Técnicas moleculares e sorológicas na detecção de vírus fitopatogênicos em tecidos de Videira (Vitis spp.)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2016.A videira é uma das frutíferas mais produzidas no mundo. Seu cultivo está presente na cultura de praticamente todos os povos e difundida por várias partes do mundo. Contudo, devido à forma de propagação, predominantemente vegetativa, presença constante de fitófagos e utilização de enxertia, é recorrente a presença de vírus fitopatogênicos em plantas de videira. Por este motivo, ao longo dos anos, muitos estudos foram realizados com o objetivo de desenvolver e aperfeiçoar os métodos de indexagem. Os primeiros métodos adotados para indexagem em videiras, foi a observação de sintomas nas plantas ou em plantas indicadoras, através da enxertia, esta pratica é conhecida como indexagem biológica. Com a necessidade de maior agilidade e precocidade para identificação de plantas com vírus, passou-se a ser utilizados métodos de indexagem sorológica, através dos testes do tipo ELISA. ? Neste cenário, o objetivo com este trabalho foi testar e desenvolver métodos confiáveis para a indexagem molecular de videiras, assim como conhecer a presença e distribuição dos principais vírus em viveiros nacionais. Um estudo preliminar foi implantado visando estabelecer um protocolo de extração de RNA adequado para obtenção de material genético com qualidade e pureza. Foram coletadas amostras de 109 plantas matrizes em cinco viveiros nacionais e de um Programa do Banco Genético de Melhoramento da Videira, as amostras foram utilizadas para a realização dos testes sorológico (ELISA) e molecular (RT-qPCR), para os vírus GVA, GVB, GFkV, GFlV, GLRaV-1 e GLRaV-3, o teste ELISA foi realizado utilizando o anti-soro comercial AGRITEST (Valenzano, Itália) e o RT-qPCR através de sonda marcada com química ZenTM (IDT, Coralville, Estados Unidos das Américas). Para o desenvolvimento dos marcadores moleculares, sequências de ORF?s (Open Read Frame) de cada vírus, bem como a sequência do gene 18S rRNA para controle interno, foram obtidas a partir do NCBI e posteriormente análisadas com a ferramenta on line BLAST, para seleção de regiões adequadas para a construção de marcadores moleculares, dentre as sequências obtidas, foi selecionada as regiões com ausência de pontos de mutação após o alinhamento das fitas, para isto, foi utilizado o software BioEdit. Foram construídos marcadores moleculares (forward | probe | reverse) com o quencher interno ZenTM e fluorescência do reporter FAM em três fragmentos genômicos para cada vírus, utilizando o algoritmo da ferramenta on line PrimerQuest. Para os testes de amplificação, via T-qPCR, foi utilizadoIXamostras de três isolados virais distintos e a reação foi realizada com o mastermix QuantiTec Probe (Qiagen, Hilden, Alemanha) em 45 ciclos de amplificação. Nos testes preliminares, foi observado maior qualidade e concentração do RNA obtido extraído a partir de tecidos tenros, como o mesocarpo de frutos e a folha da videira, contudo, devido a estes tecidos possuírem comummente reduzida carga viral, não são utilizados para indexagem, que é tradicionalmente realizada através de segmentos de sarmentos em dormência. Para este tecido, foi observado melhores resultados utilizando o kit de extração RNeasyPlant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemanha). Devido a isto, este kit foi empregado durante o desenvolvimento deste estudo. Os marcadores sintetizados para os vírus GVA, GVB e GFlV não amplificaram na reação de RT-qPCR, provavelmente devido a dificuldade no anelamento das sequências utilizadas, desta forma, para estes vírus será necessário novos estudos para síntese de sequências a serem empregadas na indexagem. Para o GFkV, GLRaV-1 e GLRaV-3 foi possível utilizar os marcadores desenvolvidos neste estudo. Em todos os viveiros coletados foi identificado a presença de ao menos uma planta contaminada por vírus, somente estando livre de contaminação as mudas da coleção do Programa de Melhoramento Genético. O GVB, seguido pelo GFkV foram os vírus encontrados com maior frequência neste estudo, enquanto o GVA foi o único vírus ausente em todas as amostras indexadas. Não foi observado a presença de GLRaV-1 pelo teste ELISA, sendo uma amostra identificada como positiva para este vírus por meio da indexagem molecular. Para os vírus GVA, GVB e GFlV será necessário o