Transforming growth factor-β (TGF-β) maintains follicular ultrastructure and stimulates preantral follicle growth in caprine ovarian tissue cultured in vitro

O objetivo desse estudo foi investigar se o TGF-β afeta a sobrevivência, ativação e crescimento de folículos primordiais caprinos inclusos no córtex ovariano após o cultivo in vitro. Ovários de cabras foram coletados em abatedouro e fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por um e sete dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM+) sozinho ou suplementado com TGF-β (1, 5, 10 ou 50ng/mL). Fragmentos ovarianos não cultivados e cultivados foram processados para análise histológica e ultraestrutural. Os resultados mostraram que, comparado ao controle fresco, houve diminuição no percentual de folículos morfologicamente normais em todos os tratamentos somente após sete dias de cultivo. O TGF-β não afetou a ativação folicular independente da concentração testada, contudo, o diâmetro folicular foi superior (P<0.05) no tratamento com 10ng/mL de TGF-β quando comparado ao controle fresco e aos demais tratamentos. Além disso, essa mesma concentração manteve a ultraestrutura normal dos folículos após sete dias de cultivo. Em conclusão, o TGF-β apresentou efeito adicional no crescimento folicular e na manutenção da integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos inclusos no tecido ovariano quando utilizado na concentração de 10ng/mL durante sete dias de cultivo.The objectives of this study were to investigate whether TGF-β affect the survival, activation and further growth of goat primordial follicles enclosed in ovarian cortex after in vitro culture. Goat ovaries were collected from an abattoir and pieces of ovarian tissues were cultured for one or seven days in a supplemented alpha Minimum Essential Medium, alone or containing TGF-β (1, 5, 10 or 50ng/mL). Ovarian tissues from the fresh control as well as those cultured were processed for histological and ultrastructural studies. The results showed that when compared with fresh control, there was decrease in the percentages of histologically normal follicles in all treatments only after seven days culture. TGF-β did not affect the activation of preantral follicles regardless of its concentration, however, larger follicles diameter (P<0.05) was observed using 10ng/mL TGF-β than in the fresh control and other treatments. Moreover, this concentration maintained the normal ultrastructure after seven days of culture. In conclusion, TGF-β showed additional effect on the follicle growth and the maintenance of ultrastructural integrity of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue when used at 10ng/mL during seven days of culture

Avaliação toxicológica e efeito do extrato acetato de etila da fibra de Cocos nucifera L. (Palmae) sobre a resposta inflamatória in vivo Toxicological evaluation and effect of ethyl acetate extract of the fiber of Cocos nucifera L. (Palmae) on inflammatory response in vivo

Objetivou-se investigar o efeito do extrato acetato de etila de Cocos nucifera (EAECN) sobre parâmetros fisiológicos e sobre a inflamação tópica induzida por xileno. EAECN foi obtido a partir da água da fibra da casca do coco verde e o teste fitoquímico indicou a presença de taninos condensados, flavononas, flavonóis, flavononóis, xantonas e esteróides. EAECN foi administrado aos camundongos Swiss por via oral em dose única diária de 10, 30, 100 e 250 mg Kg-1 por cinco dias consecutivos para os protocolos de toxicidade e inflamação tópica. No ensaio de toxicidade foram observadas as freqüências cardíacas e respiratórias, a presença de diarréia, analgesia e apatia e realizada a contagem total dos leucócitos do sangue periférico, avaliação macroscópica dos órgãos e peso relativo do rim, fígado, timo e baço. O efeito do EAECN sobre a inflamação tópica foi realizado utilizando-se grupos testes com as diferentes concentrações de EAECN e grupos controles positivos que receberam, pela mesma via nas mesmas condições, NaCl 0,9% ou DMSO a 5% ou o antiinflamatório padrão, Dexametasona (6 mg Kg-1). Todos os animais receberam o agente flogístico (25 µL) nas partes interna e externa da orelha duas horas após o último tratamento, enquanto os animais do grupo controle negativo não receberam qualquer tratamento. Após 50 minutos da aplicação do xileno, os animais foram sacrificados, e uma porção de cada orelha foi retirada e pesada. A diferença de peso entre as orelhas representa o efeito induzido pelos tratamentos. EAECN não desenvolveu toxicidade, não alterou a contagem total de leucócitos, não alterou o peso e nem o peso relativo dos órgãos dos animais tratados em relação aos controles. EAECN não inibiu a inflamação provocada pelo xileno, apresentando efeito pró-inflamatório dependente da dose. Conclui-se que EAECN nos protocolos utilizados não é tóxico e não possui atividade antiinflamatória tópica.<br>This study aimed to investigate the effect of ethyl acetate extract of Cocos nucifera (EAECN) on physiological parameters and xylene-induced topic inflammation. EAECN was obtained from the water of the green coconut husk fiber and the phytochemical test indicated the presence of condensed tannins, flavanones, flavonols, xanthones and steroids. EAECN was orally administered to Swiss mice at a single daily dose of 10, 30, 100 and 250 mg Kg-1 during five consecutive days for toxicity and topic inflammation protocols. Toxicity experiments included the observation of heart and respiratory frequencies, diarrhea, analgesia and apathy, besides total leukocyte count in peripheral blood, macroscopic evaluation of the organs, and relative weight of kidneys, liver, thymus and spleen. The effect of EAECN on topic inflammation was assessed using test groups with different EAECN concentrations and positive control groups which received, by the same route and conditions, NaCl 0.9%, DMSO 5% or reference drug, Dexamethasone (6 mg Kg-1). All the animals received the phlogistic agent (25 µL) in the inner and outer parts of the ears two hours after the last treatment, whereas the negative control group animals did not receive any treatment. At 50 minutes after xylene application, the animals were sacrificed and a portion of each of their ears was removed and weighed. The difference between ear weights represents the effect induced by the treatments. EAECN did not develop toxicity, change leukocyte total count, or alter animal weight and organ relative weight in treated animals compared with control groups. EAECN did not inhibit the xylene-induced inflammation, demonstrating dose-dependent pro-inflammatory effect. In conclusion, EAECN used as in these experimental protocols is not toxic and does not have topic anti-inflammatory activity

