Determination de la structure d'un heptasaccharide isole du lait de femme: Le lacto-N-fucoheptaose

AbstractA new heptasaccharide, lacto-N-fucoheptaose has been isolated from human milk. It contains D(+)-galactose, D(+)-glucose, L(−)-fucose and N-acetyl-D-(+)-glucosamine in a 3 : 1 : 1 : 2 ratio. The glucose residue is at the reducing end of the oligosaccharide. Data obtained by partial acid hydrolysis, permethylation and enzymic hydrolysis establish the structure of lacto-N-fucoheptaose as follows:

Étude du pouvoir immunomodulateur des bifidobactéries (analyse in vitro des mécanismes moléculaires impliqués)

La modulation de la réponse immunitaire est l'une des hypothèses les plus intéressantes pour expliquer les effets bénéfiques attribués aux bifidobactéries. Cependant les mécanismes moléculaires impliqués dans cette réponse sont peu étudiés. En utilisant des cellules THP-1 différenciées en macrophages et des cellules PBMC, nous avons comparé la capacité de plusieurs souches de bifidobactéries à induire la production de cytokines pro-inflammatoires et antiinflammatoires in vitro. B. bifidum DSM 20082 s'est avérée la souche la plus stimulatrice de la production des cytokines pro-inflammatoires TNF-alpha et IL-8 tandis que la souche B. longum DSM 20219 est la moins inductrice. Nous avons par la suite évalué l'implication et les effets des LTA (composants de la paroi des bifidobactéries) dans cette réponse immunitaire. Après extraction, purification et caractérisation structurale des LTA par RMN, l'étude de l'activité biologique des deux LTA a révélé que les LTA de B. bifidum induisent plus fortement les cytokines pro-inflammatoires TNP-alpha et IL-8 que ceux de B. longum. Ces résultats confortent ceux obtenus avec les bactéries entières. Nous avons par la suite mis en évidence les récepteurs impliqués dans cette réponse. Nous avons démontré pour la première fois que l'activation des réponses cellulaires induites par ce type de LTA est médiée par les récepteurs cellulaires CD14, TLR-2 et TLR-1, et est indépendante du TLR-4. L'analyse du rôle de la LBP a révélé que la réponse liée aux deux LTA est fonction de la concentration en LBP. Une étude menée par résonance plasmonique de surface a montré que les LTA isolés des deux espèces présentaient une affinité similaire pour la LBP. Cependant l'étude des voies de signalisation ainsi que celle des récepteurs de co-stimulation activés en présence des LTA démontrent que les LTA de B. bifidum induisent d'avantage que ceux de B. longum une surexpression des molécules de co-stimulation CD83/CD86 ainsi qu'une augmentation de la phosphorylation du facteur NF-kappa B et de la p38 Kinase dans les cellules THP-1. Nous avons par ailleurs démontré que les LT A de B. bifidum et de B. longum induisent une production de TNF-alpha beaucoup plus faible que les LPS de E. coli. Cependant, l'affInité des LTA de B. bifidum (Kd= 8,92.10-8 M) et de B. longum (Kd= 5,12.10-8 M) pour la LBP est plus forte que celle décrite pour les LPS (Kd =3,5. 10-9 M). En conclusion, les résultats obtenus montrent que la réponse immunitaire induite par les bifidobactéries est liée en partie aux LTA et que les LTA des bifidobactéries pourraient inhiber l'interaction de la LBP avec les LPS par compétition et diminuer ainsi la réponse inflammatoire induite par les LPS.LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF

Métabolisme saccharidique chez les bifidobactéries (approche biomoléculaire des enzymes de phosphorylation)

LILLE1-BU (590092102) / SudocSudocFranceF

Use of biogenic amines to evaluate spoilage in plaice (Pleuronectes platessa) and whiting (Merlangus merlangus)

International audienc

Relevance of matrix effect in determination of biogenic amines in plaice (Pleuronectes platessa) and whiting (Merlangus merlangus)

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Aminopeptidase of

An aminopeptidase capable of degrading synthetic substrates and short peptides has been demonstrated in Eimeria nieschulzi sporulated oocysts. Physico-chemical properties and the classic activator and inhibitory effects have been determined.The inhibitory activity of classic antimalarial drugs has been demonstrated and the study of the inhibitory mechanism by Chloroquine has been further studied.Lastly, the comparison between the aminopeptidase of Eimeria genus parasites and that of Plasmodium has been discussed

Bifidobacterium longum Requires a Fructokinase (Frk; ATP:d-Fructose 6-Phosphotransferase, EC 2.7.1.4) for Fructose Catabolism

Although the ability of Bifidobacterium spp. to grow on fructose as a unique carbon source has been demonstrated, the enzyme(s) needed to incorporate fructose into a catabolic pathway has hitherto not been defined. This work demonstrates that intracellular fructose is metabolized via the fructose-6-P phosphoketolase pathway and suggests that a fructokinase (Frk; EC 2.7.1.4) is the enzyme that is necessary and sufficient for the assimilation of fructose into this catabolic route in Bifidobacterium longum. The B. longum A10C fructokinase-encoding gene (frk) was expressed in Escherichia coli from a pET28 vector with an attached N-terminal histidine tag. The expressed enzyme was purified by affinity chromatography on a Co(2+)-based column, and the pH and temperature optima were determined. A biochemical analysis revealed that Frk displays the same affinity for fructose and ATP (K(m)(fructose) = 0.739 ± 0.18 mM and K(m)(ATP) = 0.756 ± 0.08 mM), is highly specific for d-fructose, and is inhibited by an excess of ATP (>12 mM). It was also found that frk is inducible by fructose and is subject to glucose-mediated repression. Consequently, this work presents the first characterization at the molecular and biochemical level of a fructokinase from a gram-positive bacterium that is highly specific for d-fructose