Determinação da atividade enzimática de duas importantes proteínas relacionadas à patogênese em plantas de arroz submetidas à indução biótica de resistência contra o fungo Magnaporthe grisea.

Neste trabalho, foram determinadas as atividades enzimáticas das enzimas relacionadas à patogênese: b-1,3-glucanase e peroxidase em plantas de arroz submetidas a tratamento prévio com isolado de Magnaporthe oryzae avirulento ao cultivar de arroz Cica-8, na tentativa de explicar molecularmente, os resultados obtidos com o mesmo tratamento através de avaliação foliar

Potential for using crude extract of Sarocladium oryzae for suppression of rice blast.

Crude extract of an isolate of the fungus Sarocladium oryzae (CNPAF So 20G), containing the antimicrobial cerulenin, was produced and its antagonistic potential on the rice blast pathogen Magnaporthe oryzae was asessed. Cerulenin was detected in crude extract of S. oryzae through thin layer chromatography showing a Rf value of 0.63. The quantity of cerulenin in the crude extract was 237 µg.mL-1. The in vitro inhibition of germination and appressorial formation of M. oryzae was assessed on an artificial hydrophobic surface, using eight different doses of cerulenin ranging from 0.05 to 30.0 µg.mL-1. The LD50 values calculated based on the Probit-log analysis for germination and appressorial formation were 1.298 ± 0.123 µg.mL-1 and 0.0705 ± 0.0062 µg.mL-1 of cerulenin, respectively. The 30.0 µg.mL-1 of cerulenin dose inhibited 98% and 99%, germination and appressorial formation, respectively. The mode of action of cerulenin was studied by staining conidia with Calcofluor White and fluorescent microscopy showing its effect on plasma membrane. Crude extract of S. oryzae suppressed 63% of rice blast disease in greenhouse conditions. The results indicate that a product based on cerulenin and/or S. oryzae has a great potential to be used in biological control of rice blast

Método validado para a determinação de ácido salicílico em folhas de arroz por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE).

O objetivo deste trabalho foi validar analiticamente uma metodologia específica para a quantificação de ácido salicílico em folhas de arroz. Ela será utilizada em trabalhos subsequentes que visam a avaliação da relação entre o teor da molécula e o desenvolvimento da brusone e outras doenças em plantas de arroz. Foi utilizada a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), que por meio do seu processo de validação apresentou-se: seletiva, precisa, linear, exata e robusta, com Limite de Detecção (LD) = 0,43 ng mL-1 e Limite de Quantificação (LQ) = 1,45 ng mL-1. A metodologia também foi avaliada como vantajosa devido à sua menor complexidade operacional e ao seu baixo custo relativo em relação aos métodos previamente reportados na literatura.bitstream/item/119147/1/bpd40.pd

Inibição do desenvolvimento micelial de Magnaporthe oryzae por metabólito extracelular produzido por Sarocladium oryzae.

A brusone (Magnaporthe oryzae) é a principal doença da cultura do arroz. Algumas estratégias para o biocontrole vêm sendo estudadas como integrantes do manejo integrado da doença. Com o objetivo de caracterizar parcialmente o filtrado da cultura de Sarocladium oryzae responsável por antagonismo a M. oryzae, o isolado CNPAF So 20G de S. oryzae foi inoculado em meio de cultura líquido e incubado à 30 C. Após filtração do meio, sua fração apolar foi extraída e concentrada. Os cristais obtidos foram solubilizados em etanol. A solução foi diluída e adicionada em diferentes proporções em placas de Petri contendo meio BDA, gerando cinco tratamentos: 0,08, 0,15, 0,35, 0,75, 1,0 (μL de solução/mL de meio) que foram inoculados com discos de M. oryzae de cinco mm de diâmetro e incubadas a 25 oC por 10 dias. Foram feitas as medições dos diâmetros das colônias e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5%. Foi observada relação linear inversa entre a proporção de metabólito extracelular apolar produzido por S. oryzae e o crescimento micelial de M. oryzae. Os dados mostraram que a utilização de S. oryzae no controle biológico da brusone pode ser uma estratégia promissora.bitstream/item/57097/1/bp-37.pd

An approach on phytoalexins: function, characterization and biosynthesis in plants of the family Poaceae.

