Shp-2 Is Dispensable for Establishing T Cell Exhaustion and for PD-1 Signaling In Vivo.

In chronic infection and cancer, T cells acquire a dysfunctional state characterized by the expression of inhibitory receptors. In vitro studies implicated the phosphatase Shp-2 downstream of these receptors, including PD-1. However, whether Shp-2 is responsible in vivo for such dysfunctional responses remains elusive. To address this, we generated T cell-specific Shp-2-deficient mice. These mice did not show differences in controlling chronic viral infections. In this context, Shp-2-deleted CD8 <sup>+</sup> T lymphocytes expanded moderately better but were less polyfunctional than control cells. Mice with Shp-2-deficient T cells also showed no significant improvement in controlling immunogenic tumors and responded similarly to controls to α-PD-1 treatment. We therefore showed that Shp-2 is dispensable in T cells for globally establishing exhaustion and for PD-1 signaling in vivo. These results reveal the existence of redundant mechanisms downstream of inhibitory receptors and represent the foundation for defining these relevant molecular events

Subtelomeric I-scei-mediated Double-strand Breaks Are Repaired By Homologous Recombination In Trypanosoma Cruzi

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Trypanosoma cruzi chromosome ends are enriched in surface protein genes and pseudogenes (e.g., trans-sialidases) surrounded by repetitive sequences. It has been proposed that the extensive sequence variability among members of these protein families could play a role in parasite infectivity and evasion of host immune response. In previous reports we showed evidence suggesting that sequences located in these regions are subjected to recombination. To support this hypothesis we introduced a double-strand break (DSB) at a specific target site in a T. cruzi subtelomeric region cloned into an artificial chromosome (pTAC). This construct was used to transfect T. cruzi epimastigotes expressing the I-SceI meganuclease. Examination of the repaired sequences showed that DNA repair occurred only through homologous recombination (HR) with endogenous subtelomeric sequences. Our findings suggest that DSBs in subtelomeric repetitive sequences followed by HR between them may contribute to increased variability in T. cruzi multigene families. © 2016 Chiurillo, Moraes Barros, Souza, Marini, Antonio, Cortez, Curto, Lorenzi, Schijman, Ramirez and da Silveira.7DEC11/51475-3, FAPESP, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo11/51693-0, FAPESP, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo306591/2015-4, CNPq, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Avaliação da boatividade de frações fenólicas de Eucalyptus globulus labill

No contexto industrial, Eucalyptus globulus Labill é uma das espécies mais importantes para a obtenção de pasta de papel. Deste processo resulta um resíduo, a casca, cuja valorização por extração dos polifenóis tem sido estudada no LSRE [1-3]. Neste âmbito, o extrato obtido utilizando condições otimizadas, foi fracionado por ultra- e/ ou nano-filtração e purificado por adsorção/dessorção. O extrato inicial (Fração I) foi diafiltrado (Fração II) e submetido a um processo de adsorção/desorção. Daqui resultaram 2 frações: a fração recolhida à saída da coluna (Fração III) e a fração purificada obtida por dessorção com etanol (Fração IV). As propriedades antioxidantes das quatro frações (Fração I-IV) foram avaliadas através de ensaios in vitro (atividade captadora de radicais livres, poder redutor e inibição da peroxidação lipídica). Na determinação das propriedades citotóxicas aplicou-se o método da sulforrodamina B a linhas celulares tumorais humanas designadamente, MCF-7 (carcinoma de mama), NCI-H460 (carcinoma pulmão), HCT-15 (carcinoma de cólon), HeLa (carcinoma cervical) e HepG2 (carcinoma hepatocelular). A citotoxicidade das frações foi também avaliada utilizando culturas primárias de células de fígado de porco (células não-tumorais, PLP2). A fração purificada (Fração IV) mostrou ter melhor atividade antioxidante (valores de EC50 inferiores a 841-lg/mL) e antitumoral, (valores de GI50 inferiores a 921-lg/mL) com exceção da linha celular MCF-7 em que a fração à saída da coluna (Fração III) originou melhores resultados (GI50=23 11g/mL). Nenhuma amostra apresentou toxicidade contra células não tumorais (Gl50>400 11g/mL). A maior bioatividade demonstrada pela fração purificada está certamente relacionada com o seu teor superior em compostos fenólicos totais (67%) e proantocianidinas (55 o/o)

Valor nutritivo de pastagens de capim-elefante manejadas sob sistema convencional e agroecológico.

O capim-elefante é utilizado, na sua grande maioria, em sistemas convencionais de produção animal. O objetivo deste trabalho foi comparar o valor nutritivo do capimelefante em sistemas de manejo agroecológico e convencional, quanto a proteína bruta (PB), fibra em detergente neutro (FDN) e digestibilidade in vitro da matéria seca (DIVMS). Foram usados quatro piquetes, com 0,12ha cada um. No sistema convencional, o capim-elefante foi estabelecido singularmente. No sistema agroecológico, o plantio foi feito em linhas afastadas de 3m. Nas entrelinhas, estabeleceu-se a aveia e o azevém no período hibernal, enquanto que no período estival permitiu-se o desenvolvimento de espécies espontâneas. A adubação foi feita com fertilizantes orgânicos (150kg ha-1 de N). No sistema agroecológico, foram conduzidos sete pastejos, de 24/04/2004 a 05/05/2005. Na pastagem convencional, usouse a mesma quantidade de N (uréia), sendo conduzidos quatro ciclos de pastejo, de 06/10/2004 a 05/05/2005. Para ambos os sistemas foram utilizadas vacas da raça Holandês, recebendo complementação alimentar de 3,5kg dia-1 de concentrado com 20% de proteína bruta, constituindo-se nos animais experimentais. Nas avaliações, considerou-se a massa de forragem inicial com base na matéria seca (MS), os componentes botânicos da pastagem e estruturais do capimelefante. As análises de qualidade foram feitas em amostras de pastejo simulado. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com dois tratamentos, convencional e agroecológico, duas repetições (piquetes) e em parcelas incompletas subdivididas no tempo (pastejos). Houve interação (P<0,05) entre tratamentos e pastejos em todas as variáveis. Na pastagem agroecológica, o modelo que melhor se ajustou foi o cúbico para todas as variáveis, em função do tempo de pastejo. Na pastagem convencional, a PB e a DIVMS ajustaram-se melhor ao modelo linear, com taxa positiva de crescimento, sendo observado comportamento inverso para FDN, com o decorrer dos pastejos. Tanto na pastagem convencional quanto na agroecológica encontraram-se associações negativas entre lâmina foliar do capim-elefante com PB e DIVMS e positiva com FDN. Ambos os sistemas apresentaram teores qualitativos elevados das pastagens, considerando-se a adubação, o manejo e o tempo de utilização