating a radioprotective capacity. Regarding histology, apoptosis was identified in group 2 in the CA1 and Dentate Gyrus region of the hippocampus. Conclusion: Based on these data, it is concluded that the protective effect of Gb extract can act as an adjunct therapy to reduce IR-induced toxicity.Introducción: El efecto protector del Ginkgo biloba (Gb), antioxidante natural, frente a la toxicidad inducida por agentes químicos y físicos ha sido objeto de estudios. Objetivo: Proponer métodos cuantitativos asociados a técnicas histológicas para analizar la efectividad del Gb como radioprotector cerebral. Método: Se utilizaron 35 ratas, agrupadas en: grupo 1: control; grupo 2: expuestos a radiaciones ionizantes (IR); grupo 3: tratado con Gb; grupo 4: expuestos a IR y posteriormente tratados con Gb; grupo 5: tratado con Gb y posteriormente expuesto a IR. Los registros obtenidos por el electrocorticograma fueron evaluados mediante la Transformada de Fourier, Entropía Aproximada y Complejidad de Lempel-Ziv. Finalmente, se recogió y analizó el hipocampo mediante técnicas histológicas. Resultados: El análisis de los experimentos muestra que la IR interfiere con la actividad eléctrica cortical, aumentando la frecuencia de las ondas delta y beta y disminuyendo theta y alfa. Los grupos 4 y 5 fueron similares al 1, demostrando capacidad radioprotectora. En cuanto a la histología, se identificó apoptosis en el grupo 2 en la región CA1 y giro dentado del hipocampo. Conclusión: Con base en estos datos, se concluye que el efecto protector del extracto de Gb puede actuar como terapia complementaria para reducir la toxicidad inducida por IR.Introdução: O efeito protetivo do Ginkgo biloba (Gb), um antioxidante natural, contra a toxicidade induzida por agentes químicos e físicos tem sido alvo de estudos. Objetivo: Propor métodos quantitativos associados a técnicas histológicas para analisar a eficácia do Gb como radioprotetor cerebral. Método: Utilizaram-se 35 ratos, agrupados em: grupo 1: controle; grupo 2: exposto a radiação ionizante (RI); grupo 3: tratado com o Gb; grupo 4: exposto a RI e posteriormente tratado com o Gb; grupo 5: tratado com o Gb e posteriormente exposto a RI. Os registros obtidos pelo eletrocorticograma, foram avaliados através da Transformada de Fourier, Entropia Aproximada e Complexidade de Lempel-Ziv. Por fim, foi realizado a coleta e análise do hipocampo por meio de técnicas histologias. Resultados: A análise dos experimentos mostra que a RI interfere na atividade elétrica cortical, aumentando a frequência das ondas delta e beta e diminuindo teta e alfa. Já os grupos 4 e 5 se assemelharam ao 1, demostrando uma capacidade radioprotetora. Em relação a histologia, foi identificada apoptose no grupo 2 na região CA1 e Giro Denteado do hipocampo. Conclusão: Com base nesses dados, conclui-se que o efeito protetor do extrato do Gb pode atuar como uma terapia adjunta para redução da toxicidade induzida pela RI

In vitro leishmanicidal, antibacterial and antitumour potential of anhydrocochlioquinone A obtained from the fungus Cochliobolus sp

The bioassay-guided fractionation of the ethyl acetate extract of the fungus Cochliobolus sp. highlighted leishmanicidal activity and allowed for anhydrocochlioquinone A (ANDC-A) isolation. MS, 1D and 2D NMR spectra of this compound were in agreement with those published in the literature. ANDC-A exhibited leishmanicidal activity with EC50value of 22.4 \uc2\ub5g/mL (44 \uce\ubcM) and, when submitted to the microdilution assay against Gram-positive and Gram-negative bacteria, showed a minimal inhibitory concentration against Staphylococcus aureus ATCC 25295 of 128 \uce\ubcg/mL (248.7 \uce\ubcM). It was also active against five human cancer cell lines, showing IC50values from 5.4 to 20.3 \uce\ubcM. ANDC-A demonstrated a differential selectivity for HL-60 (SI 5.5) and THP-1 (SI 4.3) cell lines in comparison with Vero cells and was more selective than cisplatin and doxorubicin against MCF-7 cell line in comparison with human peripheral blood mononuclear cells. ANDC-A was able to eradicate clonogenic tumour cells at concentrations of 20 and 50 \uce\ubcM and induced apoptosis in all tumour cell lines at 20 \uce\ubcM. These results suggest that ANDC-A might be used as a biochemical tool in the study of tumour cells biochemistry as well as an anticancer agent with durable effects on tumours

Entendendo a Síndrome de Crisponi: um estudo sobre os impactos da doença

Introduction: Crisponi Syndrome refers to a rare autosomal recessive disease, usually recognized in the neonatal period. It is characterized by muscle contractions in response to stimuli, hyperthermia, salivation, organ failure and inability to swallow. Despite being rare, it is a serious disease and impacts on the lives of affected patients. Objectives: The present study aims to provide a review of the articles published in the literature that address Crisponi Syndrome, with the purpose of fostering improvements aimed at the disease and contributing to the formation of scientific knowledge. Methodology: To achieve this objective, the authors carried out a systematic review of the literature, using descriptors related to the theme proposed in this review. The articles were selected carefully, aiming for the veracity and reliability of this work. Results: The analysis of the selected studies revealed a variety of information about Crisponi Syndrome, such as its etiology, clinical characteristics and possible symptomatic treatments. Conclusion: This review provided a comprehensive overview of Crisponi Syndrome. However, it highlights the importance of continuous research into the disease in order to improve clinical and scientific results.Introdução: A Síndrome de Crisponi refere-se a um tipo de doença autossômica, recessiva e rara, geralmente reconhecida no período neonatal. É caracterizada por contrações musculares em resposta a estímulos, hipertermia, salivação, falência orgânica e incapacidade de deglutição. Apesar de rara, é uma doença grave e impactante na vida dos pacientes acometidos. Objetivos: O presente estudo busca trazer uma revisão dos artigos publicados na literatura que abordam a Síndrome de Crisponi, com o propósito de fomentar melhorias voltadas à doença e contribuir na formação do conhecimento científico. Metodologia: Para alcançar este objetivo, os autores realizaram uma revisão sistemática da literatura, utilizando descritores relacionados ao tema proposto nesta revisão. Os artigos foram selecionados de forma criteriosa, almejando a veracidade e confiabilidade deste trabalho. Resultados: A análise dos estudos selecionados revelou uma variedade de informações acerca da Síndrome de Crisponi, como a sua etiologia, características clínicas e possíveis tratamentos sintomáticos. Conclusão: Esta revisão forneceu uma visão abrangente sobre a Síndrome de Crisponi. Entretanto, destaca-se a importância da contínua pesquisa acerca da doença para a melhora de resultados clínicos e científicos.&nbsp