Phytoalexins are compounds that have been studied a few years ago, which present mainly antimicrobial activity. The plants of the family Poaceae are the most geographically widespread and stand out for their economic importance, once they are cereals used as staple food. This family stands out for having a variety of phytoalexins, which can be synthesized via the shikimic acid (the phenylpropanoids), or mevalonic acid, being considered terpenoid phytoalexins. The characterization of these compounds with antimicrobial activity is carried out using chromatographic techniques, and the high-performance liquid chromatography (HPLC) coupled with mass spectrometry are the most efficient methods in this process. This research aimed to present an approach of the function, characterization and biosynthesis of phytoalexins in plants of the family Poaceae

Protocolo de extração de DNA genômico para os principais fungos fitopatogênicos do arroz.

Para obter êxito no uso das técnicas de biologia molecular é fundamental a obtenção de DNA genômico de boa qualidade, livre de impurezas e com a maior integridade possível. O objetivo do trabalho foi estabelecer e padronizar protocolo para a extração de DNA genômico dos patógenos de arroz de maior importância no Brasil, Bipolaris oryzae, Microdochium oryzae, Rhizoctonia solani, Sarocladium oryzae e Magnaporthe oryzae (anamorfo: Pyricularia oryzae), a partir do método de extração de DNA de plantas descrito por Dellaporta et al. (1983). Os 14 isolados fúngicos provenientes da Coleção de Microrganismos Multifuncionais e Fitopatógenos da Embrapa Arroz e Feijão foram cultivados em meio líquido caldo batata dextrose e em meio sólido ágar batata dextrose a 25 ºC, por sete a dez dias, e a extração de DNA genômico foi realizada para as massas miceliais obtidas. Foram obtidas concentrações de DNA superiores a 370 ng/μL, tanto para as amostras com micélio liofilizado macerado quanto para as amostras com micélio raspado da placa, sem liofilizar e sem macerar. As razões entre as absorbâncias a 260 nm e a 280 nm apresentaram-se entre 1,8 e 2,2 para 13 das 14 amostras de DNA extraídas de micélio liofilizado macerado e para 12 das 14 amostras de DNA extraídas do micélio raspado da placa. As razões entre as absorbâncias a 260 nm e a 230 nm estiveram na faixa de 1,8 a 2,2 para seis dos 14 isolados testados com o micélio liofilizado macerado e para três dos 14 isolados testados com micélio raspado da placa. O método de extração de DNA Dellaporta modificado mostrou-se eficiente para a extração de DNA dos fungos patogênicos ao arroz testados.bitstream/item/202578/1/CNPAF-2019-bpd54.pd

A coleção de isolados de Magnaporthe oryzae da Embrapa Arroz e Feijão: uma micoteca para uso na pesquisa com brusone.

As coleções de cultura de microrganismos. A coleção de fitopatógenos da Embrapa Arroz e Feijão. A coleção de Magnaporthe oryzae da Embrapa. O fungo Magnaporthe oryzae (Pyricularia oryzae). Metodologia. Recebimento do material vegetal. Indução da conidiogênese (formação de conídios). Isolamento monospórico. Armazenamento dos isolados. Determinação de patótipos. Registro do isolado na coleção.bitstream/item/27881/1/doc-259.pd

Critérios para avaliação da resistência à mancha parda e relação entre a mancha parda na folha bandeira e a mancha de grãos em genótipos de arroz.