desenvolvimento de maiores estudos para validar marcadores moleculares com a química ZenTM (IDT, Coralville, Estados Unidos das Américas), o marcador GLRaV-1 01 e GFkV 01 podem ser empregados para a indexagem para os vírus GLRaV-1 e GFkV respectivamente, bem como os marcadores GFLRaV-3 01 e GLRaV-3 03 podem ser utilizados para indexagem do vírus GLRaV-3 em reações de RT-qPCR a partir de tecidos de videira.Abstract : The grapevine is one of the fruit world's most productive importance, being rooted in almost all cultures and spread in various parts of the world. However, because the propagation method, predominantly vegetative, through grafting, facilitate the presence of pathogenic viruses in vine tissues. For this reason, over the years, many studies objective develop and improve the indexing methods. The old methods used for vine indexing was the simple observation of symptoms in plants or indicator plants through grafting, this known as a biological indexing. Nowadays, improving the speed and precocity for indexing, serological methods are been adopted, the most common is ELISA test. These due to the strong advance in molecular biology in recent years, which stand out for their accuracy, reliability and speed of execution. However, to adopt molecular tests, it is necessary develop solid and reliable approaches. The objective of this work is test and develop reliable methods for molecular grapevine indexing, as well knowing the presence and distribution of the main virus in National Nurseries. A preliminary study was implanted looking for stablish one adequate RNA extraction protocol to obtain quality genetic material. Were collected samples from 109 plants in 5 national nurseries, and from the Grapevine breeding program and genetic bank, the samples were utilized to make the serological test (ELISA) and molecular (RT-qPCR) to the virus GVA, GVB, GFkV, GFlV, GLRaV-1 and GLRaV-3. The ELISA test made using the commercial anti serological AGRITEST (Valenzano, Italy), and the RT-qPCR through the labeled probe from ZenT chemilcal (IDT, Coralville, USA). To develop molecular markers, ORF?s sequences (Open Read Frame) of each virus, as well the gene sequence of 18S rRNA to internal control, sequences obtained from NCBI and after analyzed with online BLAST tool. To select adequate regions to build molecular markers, between the obtained sequences, the regions with absence of mutation points after alignment were selected, for this; we made use of BioEdit software. Molecular markers (forward/probe/reverse) designed with internal quencher Zen and fluorescence from reporter FAM in three genomic fragments for each virus, utilizing the logarithmic online tool PrimerQuest. For the amplification test, through T-qPCR, we made yse of three distinct viral samples, and the reaction made using mastermix QuantiTec Probe (Qiagen Hilden, Germany) in 45 amplification cycles.XIIn the preliminary tests, more RNA quality and concentration obtained from tender tissues, like fruits mesocarp and grapevine leaf. However, due to the reduced viral charge from this tissue, are not widely used for indexing, normally is used segments from dormancy branches. For this tissue, better results utilizing RNeasyPlant Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) observed. For this reason, we made use of this kit during this study. The molecular markers were synthetized to the virus GVA, GVB, and GF1V did not amplify in the RT-qPCR reaction, probably due to annealing difficulties in the utilized sequences, this way, to this virus it is necessary new studies to synthetize sequences for indexing using. To the GFkV, GLRaV-1 and GLRaV-3 the markers developed on this study amplified. In all the nurseries, at least one plant had virus contamination, being free only the collection from the Plant breeding program. The GVB, followed by the GFkV are encountered with more frequency in this study, while the GVA is the only absence in all the samples. The ELISA test did not identify GLRaV-1 to any sample, while one positive sample detected through molecular indexing. To the virus GVA, GVB, and GF1V will be necessary develop more studies to validate molecular markers. The marker GLRaV-1 01 and GFkV 01 are ready to use in indexing of GLRaV-1 e GFkV virus respectively, as well the markers GFLRaV-3 01 e GLRaV-3 03 are to the GLRaV-3 virus in RT-qPCR from grapevine tissues