Determinação da dose inseminante e embriogênese na fertilização artificial de tambaqui (Colossoma macropomum) Determination of insemination dose and embryonic development in the artificial fertilization of tambaqui (Colossoma macropomum)

Determinou-se a dose inseminante para fertilização artificial e descreveu-se o desenvolvimento embrionário de tambaqui (Colossoma macropomum). Os gametas foram coletados de reprodutores induzidos hormonalmente. Foi realizada fertilização artificial nas proporções de espermatozoides/ovócito de D1-50.666; D2-75.999; D3-101.332; D4-126.665; D5-151.998. O desenvolvimento embrionário foi acompanhado por meio de observações periódicas em estereoscópio até a eclosão dos ovos. Na fase de fechamento do blastóporo foi calculada a taxa de fertilização nas diferentes doses inseminantes. A porcentagem de fertilização aumentou de forma linear segundo a equação &#374; =0,050 + 0,00000773X (R²=97,5), atingindo um platô em 84% na proporção de 102.486 espermatozoides/ovócito. Os embriões apresentaram segmentação meroblástica discoidal, típica de ovos telolécitos, com eclosão ocorrendo aos 357 horas-grau após a fertilização. Conclui-se que o desenvolvimento embrionário de tambaqui obedece ao esperado para peixes com ovos telolécitos e recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 100.000 espermatozoides/ovócito na rotina de fertilização artificial dessa espécie.<br>The objective of this research was to determine the insemination dose for artificial fertilization and describe the embryonic development of tambaqui (Colossoma macropomun). The gametes were collected from induced breeding hormonally. An artificial fertilization was performed with different sperm/oocyte ratios of D1-50666, D2-75999, D3-101 332, 126 665-D4, D5-151 998 sperm/oocyte. Embryonic development was monitored through periodic stereoscopic observations until hatching. When embryos reached the blastopore closure stage, the rate of fertilization in different insemination doses was calculated. A regression equation was estimated to determine the ideal proportion of the gametes. The fertilization rate increased linearly according to the equation &#374; = 0.050 + 0.00000773 X (R² = 97.5), up to the proportion of 102.486 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 84%. The embryonic development of tambaqui was meroblastic discoidal, as expected from telolecithal eggs and we recommend the use of the insemination dose of approximately 100.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization of tambaqui

Determinação da dose inseminante e embriogênese na fertilização artificial de tambaqui (Colossoma macropomum)

Determinou-se a dose inseminante para fertilização artificial e descreveu-se o desenvolvimento embrionário de tambaqui (Colossoma macropomum). Os gametas foram coletados de reprodutores induzidos hormonalmente. Foi realizada fertilização artificial nas proporções de espermatozoides/ovócito de D1-50.666; D2-75.999; D3-101.332; D4-126.665; D5-151.998. O desenvolvimento embrionário foi acompanhado por meio de observações periódicas em estereoscópio até a eclosão dos ovos. Na fase de fechamento do blastóporo foi calculada a taxa de fertilização nas diferentes doses inseminantes. A porcentagem de fertilização aumentou de forma linear segundo a equação Ŷ =0,050 + 0,00000773X (R²=97,5), atingindo um platô em 84% na proporção de 102.486 espermatozoides/ovócito. Os embriões apresentaram segmentação meroblástica discoidal, típica de ovos telolécitos, com eclosão ocorrendo aos 357 horas-grau após a fertilização. Conclui-se que o desenvolvimento embrionário de tambaqui obedece ao esperado para peixes com ovos telolécitos e recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 100.000 espermatozoides/ovócito na rotina de fertilização artificial dessa espécie