A mancha parda (Bipolaris oryzae) e a mancha de grãos (B. oryzae, Phoma sorghina, Tricochoniella padwickii e Microdochium oryzae, entre outros) ocorrem em todas as regiões produtoras de arroz no mundo. No Brasil ainda não existem variedades comerciais resistentes a estas doenças. Os objetivos deste trabalho foram estabelecer critérios eficientes para avaliação da resistência à mancha parda (MP) e avaliar a relação entre a mancha parda na folha bandeira e a mancha de grãos, em condições de casa de vegetação. A inoculação em casa de vegetação foi realizada em plantas de 12 genótipos no estágio V4, pulverizando-se uma suspensão de conídios de B. oryzae, na concentração 3 x 105 esporos mL-1, e a avaliação sete dias após a inoculação por meio de uma escala de notas de seis graus (0 = planta imune; 1 = resistente; 3 = moderamente resistente; 5 = moderamente suscetível; 7 = suscetível e 9 = altamente suscetível). Foi feita também a contagem do número de lesões/cm2. Em uma segunda etapa do ensaio, os mesmos genótipos foram transplantados para vasos de 5 kg, e inoculados na fase de grão leitoso (R2). Na avaliação feita na fase vegetativa (V4), os genótipos foram classificados em resistentes (nota 1) e moderadamente resistentes (nota 3) destacando-se o genótipo Kanto 51, como moderadamente resistente e os demais como resistentes. Na fase reprodutiva, com inoculação no estágio R2, observou-se a formação de cinco grupos distintos. O genótipo BRA 02535 se classificou como resistente; BRSMG Curinga, Ipeaco e BRS Sertaneja como medianamente resistentes; Kanto 51, BRS Esmeralda e BRS Jaburú como medianamente suscetíveis; Colômbia 1, Zenith, BRS Jaçanã e BRS Tropical como suscetíveis e Moroberekan como altamente suscetível. O mesmo agrupamento foi observado na avaliação feita pela contagem do número de lesões cm-2. Os grãos foram colhidos e avaliados quanto ao índice de mancha de grãos, o qual foi obtido a partir da avaliação da severidade da doença, por meio de análise com escala de quatro graus (0= sem manchas; 1= 1-25%; 2= 26-50%; 4= 51-75% da superfície do grão manchada), se destacando o genótipo BRA 02535, com a menor severidade. Estes mesmos grãos foram submetidos à análise da sanidade realizada pelo método ?Blotter test?, onde se verificou maior incidência de Bipolaris oryzae entre os patógenos, com presença em 46,3% dos grãos dos genótipos avaliados. O segundo patógeno mais frequente foi Cladosporium sp., com percentual de 27,2% dos grãos. A correlação entre a severidade da mancha parda na folha bandeira e o índice de mancha de grão foi alta e positiva (R2=0,70), indicando que a avaliação e a seleção de plantas resistentes à mancha de grãos podem ser feitas com base na severidade de macha parda na folha bandeira através de inoculações com um isolado de B. oryzae. A avaliação da mancha parda na folha bandeira (estágio R2) utilizando escala de notas foi eficiente em discriminar os genótipos. BRA 02535 foi o genótipo mais resistente e Moroberekan foi altamente suscetível à mancha parda do arroz e à mancha de grãos.bitstream/item/97459/1/Bol-Pesq-39.pd

Antimicrobial activity of Lafoensia pacari phenolics-containing extract against common bean phytopathogens.

Lafoensia pacari represents an alternative to control phytopathogens and common bean (Phaseolus vulgaris L.) diseases. This study aimed to investigate the chemical composition of L. pacari phenolics-containing extract obtained from leaves and assess its in vitro and in vivo inhibitory activity against Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, Xanthomonas fuscans subsp. fuscans,Xanthomonas sp., Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum and Macrophomina phaseolina. The microbial susceptibility screening and the extract?s potential to reduce the anthracnose severity and the common bacterial blight were examined. Eleven phenolic compounds were identified, eight of which were described for the first time in L. pacari leaves: gentisic, caffeic, p-coumaric, protocatechuic and vanillic acids, luteolin, naringenin and quercetin. The L. pacari extract completely inhibited bacterial growth at the concentration of 0.62-1.25 %, as well as the mycelial growth of the C. lindemuthianum (BRM 007626) isolate at the concentration of 5 % (v/v).Under greenhouse conditions, the extract led to the control of the common bacterial blight caused by X. axonopodis pv. phaseoli (BRM 25302) in the Pérola bean cultivar and to a low efficiency in the control of anthracnose caused by C. lindemuthianum (BRM 007447) in the IPA 7419 cultivar

Antifungal activity of Origanum vulgare and Rosmarinus officinalis phenolics- containing extracts against Colletotrichum lindemuthianum and in the suppression of anthracnose in common beans.

Oregano (Origanum vulgaris L.) and rosemary (Rosmarinus officinalis L.) may contribute to the control of anthracnose in common bean (Phaseolus vulgaris L.). This study aimed to investigate the chemical composition of both extracts by LC-HRMS and their in vitro and in vivo inhibitory activity against C. lindemuthianum isolates. We evaluated the inhibition of mycelial growth, the inhibition of the conidia germination, the phytotoxicity of the extracts in bean detached leaves and the reduction of severity of anthracnose under greenhouse conditions. Ten phenolics were identified: caffeic, p-coumaric, ferulic, gallic, gentisic, protocatechuic and vanillic acids, and quercetin, luteolin and naringenin. Gentisic acid was not reported for these plants in the consulted literature. We verified the complete inhibition of the mycelium growth of C. lindemuthianum by both extracts at about 2% (oregano) and 3% (rosemary), the inhibition of spore germination was for rosemary: 100% and for oregano: 85%, at a concentration of 3% of extracts and no symptoms of phytotoxicity were observed in common bean leaves treated with them. Both extracts were efficient in reducing the severity of anthracnose caused by C. lindemuthianum BRM 007447 in BRS Campeiro and Perola cultivars, in preventive and curative modes. These extracts have shown promise in the practice of sustainable agriculture, under the experimental conditions used