Phenology and thermal accumulation in grapevines in the Fronteira Oeste region of Rio Grande do Sul, Brazil

O objetivo deste trabalho foi avaliar a exigência térmica, obtida por diferentes métodos de cálculo, para caracterizar a fenologia das videiras (Vitis vinifera) 'Cabernet Sauvignon', 'Tannat', 'Ruby Cabernet' e 'Merlot', cultivadas na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul. O desenvolvimento fenológico foi acompanhado durante cinco safras – 2005/2006 a 2009/2010. As temperaturas mínimas e máximas do ar foram coletadas diariamente e foram testados oito métodos de soma térmica: M1.1, M1.2 e M1.3, que utilizaram somente a temperatura base inferior (10°C); M2.1 e M2.2, que consideraram também a temperatura ótima de desenvolvimento de 25°C; e M3.1, M3.2 e M3.3 que, além das anteriores, utilizaram 35°C como temperatura base superior do desenvolvimento. Estes métodos foram comparados pelo erro‑padrão das estimativas de soma térmica. O teste SNK foi utilizado para a comparação da exigência térmica entre as cultivares. O método M3.3 foi o que melhor simulou o desenvolvimento em 'Tannat' e 'Merlot' (1.823,1 e 1.780,8 graus‑dia respectivamente). No entanto, o menor desvio foi obtido em 'Cabernet Sauvignon' e 'Ruby Cabernet', pelo método M3.1 (1.958,9 e 1.944,8 graus‑dia respectivamente). Os métodos que empregaram as três temperaturas cardinais apresentaram maior precisão. 'Tannat' e 'Merlot' são as cultivares de videira que apresentam a menor exigência térmica para completar o ciclo.The objective of this work was to evaluate the thermal requirement, obtained by different thermal time calculation methods, to characterize the grapevine (Vitis vinifera) phenology of 'Cabernet Sauvignon', 'Tannat', 'Ruby Cabernet', and 'Merlot' grown in the Fronteira Oeste region, of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. The phenological development was followed for five seasons – 2005/2006 to 2009/2010. Minimum and maximum air temperatures were recorded daily, and the following eight thermal time methods were tested: M1.1, M1.2, and M1.3, which use only the down threshold temperature (10°C); M2.1 and M2.2, which also consider 25°C as the optimum temperature for development; and M3.1, M3.2, and M3.3, which, besides using the prior temperatures, consider 35°C as the upper threshold temperature of development. These methods were compared using the standard error (SE) estimates of accumulated heat. The SNK test was used to compare the thermal requirement between cultivars. M3.3 was the method that best simulated 'Tannat' and 'Merlot' development (1,823.1 and 1,780.8 degree‑day respectively). However, the least deviation was obtained in 'Cabernet Sauvignon' and 'Ruby Cabernet' using the M3.1 method (1,958.9 and 1,944.8 degree‑ day respectively). Methods employing the three cardinal temperatures showed greater accuracy. 'Tannat' and 'Merlot' are the cultivars that show the lowest thermal requirement to complete the cycle

Estimativa do plastocrono das videiras 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay' na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul

The objective of this work was to estimate the plastochron index of the 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' grapevine varieties in Fronteira Oeste, in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. The experiment was conducted in 2010, in a completely randomized design, using 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' grapevines grown in the municipalities of Itaqui, São Borja, and Maçambará, which were referred to as sites 1, 2, and 3, respectively. Phenological monitoring of the varieties was done from the beginning of sprouting until the pruning of canes (green trimming). The daily thermal sum (dTS, ºC day) was calculated using the cardinal temperatures for node appearance in grapevines (10, 25, and 35ºC), whereas the accumulated thermal sum (aTS, oC day) was obtained by adding up the dTS. The plastochron index was estimated by the inverse of the angular coefficient of the linear regression between the number of nodes per cane and aTS. In all three sites, both 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' required degree-days of 10°C and aTS of 810ºC to complete the cycle from the beginning of sprouting until the end of flowering. The estimated plastochron indexes of the 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' grapevines, in Fronteira Oeste, in the state Rio Grande do Sul, were 40.4 and 49.7ºC day per node, respectively.O objetivo deste trabalho foi estimar o plastocrono das variedades de videira 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay' na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul. O experimento foi conduzido em 2010, em delineamento experimental inteiramente casualizado, com as videiras 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay' cultivadas nos municípios de Itaqui, São Borja e Maçambará, denominados locais 1, 2 e 3, respectivamente. Realizou-se o monitoramento fenológico das variedades desde o início da brotação até a realização da desponta dos ramos. A soma térmica diária (STd, oC dia) foi calculada a partir das temperaturas cardinais para o aparecimento de nós em videira (10, 25 e 35ºC), enquanto a soma térmica acumulada (STa, ºC dia) foi obtida pela soma da STd. O plastocrono foi estimado pelo inverso do coeficiente angular da regressão linear entre o número de nós por sarmento e a STa. Nos três locais, tanto 'Cabernet Sauvignon' como 'Chardonnay' necessitaram de graus-dia de 10°C e STa de 810°C para completar o ciclo desde o início da brotação até o fim da floração. Os plastocronos estimados das variedades 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay', na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul, foram de 40,4 e 49,7ºC dia por nó, respectivamente

Efeito de extrato de algas no enraizamento de estaca de pitaia

In Brazil, pitaya has assumed relevant marketing status as a result of the fruit high demand and the low national production. However, pitaya cultivation needs technical studies. Thus, the present work aimed to evaluate the effect of algae extract and indolbutyric acid (IBA) on rooting of pitaya cuttings from species Hylocereus undatus and Hylocereus polyrhizus. Pitaya cuttings were treated with IBA, algae extract, the combination of IBA and algae extract, and the control. For H. undatus the best responses for root number, volume and mass were obtained from cuttings treated with algae extract and the combination of IBA and algae extract. For H. polyrhizus, the best responses for number of shoots, volume and root mass were obtained in cuttings treated with IBA, algae extract and the combination of IBA and algae extract. The algae extract (SprintAlga TS®) is promising as an alternative or complement to IBA.No Brasil a pitaia tem assumido status mercadológico relevante, visto a alta demanda da fruta e a reduzida produção nacional. Contudo, a cultura da pitaia carece de estudos técnicos. Dessa forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de extrato de algas e do ácido Indolbutírico (AIB) no enraizamento e na brotação de estacas das espécies de pitaia Hylocereus undatus e Hylocereus polyrhizus. Estacas de pitaia foram tratadas com AIB, extrato de algas, combinação de AIB e extrato de algas, e a testemunha. Para H. undatus as melhores respostas de número, volume e massa de raízes foram obtidas em estacas tratadas com o extrato de algas e com a combinação de AIB e extrato de alga. Para H. polyrhizus as melhores respostas para número de brotações, volume e massa de raízes foram obtidas em estacas tratadas com o extrato de algas, com AIB e com a combinação de AIB e extrato de alga. O extrato de algas SprintAlga TS® se mostrou promissor como alternativa ou complemento ao AIB

Exploring phenotypic plasticity leaf trait relationships in fungal-resistant grapevines using linear regression: Implications of the genotype environment interaction

Accurate and non-destructive models for predicting leaf area (LA) are essential for monitoring vineyard growth and developing automated algorithms. In this study, we developed and compared the performance of eight linear regression models for predicting LA in eleven fungal-resistant grapevine genotypes. We also explored the phenotypic plasticity of leaf traits and their relationship with LA using kernel density estimation analysis. We found that genotype played a major role in defining leaf shape, and genotype-environment interaction was observed. The best models for LA estimation were identified for each genotype, and a leaf deformation index was proposed. Our results provide accurate and robust models for estimating LA in fungal-resistant grapevine genotypes and demonstrate the relationship between leaf traits and the environment. Additionally, we present a method for defining leaf asymmetry. Overall, this study contributes to the development of non-destructive and automated techniques for monitoring vineyard growth

Fenologia e acúmulo térmico em videiras viníferas na região da Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a exigência térmica, obtida por diferentes métodos de cálculo, para caracterizar a fenologia das videiras (Vitis vinifera) 'Cabernet Sauvignon', 'Tannat', 'Ruby Cabernet' e 'Merlot', cultivadas na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul. O desenvolvimento fenológico foi acompanhado durante cinco safras - 2005/2006 a 2009/2010. As temperaturas mínimas e máximas do ar foram coletadas diariamente e foram testados oito métodos de soma térmica: M1.1, M1.2 e M1.3, que utilizaram somente a temperatura base inferior (10°C); M2.1 e M2.2, que consideraram também a temperatura ótima de desenvolvimento de 25°C; e M3.1, M3.2 e M3.3 que, além das anteriores, utilizaram 35°C como temperatura base superior do desenvolvimento. Estes métodos foram comparados pelo erro-padrão das estimativas de soma térmica. O teste SNK foi utilizado para a comparação da exigência térmica entre as cultivares. O método M3.3 foi o que melhor simulou o desenvolvimento em 'Tannat' e 'Merlot' (1.823,1 e 1.780,8 graus-dia respectivamente). No entanto, o menor desvio foi obtido em 'Cabernet Sauvignon' e 'Ruby Cabernet', pelo método M3.1 (1.958,9 e 1.944,8 graus-dia respectivamente). Os métodos que empregaram as três temperaturas cardinais apresentaram maior precisão. 'Tannat' e 'Merlot' são as cultivares de videira que apresentam a menor exigência térmica para completar o ciclo

Piramidação de genes da Videira (Vitis vinifera) para resistência ao Mildio (Plasmopara viticola) e caracterização das interações genótipos e ambiente

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2020.O cultivo de uva possui marcante papel cultural em diversas regiões do mundo. Programas de melhoramento genético da videira tem baseado as seleções de genótipos superiores a partir da avaliação de caracteres de qualidade da uva e resistência a doenças, via seleção de locos gênicos associados à resistência (R-locos). Baseando-se na crescente demanda por cultivares viníferas com resistência a doenças, foi desenvolvida esta tese, com o objetivo de gerar e selecionar genótipos de videira PIWI com genes de resistência ao míldio em diferentes níveis de piramidação, conhecer a dinâmica genética populacional do míldio (Plasmopara viticola) nos vinhedos catarinense, bem como, descrever o desenvolvimento fenológico de genótipos PIWI nas condições climáticas de Santa Catarina. Para isto a tese foi dividida em cinco capítulos. O primeiro capítulo refere-se à seleção assistida por marcadores moleculares. Neste estudo foi verificado que existe efeito aditivo para a maior parte das interações genicas, o genótipo piramidado para os genes Rpv1+Rpv3.1+Rpv10 apresentou o maior nível de resistência e o Rpv10 foi o R-locos que proporcionou maior restrição ao crescimento do patógeno isoladamente. No segundo capítulo, foi avaliado a influência do ambiente e do hospedeiro, contendo diferentes R-locos, sobre a estrutura genética de populações de P. viticola no estado de Santa Catarina, Brasil. Foi demonstrado que a principal influencia sobre a estrutura genética em populações deste patógeno é do hospedeiro, mesmo havendo interações com o ambiente. Hospedeiros contendo genes piramidados apresentaram uma maior barreira para o estabelecimento das populações de míldio. No terceiro capítulo foi caracterizado a fenologia de cultivares PIWI, buscando-se conhecer demanda térmica de alguns cultivares que se destacam como potenciais para cultivo comercial. Foi observado que, em todos os genótipos avaliados a maior exegencia térmica está entre as fases fenológicas de florescimento e o véraison. A exigência térmica para completar o ciclo, na região dos vales da uva Goethe, onde foi acompanhado a soma térmica, variou entre 1260 °C dia (cv. Felícia) e 1454 °C dia (cv. Aromera). O quarto capítulo refere-se ao estudo realizado a partir da mensuração das áreas de folhas de 11 genótipos cultivadas em cinco ambientes distintos. Este estudo indicou a existência de interação entre genótipos e ambiente também para a área da folha. Além disto, foram gerados modelos lineares para predição da área foliar em 11 genótipos. No quinto capitulo esta relatado as atividades de pesquisa desenvolvindas junto à Unità di Genetica e Miglioramento Genetico della Vite (UGMGV), da Fondazione Edmund Mach (Trento, IT), no âmbito de cooperação em que foram desenvolvidas as atividades, foi gerado um estudo descrevendo um genótipo portador de resistência ao míldio, que foi confirmado possuir o Rpv27, que herdou a partir da sua ancestralidade com V. aestivalis. A população segregante gerada a partir da autofecundação deste genótipo gerou indivíduos com segregação para a resistência ao míldio, oídio e black rot, indicando que seu uso é possível como doador de novas fontes de resistência genética a doenças em programas de melhoramento genético da videira.Abstract: The cultivation of wine grapes has a marked cultural role in different regions of the world, being mainly linked to quality. Genetic improvement programs for the grapevine have based the selection of superior genotypes based on the evaluation of qualitative traits, such as absence of seeds, for table grapes, bunch architecture, as well as, resistance to diseases, via selection of R- loco. Based on this scenario and on the growing demand for disease-resistant wine cultivars, this thesis was developed, aiming to generate and select genotypes of PIWI grape with downy mildew resistance genes at different levels of pyramidation, to know the population genetic dynamics of the downy mildew (Plasmopara viticola) in the Santa Catarina vineyards, as well as describe the phenological development of PIWI genotypes in the Santa Catarina climatic conditions. For this, the thesis was divided into five chapters. The first chapter refers to the selection assisted by molecular markers, generating genotypes that carry pyramidized resistance genes. In this study it was verified that there is an additive effect for most of the genetic interactions, the pyramid genotype for the genes Rpv1+Rpv3.1+Rpv10 showed the highest level of resistance and Rpv10 was the R-locus that when only in the genome provided greater restriction to the growth of the pathogen. In the second chapter, the influence of the environment and the host, containing different R-loci, on the genetic structure of P. viticola populations in the state of Santa Catarina, Brazil, was evaluated. It has been shown that the main influence on the genetic structure in populations of this pathogen is that of the pathogen, even if there is interaction with the environment. It has also been demonstrated that hosts containing pyramid genes present a greater barrier to the establishment of downy mildew populations. In the third chapter, the phenology of PIWI cultivars was characterized. It was observed that, in all genotypes evaluated, the greatest thermal exegence is between the phenological phases of flowering and veraison. The thermal requirement to complete the cycle, in the region of the Goethe grape valleys, where the thermal sum was monitored, varied between 1260 ° C day (cv. Felícia) and 1454 ° C day (cv. Aromera). Leaf areas of 11 genotypes grown in five different environments were measured. This study also indicated the existence of interaction between genotypes and environment for the leaf area. In addition, linear models were generated to predict the leaf area for the 11 genotypes, based on the measurement of some dimension of the same. A study was also generated describing a genotype with resistance to mildew, which was confirmed to have Rpv27, which it inherited from its ancestry with V. aestivalis. The segregating population generated from the self-fertilization of this genotype generated individuals with segregation for resistance to mildew, powdery mildew and black rot, indicating that its use is possible as a donor of new sources of genetic resistance to diseases in genetic improvement programs of the vine

Mathematical models to estimate leaf area of grapevine varieties Chardonnay, Marselan and Pinot Noir

Abstract: This study aimed to develop mathematical models for estimating leaf area in three grapevine cultivars (‘Chardonnay’, ‘Marselan’, and ‘Pinot Noir’) grown with plastic overhead cover in Santa Catarina, Brazil. Linear measurements of midvein length, left and right secondary veins, and the sum of secondary veins were taken from 200 leaves per variety during the 2020/21 and 2021/22 cycles. Linear regression models were developed using leaf area and midvein length, midvein length squared, sum of secondary veins, and sum of secondary veins squared as predictors. Model performance was evaluated based on Pearson correlation coefficient, root mean square error, bias, and efficiency. The developed models accurately estimate leaf area for the tested grapevine cultivars under plastic cover conditions, with the best-performing model using the sum of secondary veins squared as a predictor variable. These models can be useful for researchers and grapevine growers for estimating leaf area and improving plant growth management